一种新的多肽——人Ras结合蛋白66和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人Ｒａｓ结合蛋白６６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人Ｒａｓ结合蛋白６６的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人Ras结合蛋白66，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。一些生长因子与其相应的受体结合后，活化受体本身的酪氨酸蛋白激酶，激酶再磷酸化靶蛋白的酪氨酸残基，再通过一系列的磷酸化级联反应，影响基因的表达。这条通路的特点是不需通过G蛋白，而是通过受体自身的酪氨酸蛋白激酶的激活来完成信号的跨膜传导。已发现的有8种生长因子的受体属于这类信号通路表皮生长因子受体、血小板生长因子受体、肝细胞生长因子受体、神经生长因子受体、血管内皮生长因子受体、胰岛素生长因子受体、胰岛素受体、巨噬细胞集落刺激因子受体。关于活化的酪氨酸蛋白激酶受体是如何把信号传到细胞核内调节基因表达，来影响细胞的增殖和分化，目前了解最清楚的是通过Ras来完成的。Ras蛋白是ras基因的产物，由190个氨基酸组成，分子量为21KD。Ras通过共价键与异戊烯基连接使之锚定在质膜的胞质侧面上。Ras蛋白不是蛋白激酶。当Ras与GTP结合时活化了Ras，而与GDP结合时则钝化了Ras，所以Ras的功能可视为分子开关。当Ras活化以后，位于细胞质中的Raf蛋白趋向到质膜胞内侧并与Ras结合，Ras使Raf活化。Raf是丝/苏氨酸蛋白激酶，它使蛋白上的丝/苏氨酸残基磷酸化。在Raf活化后向下游传递信号的过程中包括了很多丝/苏氨酸残基磷酸化级联反应，其中特别重要的一种是有丝分裂原活化蛋白(MAP)激酶(MAPK)。活化后的MAPK进入细胞核，调节一些基因的转录表达，比如，jun和E1k-1或一些蛋白激酶和其他蛋白质。Raf蛋白有3个高度保守区(CR1，CR2，CR3)，其中CR1结构具有与Ras结合结构域(Ras-binding domain,RBD)虽然到目前为止，对Ras结合结构域的研究还不能清楚的表述其结构，但我们已经获得了不少了解。对Ras结合功能域(RBD)结构的研究表明，其二级结构与泛素蛋白超级折叠结构有类似性，具体的阐述请参考相关文献。(Biochem Biophys Res Commun 1997 Sep18;238(2):425-9);(Proc Natl Acad Sci USA 1996 Feb 20;93(4):1577-81)；(J Biol Chem 1995 Feb 17;270(7):2901-5)从酵母到哺乳动物，Ras蛋白都被证明可以调控肌动蛋白细胞骨架。Ras蛋白家族成员都有富含亮氨酸的重复功能域(LRRs),gelsolin类似功能域被证明与Ras蛋白和肌动蛋白结合有关。(Biochem Biophys Res Commun 1999 Apr2;257(1):111-6)Ras结合蛋白是一类含有Ras结合结构域(Ras-binding domain,RBD)的蛋白，其结构上富含亮氨酸重复功能域(LRRs)，被证明能与Ras蛋白结合而起到调控信号传导的重要作用。在线虫的发育过程中，我们发现一种新的编码Ras结合蛋白的基因sur-8。sur-8功能的减退会导致突变的Ras基因的表达受抑制，并且明显提高mpk-1 MAP激酶和ksr-1突变的显型。sur-8基因可能是作用于ras的下游或是平行，但它却一定是作用于raf的上游。sur-8基因编码了一个富含亮氨酸重复结构的蛋白，SUR-8蛋白与Ras有直接的相互作用，它是一种Ras结合蛋白。(Cell.1998 Jul10;94(1):119-30)Ras蛋白是GTP结合蛋白超级家族成员之一，具有保守的GTP结合基序，GTP结合基序具有广泛的生物学功能，在生物体内调节着细胞的增殖、控制着信号的转导及各种蛋白在体内的表达。这些蛋白的表达异常将导致组织细胞的异常增殖及蛋白的异常表达，从而引发各种与之相关的疾病，如各种恶性肿瘤及癌症、各种发育紊乱症、各种免疫系统疾病等。因此，Ras结合蛋白可以通过调控Ras蛋白的表达水平，从而在生物体内有重要的作用，包括影响组织细胞的异常增殖及蛋白的异常表达过程，从而可用可以控制细胞的生长、分裂、死亡、分化形成组织以及各种生命过程，并可以进一步用于诊断和治疗各种与之相关的疾病，如各种恶性肿瘤及癌症、各种发育紊乱症、各种免疫系统疾病等。根据氨基酸同源比较的结果，本专利技术的多肽被推断鉴定为一种新的人Ras结合蛋白66(HRasBP66)，其同源蛋白是人Ras结合蛋白SUR-8，蛋白号是AF068920。由于如上所述人Ras结合蛋白66蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人Ras结合蛋白66蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人Ras结合蛋白66蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人Ras结合蛋白66以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人Ras结合蛋白66的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人Ras结合蛋白66的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人Ras结合蛋白66的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人Ras结合蛋白66的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人Ras结合蛋白66的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人Ras结合蛋白66异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中60-1868位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2840位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人Ras结合蛋白66蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人Ras结合蛋白66蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人Ｒａｓ结合蛋白６６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]