层析测定方法技术

在标记试剂洗脱量测定区域６，对与测定相关的实质的标记试剂量进行测定，对在测定与被检查溶液中的测定对象物的反应的反应结果测定区域７中所获得的结果，反映上述实质的标记试剂量。这样，可提供一种层析测定方法，该层析测定方法可排除外在的环境因素、被检查溶液的性质的因素、测定操作的误操作等的影响，并使用了具有更高精度和更高可靠性的生物传感器。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，特别是涉及通过利用层析的生物传感器对被检查溶液进行测定的方法的改进。作为利用层析法定性或定量地测定由这样的生物传感器检测的被检查溶液(试样)中的测定成分的代表例，具有免疫层析传感器。该免疫层析传感器具有展开被检查溶液的展开层，上述展开层在其一部分包含有将试剂固化的试剂部分，在另一部分包含有在干燥状态下保持根据被检查溶液展开而可洗脱的标记试剂的标记试剂保持部分，当展开被检查溶液时，在上述试剂固化部分中产生结合，并通过测定其结合量，可测定被检查溶液中的测定成分。作为一般的免疫层析传感器，由添加被检查溶液的被检查溶液添加部分和多个展开层构成，在作为上述展开层的一部分的试剂固化部分上固化抗体，另外，在上述展开层的上述试剂固定部分的上游侧的标记试剂保持部分上以根据上述被检查溶液而可洗脱的干燥状态下保持由金胶体粒子等标记物标记的抗体。当在这样的免疫层析传感器添加必要量的被检查溶液时，被检查溶液一边对上述标记的抗体进行洗脱，一边渗透到多孔质材料中。通过测定在上述试剂固化部分，根据上述被检测溶液而可洗脱的标记抗体与该标记固化部分的抗体结合的标记抗体量，从而可检测出被检查液中的测定成分。另外，该结合的标记抗体量的测定可通过对标记抗体在试剂固定部分结合而残留的金胶体粒子等标记物的量进行目测确认而进行测定。即，根据含在被检测溶液中的抗原(测定成分)的浓度，上述试剂固化部分的显色度(色浓度)会变化，因此检测人员通过目视进行测定。在这里，说明了将抗原抗体反应的夹心面包反应作为测定原理的场合，但除此之外，将竞争反应作为测定原理也可同样在抗体固化部的标记试剂的结合状态下获得测定结果。另外，在上述例中说明了可通过目测并以定性判定来获得测定结果的场合，但为了改善因目测导致的的判定的较低的再现性和个人差别，日本特开平8-334511号公报记载了用CCD来摄影并自动判定上述试验片的上述试剂固化部分的显色度的方法。另外，作为上述测定结果，要求半定量或比其更高精度的判定的场合，有公开于日本特开平10-274624号公报的、利用光学读取装置利用透过方式读取的方法和公开于日本特开平10-274653号公报的、用摄影机等以图像形式取入并进行运算处理的方法。然而，在上述那样的现有的被检查溶液内的测定对象物的测定方法中，通过因上述传感器的干燥状态、传感器中的试剂的保存状况、或传感器制作时的环境引起的传感器中的试剂浓度误差等而产生的因素、或被检查溶液的性质而产生的因素、或测定时的误操作或测定时的环境等产生的因素等，使得根据上述被检查溶液从标记试剂保持部分洗脱的标记抗体的洗脱量变化。与上述试剂固化部分通过洗脱上述标记抗体而结合的标记抗体结合量，若上述标记抗体的洗脱量为一定，则可更为正确而且均匀地测定上述被检查溶液中的测定对象物浓度，但当上述因素使标记抗体的洗脱量变化时，即使上述被检查溶液中的测定对象物浓度为一定，每次测定与试剂固化部分结合的标记抗体量也会变化。即，当进行用于求出定性的测定结果的测定时，在由于上述因素使标记抗体的洗脱量变化的场合，特别是在测定极限高感度附近存在提供错误的测定结果的问题。另外，在上述标记抗体的洗脱量极少的场合，存在不能在上述试剂固化部分获得正确的结合量的问题。另外，在需要进行半定量性或定量性的测定的场合，也存在上述因素导致的标记抗体的洗脱量变化使得试剂固化部分的标记抗体结合量产生变化、只能获得精度较低的测定结果的问题。为此，在上述方法中，定性或半定量测定为极限，不能实现定量测定。本专利技术就是鉴于这样的状况而作出的，其目的在于提供一种可获得高精度的测定结果、在定量测定中也可提高精度的。这样，在根据上述试剂固化部的上述标记试剂结合量检测出被检查溶液内的测定对象物的场合，通过测定对该结合量产生影响的上述标记成分的实质的洗脱量或残余量，可得知固化的上述标记试剂成分结合量的适当性(结合量数据的可靠性)，具有提高测定操作的正确性的效果，另外，通过测定上述洗脱量或测定残存量，相对上述试剂固化部分的上述标记试剂成分的结合量施加与洗脱量相应的修正，从而反映与实际测定相关的上述标记试剂成分量，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的的效果。本专利技术的方案2所述的为方案1所述的，其中，利用上述标记试剂成分的洗脱量或未洗脱的残留量来修正上述试剂固化部的上述标记试剂的结合量。这样，可反映与实际测定相关的上述标记试剂成分量，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的的效果。本专利技术的方案3所述的为方案1或方案2所述的，其中，上述标记试剂成分的洗脱量或未洗脱的残留量的测定利用光学检测器来进行。这样，可更为正确地使上述标记试剂成分的洗脱量数值化，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的的效果。本专利技术的方案4所述的为方案1-方案3中任何一项所述的，其中，上述标记试剂成分的洗脱量的测定在上述试剂固化部以外的部分进行。这样，在不受测定对象成分量的影响的、试剂固化部以外的部分中测定上述标记试剂成分洗脱量，可更为正确地测定标记试剂洗脱量，获得可实现更高精度的利用了生物传感器的的效果。本专利技术的方案5所述的为方案1-方案4中任何一项所述的，其中，上述标记试剂成分的洗脱量的测定，在上述试剂固化部中测定上述标记试剂的结合量之前进行。这样，可预先得知与在上述试剂固化部产生的与结合相关的标记试剂量，提高测定操作的正确性，同时，可使判断更迅速，获得可实现更高精度的、利用了生物传感器的的效果。图2为示出本专利技术实施形式1的免疫层析传感器的、被检查溶液添加后的状态的图，图2(a)示出在添加被检查溶液后的初期状态，图2(b)、(c)示出标记试剂结合量测定时的状态。图3为示出本专利技术实施形式1的的、生物传感器应测定的区域的顺序的一例的透视图，图3(a)为示出最初应测定的区域的图，图3(b)为接下来应测定的区域的图。图4为示出由本专利技术实施形式1的生物传感器测定的hCG的各浓度的吸光度AT+BT与吸光度CT的关系的图。图5为示出由本专利技术实施形式1的生物传感器测定的各hCG浓度的修正前的测定结果(图5(a))与修正后的测定结果(图5(b))的图。图6为示出本专利技术实施形式1的的、生物传感器应测定的区域的顺序的另一例的透视图，图6(a)为示出最初应测定的区域的图，图6(b)为接下来应测定的区域的图。附图说明图1为示出实施本专利技术实施形式1的时所使用的、免疫层析传感器的构成的图。如图1所示，本实施形式1的免疫层析传感器由添加被检查溶液的被检查溶液添加部1、包含标记试剂保持部2和抗体固化部4(试剂固化部)的抗体固化膜3(展开层)、及吸水部5构成。上述被检查溶液添加部1为添加被检查溶液的部分，由被检查溶液来可润湿的材料即无纺布制成。作为用于该被检查溶液添加部1的材料，除无织布以外，可由被检查溶液可润湿的材料例如玻璃纤维滤纸、膜滤器等任意的材料构成。上述标记试剂保持部2为在抗体固化膜3的一部分中保持标记试剂的部分。该标记试剂为通过标记物即金胶体来标记的抗体，可根据上述被检查溶液的渗透而可洗脱那样地在干燥状态下被保持。在本实施形式1中，作为上述标记试剂，使用通过金胶体来标记的抗体，但作为标记物，除金胶体以外，还可选择酶、蛋白质、色素、萤光色素、金属溶胶、非金属溶胶、胶乳等的着色粒子等，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种层析测定方法，是利用生物传感器根据层析法测定包含于上述被检查溶液中的测定成分，而该生物传感器具有将被检查溶液展开的展开层、在上述展开层的一部分上通过将试剂固化而形成的试剂固化部、及在上述展开层的另一部分上通过保持根据上述被检查溶液的展开而可洗脱的标记试剂而形成的标记试剂保持部；其特征在于：通过测定上述试剂固化部的上述标记试剂的结合量，对上述被检查溶液中的测定成分进行定性或定量，同时测定上述标记试剂成分的洗脱量或未洗脱的残存量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：滩冈正刚，高桥三枝，田中宏桥，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]