一种与人类癌细胞及组织胞浆中ＨｎＲＮＰ Ａ２／Ｂ１抗原决定簇特异性结合的单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２中３１－３５、５０－６６、９９－１０８位氨基酸序列，轻链可变区具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４中２４－３８、５４－６０、９３－１００位氨基酸序列。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
,其制备方法及应用的制作方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种单克隆抗体，该单克隆抗体对人类癌细胞及组织胞浆中HnRNP A2/B1抗原有特异反应活性能力。
技术介绍
随着现代工业的发展，环境污染日益加重，肺癌发病率亦逐年上升。在欧美等发达国家肺癌死亡率已占恶性肿瘤之首，而我国近20年来发病率亦显著提高。统计资料表明男性肺癌死亡率增加120.93％，女性增加90.41％，农村增长比城市更为明显(周华清主编肺癌基础研究与临床治疗进展，第1版，北京科学出版社，1999，1-15)。目前肺癌尚无特效的治疗方法，早期发现、早期诊断盒早期治疗使提高生存率的关键。近年来研究发现核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous ouclearRNA-ribonucleoprotein，HnRNP)A2/B1在早期肺癌与癌前病变中过渡表达，且通过痰检即可检出，这为肺癌的早期发现及诊断提供T可能(史艳霞中国肺癌杂志2001年10月第4卷第5期)。HnRNP是一种核内的RNA结合蛋白，它是由30个蛋白质小分子构成的复合物，包括A1-U等30多个小分子。其中，A1、A2、B1、B2、C1、C2为主要核心成分，特别是A、B组为基本核心成分(Annu Rey Biochem.1993，62289-321)。HnRNP复合体结构类似于核糖体，由HnRNP蛋白和RNA以一定程度的特异性结果方式组成。其功能与RNA的转录、外显子剪接、位点的选择相关。在研究中通过RNA Northern分析发现，HnRNP A2/B1在正常的支气管上皮细胞中表达水平低，在肺癌细胞中表达水平很高，在正常支气管上皮细胞初级培养物中的表达是受增生控制的，但在SV40转化的支气管上皮细胞和瘤细胞中则不受此控制。这些现象与临床资料吻合，说明HnRNP A2/B1是肺上皮细胞转化癌变的一个早期标记物。HnRNP A2/B1在胚胎肺中有较高表达，但它在成熟组织中的表达是受限制的，其在癌中的表达形式类似于胚肺生长中所见，这种表达形式在蛋白质水平和信号分子水平是一致的，显示HnRNP A2/B1可能是一种癌生长蛋白(Montuenga LM et a1.Am J Respir Cell Mol Biol，1998；19554)。综上所述，HnRNP A2/B1与肺癌密切相关，若它调节的正常细胞的转录翻译过程失去正常的控制，会导致癌的发生(史艳霞中国肺癌杂志2001年10月第4卷第5期)。由于HnRNP A2/B1是HnRNP与端粒重复序列结合的主要成分，因此检测HnRNP A2/B1在肺癌组织中的表达，研究它与端粒的相互作用，探讨HnRNP A2/B1表达的意义及其能否作为肺癌早期诊断的标志物，具有十分重要的意义。最近，亦有HnRNP A2/B1用于非肺癌的其它肿瘤诊断的报道，如用于口腔癌、食管癌等，均取得了较好的效果(Jph J Cancer Res 999，90(12)1358-1363)。以上结果说明，与端粒酶相似，HnRNP A2/B1是一种组织特异性较差的标志物，它在肿瘤中广泛异常表达，也说明它在肿瘤发生的共同机制中可能起着重要作用。因此，本领域中迫切需要提供一种针对HnRNP A2/B1的抗体及其药物组合物和复合物。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是提供一种与人类癌细胞及组织胞浆中HnRNP A2/B1抗原决定簇特异性结合的小鼠单克隆抗体并获得编码所述抗体之可变区核酸序列。本专利技术另一个目的是产生并维持能与人“HnRNP A2/B1”抗原决定簇相结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，以达到所需要的功能特异性。已知单克隆抗体可被各种不同标记物所标记，以备检测、诊断性分析或治疗应用。在上述各种情况下，标记的单克隆抗体与抗原决定簇部位的结合将成为检定非正常细胞的信号，并可用于治疗。本专利技术的第三个目的是提供一种新的治疗肿瘤的药物靶点及一种抗人类肿瘤药物组合物，药物组合物结构中存在所述的单克隆抗体及偶联在单抗上的各种效应物质。本专利技术的特别应用在于将偶联各种效应物质的单克隆抗体用于表达“HnRNP A2/B1”抗原的非正常细胞的诊断和治疗。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种与人类癌细胞及组织胞浆中HnRNP A2/B1抗原决定簇特异性结合的单克隆抗体，其重链可变区具有SEQ IDNO2中31-35、50-66、99-108位氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO4中24-38、54-60、93-100位氨基酸序列。在一个较佳的实施方案中，该抗体是小鼠抗体。在另一较佳的实施方案中，该单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.0854的杂交瘤细胞产生。在另一较佳的实施方案中，该抗体的重链可变区具有SEQ IDNO2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO4所示的氨基酸序列。本专利技术另一方面提供了一种分离的编码上述抗体的核酸分子。本专利技术另一方面提供了一种表达载体，该表达载体含有上述核酸分子以及与该核酸分子操作性相连的表达调控元件。本专利技术另一方面提供了一种宿主细胞，它包含上述表达载体。本专利技术另一方面提供了一种制备本专利技术抗体的方法，该方法包括a)培养权利要求7所述的宿主细胞，使所述抗体表达；和b)分离纯化获得所述抗体。本专利技术另一方面提供了一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.0854。本专利技术另一方面提供了一种药物组合物，它包含本专利技术上述的单克隆抗体以及药学上可接受的载体。本专利技术另一方面提供了一种抗肿瘤复合物，该复合物含有本专利技术上述的单克隆抗体以及效应物。在一个较佳的实施方案中，所述效应物选自放射性核素、毒素、化疗药、前药、激素、生物反应调节剂、重组融合蛋白、免疫脂质体。这种抗肿瘤复合物可以对肺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌等癌组织进行针对性治疗。本专利技术还涉及本专利技术的单克隆抗体在制备用于治疗肿瘤的药物以及用于检测肿瘤的试剂盒中的应用。附图简述附图说明图1显示了免疫组织化学鉴定试验阳性结果照片，其中图1A为肺鳞癌组织，图1B为肺泡癌组织，图1C为肺腺癌组织。图2显示了腹腔注射标记抗体片段48、72和120小时后的聚集试验断层扫描显象照片，箭头所指为瘤体。图3显示了杂交瘤细胞CGMCC0854的RT-PCR电泳结果图谱。具体实施例方式本专利技术首次获得了对人类非小细胞肺癌等癌组织胞浆内HnRNP A2/B1抗原特异的单克隆抗体(以下简称“HnRNP A2/B1”单克隆抗体)，该抗体的重链可变区具有SEQ ID NO2中31-35、50-66、99-108位氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO4中24-38、54-60、93-100位氨基酸序列。对该单克隆抗体进行抗体类型鉴定，该抗体属于IgG1/K链抗体。本文所用的术语“抗体”包括单克隆抗体(mAb)、嵌合抗体、针对可溶或结合形式被标记的抗体的抗独特型(抗-Id)抗体。术语“抗体”不仅包括完整的分子，还包括其片段，例如Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、和Fv片段等。修饰语“单克隆”表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。本专利技术还提供了一种编码本专利技术抗体的分离的核酸分子。在本说明书中，术语“核酸分子”指聚核苷酸，如脱氧核糖核酸(本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡赓熙，
申请(专利权)人：浙江我武生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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