基因和蛋白质及它们的用途制造技术

本发明专利技术公开了来自脑膜炎奈瑟球菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、编码用于免疫靶物质的一系列基因。由此鉴定的这些基因可以制备疫苗和其他治疗产物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细菌性基因和蛋白质以及它们的用途。本专利技术尤其涉及它们在治疗中的用途，用于免疫和筛选药物。
技术介绍
脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)是脓毒性休克和细菌性脑膜炎中含有的革兰氏阴性(Gram-negative)细菌性病原体。该细菌是在发展国家中细菌性脑膜炎的主要病因，并在非洲和中国引起大规模的流行。在英国，脑膜炎奈瑟球菌是除公路交通事故之外导致儿童死亡的主要原因。该细菌天然地存在于人鼻咽部，然后进入血流，并由此引起严重败血病和脑膜炎。尽管目前抗微生物剂对从体内去除该细菌非常有效，脑膜炎球菌性败血症引起的死亡率仍然非常大。希望提供治疗或预防脑膜炎奈瑟球菌引起的疾病的方法，即免疫方法。专利技术概述本专利技术基于在脑膜炎奈瑟球菌中发现的基因，其产物可位于生物体的外表面，因此可能用作免疫治疗的靶标。本专利技术的一方面是具有任何一种权利要求1确定的核苷酸序列的基因编码的肽，或其同源性或功能性片段。该片段(例如分离的)适于治疗或诊断应用。本专利技术的另一方面是编码上述肽的多核苷酸，其也可用于治疗和诊断。本专利技术的再一方面是可用于筛选潜在抗微生物药物的肽或多核苷酸。本专利技术的又一方面是此处确定的任何产物的用途，用于奈瑟菌属(Neisseria)或革兰氏阴性菌感染相关的疾病的治疗或预防。专利技术详述本专利技术是基于编码位于奈瑟菌属的细胞表面的肽的基因的发现，因此其对于治疗感染的治疗试剂的制备非常有用。应当理解治疗也包括预防性治疗，例如接种。另外，尽管本专利技术的产物主要用于人类病人的感染，但认为兽医上的应用也在本专利技术的范围之内。参考脑膜炎奈瑟球菌描述本专利技术。但是所有的奈瑟球菌菌株以及许多其它革兰氏阴性细菌菌株也可能包括与此处确定的蛋白质或肽具有同一或相似的氨基酸序列的蛋白质或肽。可能含有所述肽的生物体包括但不限于沙门氏菌属(Salmonella)、肠杆菌属(Enterobacter)、克雷白菌属(Klebsiella)、志贺菌属(Shigella)和耶尔森菌属(Yersinia)。优选地，可能在本专利技术的各方面有用的肽与此处所确定的肽具有40％以上的相似性。更优选地，所述肽具有60％以上的序列相似性。最优选地，所述肽具有80％以上的序列相似性，例如95％的相似性。关于此处确定的多核苷酸序列，在本专利技术的各方面有用的有关多核苷酸与此处确定的序列具有40％以上的同一性。更优选地，所述多核苷酸序列具有60％以上的序列同一性。最优选地，所述多核苷酸序列具有80％以上的序列同一性，例如95％的同一性。术语“相似性”和“同一性”本领域已知。使用术语“同一性”指基于在被比较的序列的相应的相同位置之间的同一性匹配的序列比对。术语“相似性”指氨基酸序列之间的比对，不仅考虑相应位置的相同的氨基酸，并考虑相应位置功能相似的氨基酸。因此，多肽序列之间的相似性指序列上相似外，还指功能上相似。可以利用已知的方法计算基因序列之间同一性水平和氨基酸序列之间同一性或相似性水平。关于本专利技术，用于确定同一性和相似性的公开可用的基于计算机的方法包括BLASTP、BALSTN和FASTA(Atschul等人，J.Molec.Biol.，1990；215403-410)，BLASTX程序可获自NCBI，Gap程序获自Genetics Computer Group，Madison WI。利用Gap程序获得此处提供的相似性和同一性水平，利用Gap罚分为12和Gap长度罚分为4来确定氨基酸序列比对，用Gap罚分为50和Gap长度罚分为3来确定多核苷酸序列比对。对本专利技术的基因性质鉴定以后，就可能利用该基因序列在其它微生物中检索相关的基因。这可能通过检索现有的数据库(例如EMBL或GenBank)来进行。此处所述的技术为本领域熟知。但是，特别涉及Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual(1989)以及Ausubel等人，current Protocols in Molecular Biology(1995)，JohnWiley&Sons，Inc.可以利用本领域已知的方法纯化和分离本专利技术的肽或蛋白质。具体地，确定了基因序列以后，就可能利用重组技术在合适的宿主中表达该基因。可以确定活性片段和有关的分子，并可能用于治疗。例如，肽或它们的活性片段可用作疫苗中的抗原性决定簇，以激发免疫应答。它们也可用于抗体制备，用于被动免疫或诊断应用。合适的抗体包括单克隆抗体或其片段，包括单链Fv片段。人源化的抗体也在本专利技术的范围内。抗体的制备方法对本领域技术人员是显而易见的。肽的活性片段是指保持肽的生物学功能的片段。例如，用于激发免疫应答时，片段应具有足够的大小，使该片段产生的抗体能区别该肽和细菌微生物上的其它肽。通常，片段大小为至少30个核苷酸(10个氨基酸)，优选60个核苷酸(20个氨基酸)，最优选大于90个核苷酸(30个氨基酸)。应当理解，除了其它微生物的相关分子外，本专利技术包括对此处确定的肽和多核苷酸所作的不明显改变生物学功能的修饰。遗传密码子的简并性可以由此处所述的多核苷酸产生具有小的碱基改变、但编码相同的肽的多核苷酸，这对本领域技术人员是显而易见的。本专利技术也包括互补的多核苷酸。也包括氨基酸水平的保守性置换，即可以置换不同的酸性或碱性氨基酸而基本不丧失功能。本领域技术人员已知基于确定的肽制备疫苗。可以用合适的载体或佐剂配制疫苗组合物(例如明矾，必须或希望的)，以提供针对感染的有效的免疫。疫苗制剂的制备对技术人员来说是显而易见的。比较普遍地，并且本领域技术人员熟知，为了治疗应用，可以选择合适量的本专利技术活性组分以及合适的载体或赋型剂和给药途径。可以根据已知的标准(例如欲治疗的疾病的性质/严重程度、受试者的类型和/或健康等)选择或决定这些因素。在单独的实施方案中，本专利技术的产物可能用于确定潜在抗微生物药物或检测毒力的筛选分析中。本领域技术人员知道常规的筛选分析，并可以利用本专利技术的产物进行适当方式的改动。例如，本专利技术的产物可能用作潜在药物的靶标，药物失活或结合靶标的能力表明其潜在的抗微生物活性。本专利技术的基因也可能与微生物的毒力有关，因此缺失或失活该基因可能有效产生减毒的(无毒的)微生物。可制备减毒的微生物具有破坏此处确定的任何基因的表达的突变。技术人员应知道破坏特定基因表达的方法。可能使用的技术包括插入失活或基因缺失技术。本专利技术减毒的微生物也可能包括其它在基因上的另外的突变，例如，在此处鉴定的另一种基因上，或在微生物生长所需的单独的基因上，例如，aro突变，或对于沙门菌属来说，在位于WO-A-96/17951确定的SP12区的基因上。减毒的微生物也可能用作载体系统，用于传递异源抗原、治疗性蛋白质或核酸(DNA或RNA)。在该实施方案中，用减毒的微生物来传递异源抗原、蛋白质或核酸到体内的特定位点。可以通过常规技术(包括使用重组构建体，例如包含表达异源抗原或治疗性蛋白质的多核苷酸以及合适的启动子序列的载体)将异源抗原、肽或核酸引入到减毒的微生物中。另外，可将编码异源抗原或蛋白质的基因引入到生物体的基因组中，用内源启动子控制表达。本专利技术的各种产物也可能用于兽医上的应用。本专利技术确定的肽如下肽的确定利用质粒载体pF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽，由包括脑膜炎奈瑟球菌的、ＳＥＱＩＤＮＯＳ．１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、和３３此处确定的任一种核苷酸序列的基因或其革兰氏阴性细菌同系物编码，或其功能性片段，用于治疗或诊 断用途。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JD雷恩，MJG胡格斯，JD圣汤戈罗，
申请(专利权)人：微科学有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]