一种荧光定量聚合酶链式反应方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种荧光定量ＰＣＲ方法。该方法的荧光ＰＣＲ反应体系中镁离子的浓度为１５－２０ｍＭ，Ｔａｑ酶用量为８－１０单位／反应；在ＰＣＲ反应前测定反应前荧光值；在ＰＣＲ反应后测得反应后荧光值；计算出差值。同时用系列阳性和阴性模板也进行同样的步骤，制成标准曲线；用各样品的荧光增值即可在标准曲线上查出相应的样品中的核酸起始拷贝数。本发明专利技术还提供了一种用于该方法的试剂盒。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于核酸检测的PCR(polymerase chain reaction，聚合酶链式反应)以及用于该方法的试剂盒。具体地说，本专利技术涉及用于核酸检测的荧光定量PCR方法及其试剂盒。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是基于DNA体外扩增技术来检测痕量、微量核酸的方法，已被广泛用于核酸的检测分析和遗传学测试。通过PCR过程，可以准确检出临床样本中与疾病相关的痕量DNA/RNA的存在，明确检查出致病原因，从而指导临床诊断和治疗。进一步的定量PCR结果，则可以更详细的监测临床样本中与疾病相关的痕量DNA/RNA的数量及其变化，对于临床治疗方案的选择、疗效考核有极大的指导意义，尤其适合许多源于DNA/RNA数量变化的疾病的检测和治疗。PCR方法采用一对人工合成的寡聚核苷酸引物及dNTPs为原料，在体外模拟DNA的体外复制过程，用耐高温的DNA聚合酶经多次循环，扩增模板DNA。可以将目的DNA的量扩增106～107倍，再将产物在琼脂糖凝胶上电泳，以溴乙锭(EB)染色体而显示结果。此方法具有灵敏、迅速、准确、方便等特点。但它也有相应的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光定量ＰＣＲ方法，包括以下步骤： ａ、根据待检测靶基因的特异性核酸序列合成一对引物； ｂ、根据待检测靶基因的特异性核酸序列中位于两个引物之间的序列设计、合成一个荧光探针； ｃ、使用步骤ａ中的引物和步骤ｂ中的荧光探针及其它ＰＣＲ成份组成荧光ＰＣＲ反应体系，其中镁离子的浓度为１５－２０ｍＭ，Ｔａｑ酶用量为８－１０单位／反应； ｄ、从待测标本中提取ＤＮＡ，或是提取ＲＮＡ然后逆转录成ｃＤＮＡ，加入步骤ｃ中的反应体系中，经离心混合后测定反应前荧光值； ｅ、将反应管放入ＰＣＲ仪进行２０～５０次循环的ＰＣＲ反应；反应结束后再测定一次反应管中的荧光值；前后两次测值的差值即代...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程钢，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]