神经胶质细胞系源性的神经营养因子受体制造技术

本发明专利技术涉及神经胶质细胞系源性神经营养因子（ＧＤＮＦ），一种表现出对中枢神经系统和外周神经系统的各种类型的细胞具有广谱生物学活性的神经营养素。本发明专利技术涉及克隆和表征ＧＤＮＦ的高亲和性受体。该分子被命名为ＧＤＮＦ受体（ＧＤＮＦＲ），因为它是受体系统的第一个已知组分。描述了ＧＤＮＦＲ蛋白产物的核酸和氨基酸序列。在氨基末端发现具有信号肽特征的疏水性域，而羧基末端的第二个疏水性域谵语该受体与细胞膜的连接。缺少跨膜域和胞质区表明ＧＤＮＦＲ需要一个或多个辅助分子以介导跨膜信号发生。ＧＤＮＦＲｍＲＮＡ广泛分布于神经系统和非神经组织中，与发现的ＧＤＮＦ的类似分布一致。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
1．专利
本专利技术涉及神经胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)受体并提供编码GDNF受体(GDNFR)的核酸序列和氨基酸序列。本专利技术亦涉及治疗GDNF应答性疾病的治疗技术。2．专利技术背景神经胶质细胞系源性神经营养因子最初神经胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)是做为增强中脑多巴胺能神经元存活的有效神经营养因子从大鼠B49细胞分离和克隆的(Lin等，Science,260,1130-1132,1993)。近期的研究表明该分子表现出各种各样的其它生物学活性，这些活性对中枢神经系统和外周神经系统的几种类型的神经元有影响。在中枢神经系统(CNS)中，已显示GDNF防止轴突切开术诱导的哺乳动物面部和脊柱的运动神经元死亡(Li等，Proceedings Of The National Academy Of Sciences,U.SA.,92,9771-9775,1995；Oppenheim等，Nature,373,344-346,1995；Yan等，Nature,373,341-344,1995；Henderson等，Science,266,1062-1064,1994；Zurn等，Neuroreport,6,113-118,1994)、并从自然程序细胞死亡拯救发育中的鸟类运动神经元(Oppenheim等，1995见上述)。已显示GDNF局部给药保护黑质多巴胺能神经元免受轴突切开术诱导的变性(Kearns和Gash,Brain Research,672,104-111,1995；Beck等，Nature,373,339-341,1995)或神经毒素诱导的变性(Sauer等，Proceedings Of The NationalAcademy Of Sciences U.S.A.,92,8935-8939,1995；Tomac等，Nature,373,335-339,1995)。另外，已显示GDNF局部给药诱导多巴胺能神经元生长、提高多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺水平、并改进运动行为(Tomac等，1995见上述)。最近，已报道GDNF是大脑去甲肾上腺素能神经元和浦肯野细胞的潜在营养因子。移植异位表达GDNF的成纤维细胞防止6-羟基多巴胺诱导的变性和体内促进成人去甲肾上腺素能神经元的表型(Arenas等，Neuron,15,1465-1473,1995)，而外源应用的GDNF有效地促进胚性浦肯野细胞体外生存和形态分化(Mount等，Proceedings Of TheNational Academy Of Sciences U.S.A.,92,9092-9096,1995)。在外周神经系统中，已显示GDNF促进结节状、睫状和交感神经节神经元以及脊神经节(DRG)和三叉神经节胚胎感觉神经元小群体的生存(Trupp等，Joumal Of Cell Biology,130,137-148,1995；Ebendal等，Journal OfNeuroscience Research,40,276-284,1995；Oppenheim等，1995见上述；Yan等，1995见上述；Henderson等,1994见上述)。亦有报道GDNF增强培养上颈神经节(SCG)神经元中血管活性肠肽和前速激肽原-AmRNA表达，并因此影响SCG神经元表型和诱导束状生长(Trupp等，1995见上述)。已在神经系统的多种不同细胞类型和结构中观察到GDNF表达。在CNS中，通过逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)已在发育中的和成熟的大鼠纹状体(黑质多巴胺能神经支配的主要靶)和其它广泛区域(包括海马、皮层、丘脑、隔膜、小脑、脊髓和延髓)中已观察到GDNF mRNA的表达(Arenas等，见上述1995；Poulsen等，Neuron,13,1245-1252,1994；Spinger等，Experimental Neurology,127,167-170,1994；Stroemberg等，Experimental Neurology,124,401-412,1993；Schaar等，Experimental Neurology,124,368-371,1993)。在人体中，也已在纹状体检测到GDNF转录物，在尾中水平最高而在核壳中水平最低。在海马、皮层和脊髓中亦发现可检测的水平，但在小脑中没有(Schaar等，Experimental Neurology,130,387-393,1994；Sprnger等，1994见上述)。在外周神经中，已在出生后1天大鼠的DRG和SCG、坐骨神经和新生儿许旺细胞的原始培养物中报道GDNF mRNA表达(Trupp等，1995见上述；Hoffer等，Neuroscience Letters,182,107-111,1994；Henderson等，1994见上述；Springer等，1994见上述)。另外，近期研究显示GDNF转录物亦于周围非神经元器官中广泛表达，包括出生后睾丸和肾脏、胚胎须垫、胃和皮肤。可以在胚胎肌肉、肾上腺和肢芽和在出生后肺、肝和卵巢中检测到低水平的表达(Trupp等，1995见上述；Henderson等，1994见上述)。然而，迄今不清楚GDNF非神经元表达的生物学重要性。GDNF蛋白产物的制备和表征的详细描述可以参见于1994年5月23日申请的美国专利申请08/182,183和其原申请(亦可参见于1992年9月17日申请的PCT/US92/07888,WO93/06116和欧洲专利申请92921022.7，公告EP610254号)，其说明书通过引用结合到本文中。在于1995年9月28日申请的未决美国专利申请08/535,681描述了其它GDNF蛋白产物，该申请的说明书通过引用结合到本文中。本文使用的术语“GDNF蛋白产物”包括生物学活性的合成或重组GDNF蛋白和类似物以及其化学修饰衍生物。GDNF类似物包括诸如截短的GDNF蛋白的缺失变异体、以及GDNF的插入和置换变异体。亦包括与人GDNF蛋白基本同源的GDNF蛋白。GDNF疗法GDNF疗法有助于治疗由损害一种或多种类型神经细胞的生存和/或正常功能的疾病引起的神经损害。可以由广泛的各种不同的原因发生这种神经损害。可以由以下原因使一种或多种类型的神经细胞发生神经损害(1)物理损伤，它导致损伤位点附近的轴索突起和/或神经细胞体变性；(2)如在中风中，血液至该神经系统部分的流动暂时或永久停止；(3)有意或意外对诸如治疗肿瘤的化疗剂(例如顺铂)或治疗AIDS的二脱氧胞苷(ddC)的神经毒素暴露；(4)慢性代谢病，例如糖尿病或肾功能障碍；或(5)神经变性疾病，例如由特定神经元群体变性引起的帕金森病、早老性痴呆和肌萎缩性侧素硬化(ALS)。几项研究表明GDNF疗法特别有助于治疗神经变性疾病，例如帕金森病中黑质的多巴胺能神经元变性。帕金森病目前唯一治疗是治标剂，目的在于增加纹状体中多巴胺水平。GDNF疗法的预期效果不仅仅是在纹状体的多巴胺能神经终端产生多巴胺能神经传递增加(这将导致症状减轻)，而且减缓或甚至停止变性过程的进程并修复黑质纹状体路径并恢复其功能。GDNF亦可以用于治疗人类病人多巴胺能神经细胞的其它形式的损害或功能不正常。这种本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离和纯化的蛋白，它包含如图２或４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２或４）描述的氨基酸序列及其类似物，其中该蛋白能够与神经胶质细胞系源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）复合并由此介导细胞对ＧＤＮＦ的应答。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：GM福克斯，文端智，景书谦，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]