一种新的多肽——鼠三羧酸载体39和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－鼠三羧酸载体３９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的鼠三羧酸载体３９的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——鼠三羧酸载体39，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。生物通过呼吸作用将摄取的糖、蛋白质、脂肪等营养物质氧化分解；在此过程中经氧化磷酸化方式，将食物中储藏的能量转化为化学能，不断供给生理活动的需要。这些过程主要是在线粒体中进行和完成的。线粒体是细胞中重要而独特的细胞器，它普遍存在于真核细胞中。在线粒体中，通过氧化磷酸化作用进行能量转换，为细胞的各项活动提供了能量。进入线粒体基质空间的运输十分活跃，但多数发生于以此为目的的主动转运促进交换或是通过高度特化的特异性蛋白。这些蛋白被称为转运蛋白或移位酶，其主要功能是对向运输物质，协同它们穿越细胞膜，而这些被运输的物质是十分特异的具相似电荷的反向移动物质，例如ADP与ATP交换。在转运蛋白上转运勿需外部能量供给。一对被转运的物质通过对向运输(交换)方式移动时，至少其中之一必须显著地移向低浓度梯度。因此，一对物质的转运蛋白可通过提供其中一种物质穿过细胞膜所需的较高浓度而被导向任何一方。例如，当琥珀酸输入细胞基质，它将存在于高浓度，而转运蛋白将由浓度梯度引导，把琥珀酸转运进入线粒体。细胞主要成分沿浓度梯度的流出(无论是通过线粒体或质膜)能够推动反向移动物质逆梯度移动，从而一直工作到双方的推动完毕。然而，转运蛋白在该循环中是功能性地促进及复制中间体。在三羧酸循环中，苹果酸自胞质溶胶进入线粒体，提供减少平衡的附加来源，并使葡糖异生机制成为可能。而柠檬酸的流出则提供了一种向外运输乙酰基团的方法。线粒体中的电子传递链要求其正确行使穿过线粒体膜时存在强化学/离子浓度的功能(化学渗透假说)。该梯度不存在或转而影响线粒体梯度的细胞梯度不存在，则会损害电子传递链的功能。电子传递链的功能受损会影响三羧酸循环，倘若丧失足够的三羧酸循环，则患者将丧失90％产生能量的能力，并逐渐进入昏迷状态。线粒体载体蛋白(即转运蛋白)家族中已经序列分析过的成员，其中有四种(ADP/ATP载体，磷酸盐载体，2-氧化戊二酸/苹果酸载体及解偶联蛋白)具有三联内部同源性。而三羧酸载体未显示任何内部同源性，亦无三联结构存在。这是第一种与假定的基因家族相悖的线粒体载体。三羧酸载体，是一种线粒体阴离子转运蛋白，由Chappell及Haarhoff在肝脏线粒体中发现(1967)。柠檬酸，顺乌头酸，苏型-D-异柠檬酸，D-及L-酒石酸，苹果酸，磷酸烯醇丙酮酸，以及琥珀酸是该载体的底物。α-酮戊二酸及丙二酸不被三羧酸载体转运。1,2,3-苯三羧酸(BTA)是该载体最为特异的抑制剂。丁基丙二酸及N-乙基马来酰亚胺由三羧酸载体转运比由二羧酸载体转运对转运二羧酸的抑制能力弱得多，这说明二羧酸与三羧酸载体是不同的分子实体。在胞质溶胶中发生的脂肪酸及胆固醇合成，由乙酰-辅酶A开始。通过三羧酸载体转运到胞质溶胶的柠檬酸衍生出乙酰辅酶A。Coleman及其同事已观察到胆固醇在肿瘤线粒体的三羧酸载体上的激活效应。三羧酸载体亦在葡糖异生与减少通过线粒体膜的等价物的穿梭中发挥作用，因为上述两种反应都要求有效的线粒体转运柠檬酸及磷酸烯醇丙醇酸。尽管在脑及肾线粒体中亦发现三羧酸载体，但在肝脏线粒体中的三羧酸载体被最为广泛地研究，虽然其活性明显较低。心脏线粒体中没有或几乎未显示该载体活性。最初的腺(嘌呤核)苷酸磷酸盐载体与解偶联蛋白序列研究已证实了它们有内部同源性的三联结构存在。这些蛋白的每一种都由长度约为100个氨基酸的三个相关片段组成，每个片段是由亲水膜外回环连接的两个跨膜螺旋。最近克隆的氧化戊二酸/苹果酸载体为载体蛋白家族添加了新成员。而三羧酸载体未显示有内在三联结构，与线粒体阴离子转运蛋白家族也没有同源性。这是第一种与假定的基因家族相悖的线粒体载体。本专利技术的鼠的基因与鼠肝脏线粒体转运蛋白家族中的成员三羧酸载体在蛋白水平上有94％的同一性和97％的相似性。且二者都具有5或6个跨膜区域，具有高度疏水的C-末端及相对亲水的N-末端区域，都未显示与迄今为止分析过的载体家族成员有任何直接的相似性，亦未显示与以前分析过的载体有三联的内部同源性。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为鼠三羧酸载体家族的新成员，命名为鼠三羧酸载体39。并以此推断其与鼠肝脏线粒体三羧酸载体相似，同为该蛋白家族的新成员，并具有相似的生物学功能。由于如上所述鼠三羧酸载体39蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的鼠三羧酸载体39蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新鼠三羧酸载体39蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——鼠三羧酸载体39以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码鼠三羧酸载体39的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码鼠三羧酸载体39的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产鼠三羧酸载体39的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——鼠三羧酸载体39的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——鼠三羧酸载体39的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与鼠三羧酸载体39异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少95％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中114-1082位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2947位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制鼠三羧酸载体39蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与鼠三羧酸载体39蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于鼠三羧酸载体39表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－鼠三羧酸载体３９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]