本发明专利技术公开了一种检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸及其制备方法。本发明专利技术所提供的检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸，包括吸水纸垫、紧密连接于所述吸水纸垫上面的纤维膜、紧密连接于所述纤维膜上面的含有金黄色葡萄球菌蛋白Ａ标记胶体金探针的金标垫和紧密连接于所述金标垫上面的样品垫；所述纤维膜载有相互分离的检测线和质控线，所述检测线为布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原，所述质控线为可和金黄色葡萄球菌蛋白Ａ结合的抗体。本发明专利技术将在临床、突发事件以及基层的布鲁氏菌病的诊断中发挥重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测布鲁氏菌感染的试纸及其制备方法，特别涉及。
技术介绍
布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella sp.)感染引起的人兽共患疾病。布鲁氏菌广泛分布在世界各地，寄生宿主繁多，引起疾病严重，对人类健康和畜牧业发展危害严重。布鲁氏菌是经典的生物战剂，“9.11”以后在美国反恐预案中被列为生物恐怖病原菌。因此除环境和临床标本中布鲁氏菌的快速检出外，布鲁氏菌病(简称布病)的快速诊断也是非常重要的，临床标本中布鲁氏菌的培养和鉴定是重要的感染诊断方法，但布鲁氏菌属于苛养菌，对营养和培养条件要求苛刻，并且耗时较长，有时需要4-7天，使得临床诊断困难。由于布鲁氏菌感染1周后可出现特异血清抗体，因此血清学试验在国内外均被用于布病的临床诊断，常用的血清学试验有虎红试验(RB)、血清凝集实验(SA)、补体结合实验(CF)和ELISA。近年来对于布鲁氏菌病血清学诊断方法的评价有多篇文章发表。在欧盟国家清除布病项目中，葡萄牙、荷兰等国家用不同血清学方法对牛和羊等牧群布鲁氏菌感染情况进行检测，所检测牧群包括已知感染布病的牧群，实验感染牧群，以及未感染牧群，所用方法有RB、CF和ELISA，结果显示以上这些血清学方法的特异性都很高，几乎是100％，只是敏感性不同，分别是95.0％、92.7％和96.8％(Emmerzaal A，deWit JJ，Dijkstra T，etal.The Dutch Brucella abortus monitoring programmefor cattlethe impact of false-positive serological reactions and comparisonof serological tests.Animal Health Service，Deventer，The Netherlands.VetQ 2002 feb；24(1)40-6；Ferreira AC，Cardoso R，Travassos Dias I，Mariano I，etal.Evaluation of a modified Rose Bengal test and an indirectEnzyme-Linked Immunosorbent Assay for the diagnosis of Brucella melitensisinfection in sheep.Vet Res.2003 May-Jun；34(3)297-305)。2002年南非报道了ELISA自动工作站对大量人工免疫、感染动物，以及健康动物血清进行布病检测的结果，其中南非3643份、加拿大625份、德国240份、法国73份、美国195份，该结果与在此之前的CF检测结果比较，特异性分别为99.8％和100％，敏感性分别为94-100％和83.3-88.0％。在834份RB、SA和CF均检出为阳性的血清中，ELISA检出825份(98.9％)，表明ELISA自动工作站可同时为大量布鲁氏菌抗体提供快速、简便、敏感、特异的诊断体系，可以用来替代RB、SA和CF等筛查实验(Paweska JT，Potts AD，HarrisHJ，etal.Validation of an indirectenzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibody againstBrucella abortus in cattle sera using an automated ELISA workstation.Onderstepoort J Vet Res 2002 Mar；69(1)61-77)；2003年意大利分别提取羊布鲁氏菌(ovis)和犬布鲁氏菌(canis)可溶性抗原，用作ELISA包被抗原，检测2328份狗血清中的布氏抗体，canis抗原检出9份阳性，ovis抗原检出15份阳性，其中与canis检出符合的有8份。接着用免疫印迹试验分析两种不同抗原，发现除两种抗原共同有35KDa、32-30KDa、23KDa、20-18KDa和15-12KDa条带外，canis抗原另外有94-80KDa、64-50KDa和28KDa条带，ovis抗原另外有25KDa条带，而ovis的25KDa条带可能与ELISA方法检测布氏血清的敏感性和特异性有关(Ebani VV，CerriD，Fratini F，Bey RF，Andreani E.Serological diagnosis of brucellosis causedby Brucella canis.New Microbiol.2003 Jan；26(1)65-73)；2002年土耳其学者比较了不同血清方法检测人布氏血清的试验184份已知布氏患者(92位急性布病，92份慢性布病)的血清和20份健康人血清作为对照，结果显示，SA、ELISA-IgG和ELISA-IgM对患者的血清布氏检出的阳性率分别为83.7％、4.9％和49.5％，对照人群血清检出均为阴性，而RB对患者血清牛布氏和羊布氏的检出率分别为61.9％和67.9％，对照人群的检测阳性率分别为25％和30％，表明SA是可靠的方法(Sirmatel F，Turker M，Bozkurt AI.Mikrobiyol Bul.2002 Apr；36(2)161-7)。专利技术创造内容本专利技术的目的是提供一种检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸(dipstick试纸)。本专利技术所提供的检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸(dipstick试纸)，包括吸水纸垫、紧密连接于所述吸水纸垫上面的纤维膜、紧密连接于所述纤维膜上面的含有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针的金标垫和紧密连接于所述金标垫上面的样品垫；所述纤维膜载有相互分离的检测线和质控线，所述检测线为布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原，所述质控线为可和金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体。为了使用更加方便，所述吸水纸垫的下面还紧密连接有背板。背板的材料可以是多种多样的，如塑料、树脂等。本专利技术的第二个目的是提供一种制备上述检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸的方法。本专利技术所提供的制备上述检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸的方法，包括以下步骤1)制备布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原；用0.01M pH7.2的PB将该抗原和可与金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体分别稀释至4-6mg/ml和1.5-2.5mg/ml，然后分别喷于纤维膜上形成相互分离的检测线和质控线，37℃干燥2-4小时，然后将其粘贴在吸水纸垫上；2)制备金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针；将该探针溶于0.25％-0.40％四硼酸钠溶液中，使其终浓度为5％-10％，然后将玻璃纤维膜、树脂浸入上述探针溶液中，得到金标垫，在-20--50℃干燥8-12小时后，将其粘贴在步骤1)中得到的粘贴于吸水纸垫上面的喷有相互分离的检测线和质控线的纤维膜上面；3)在步骤2)中的金标垫上面再粘贴样品垫，得到检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸。为了使用更加方便，所述吸水纸垫的下面还粘贴有背板。本专利技术所提供的检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸及其制备方法中，所述布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测布鲁氏菌感染的免疫层析试纸，包括吸水纸垫、紧密连接于所述吸水纸垫上面的纤维膜、紧密连接于所述纤维膜上面的含有金黄色葡萄球菌蛋白Ａ标记胶体金探针的金标垫和紧密连接于所述金标垫上面的样品垫；所述纤维膜载有相互分离的检测线和质控线，所述检测线为布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原，所述质控线为可和金黄色葡萄球菌蛋白Ａ结合的抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：端青，朱虹，檀华，何君，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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