本发明专利技术公开一种布鲁氏菌Omp25蛋白抗原表位多肽及其应用。本发明专利技术的多肽是：其氨基酸序列中含有SEQ ID N0.1，或SEQ ID N0.1所示的序列经过一个或/和几个氨基酸残基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽，也可以是氨基酸序列为SEQ ID N0.1所示的序列和添加有具有布鲁氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。本发明专利技术的SEQ ID N0.1多肽可以构成的重组载体或表达盒或转基因细胞或重组菌。而本发明专利技术所涉及的各多肽可在制备诊断或预防或治疗布鲁氏菌引起的疾病的试剂或药物中的应用。本发明专利技术筛选多肽为化学合成，经刺激DC后可释放出高浓度的IL-4，可作为目的抗原检测检测布鲁氏菌病感染的血清，或制备Omp25蛋白单克隆抗体的抗原。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种多肤，确切讲是一种布鲁氏菌0mp25蛋白抗原表位多肤及其应用。
技术介绍
布鲁氏菌(Brucella),革兰氏阴性兼性细胞内寄生菌，是严重的人兽共患病，广泛 感染家畜、野生动物和人，家畜动物布鲁氏菌主要感染羊、牛和猪，其中对人致病的主要有 马耳他布鲁氏菌和流产布鲁氏菌;布鲁氏菌病感染家畜引起公畜的附睾炎和怀孕家畜的流 产、胎盘炎症和不育;对于人类，布鲁氏菌病课引起急性炎症和许多类似流感感染的症状， 包括波浪热、多汗、背疼和体质虚弱，在一些病人身上，急性临床症状可持续一年W上最终 导致慢性的持续性感染，慢性临床症状包括不规则的发热、关节疼、乏力，并发引起关节炎、 区部末梢神经炎症、脊柱炎、骨髓炎和粘液囊炎，布鲁氏菌病的流行不仅危害着畜牧业的发 展，造成了巨大的经济损失，而且严重威胁着人类的健康和公共卫生安全。 目前，全世界用于预防布鲁氏菌病的有效疫苗均为减毒的活疫苗，各种疫苗的使 用不仅干扰着疫苗免疫和自然感染的鉴别诊断，而且所有的疫苗株不同程度的对人有致病 毒力，甚至有些疫苗对人为强致病力，安全可靠的灭活疫苗研究效果差，不能起到免疫保护 作用。基因工程疫苗的研究近几十年来一直被全世界研究人员所关注和努力，但由于布鲁 氏菌本身免疫抗原多样化，结构复杂，未能发现可用于田间试验的疫苗抗原，寻找存在于各 种布鲁氏菌种间保守存在且具有很好免疫功能的蛋白，研制预防保护力高的亚单位疫苗是 解决运一问题的有效办法。 现有技术中大多数表达工具只能表达一种蛋白，而布鲁氏菌存在多种与免疫相关 的蛋白，研究表明单个蛋白的表达不能形成有效的保护疫苗用抗原，表达制备多个防控作 用的亚单位疫苗成本高，且组合成分复杂；而决定免疫蛋白功能的成分是位于蛋白上微小 的抗原决定簇，对免疫相关蛋白免疫抗原表位的挖掘和鉴定，可W有效的提取布鲁氏菌中 有效的免疫抗原成分，同时也对蛋白的结构和功能研究提供直接的指导，表位抗原成分的 确定，可为检测、预防或治疗能提供良好的抗原组分。因此筛选获得免疫蛋白上运些抗原决 定簇多肤为解决现有技术存在的不足提供了一种思路和途径。
技术实现思路
本专利技术提供一种布鲁氏菌0mp25蛋白抗原表位多肤及其应用。 本专利技术的布鲁氏菌0mp25蛋白抗原表位多肤其氨基酸序列中含有SEQ ID NO. 1。 本专利技术的布鲁氏菌0mp25蛋白抗原表位多肤也可W是其氨基酸序列为SEQ ID NO. 1所示的序列经过一个或/和几个氨基酸残基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肤， 或者是SEQ ID NO. 1所示的序列和添加有具有布鲁氏菌免疫源性功能的衍生的多肤。[000引由沈Q ID NO. 1可构成的重组载体或表达盒或转基因细胞或重组菌。本专利技术所述的多肤可在制备诊断或预防或治疗布鲁氏菌引起的疾病的试剂或药 物中的应用。 布鲁氏菌〇mp25属于外膜蛋白第S组，研究表明其与布鲁氏菌的毒力和细胞调亡 等有关，同时也是布鲁氏菌重要的免疫抗原。本专利技术利用生物信息学的手段，对布鲁氏菌 0mp25免疫蛋白氨基酸的组成和功能进行分析，并模拟构建出蛋白的高级结构模型，综合上 述结果发掘出蛋白上潜在的具有免疫功能的抗原多肤，化学合成运些多肤后，通过实验验 证手段最终获得功能多肤。本专利技术制备出的布鲁氏菌0mp25免疫蛋白多肤为布鲁氏菌病的 检测、疫苗、防控提供新的思路，运也对于提高我国动物布鲁氏菌病的防治技术水平，保证 养殖业健康发展、提供农牧民收入、保证公共卫生和畜产品安全同样具有重大的社会效益。 本专利技术的有益效果为：1)本专利技术筛选多肤为化学合成，而不是活的布鲁氏菌上提 取，因此在生产过程中完全避免了人为的制毒、散毒等安全隐患。2)本专利技术采用生物信息学 工具与试验验证相结合筛选抗原多肤，缩小的筛选抗原多肤的范围，提高了筛选效率。3)本 专利技术在树突状细胞上筛选抗原多肤，由于树突状细胞具有强大的抗原加工和递呈能力，结 果更为接近于动物模型。4)本专利技术所获得的多肤能与布鲁氏菌病阳性血清发生反应，故该 重组蛋白可作为目的抗原检测检测布鲁氏菌病感染的血清，如化ISA方法等。5)本专利技术所表 达的目的蛋白，可直接用于制备0mp25蛋白单克隆抗体的抗原。【附图说明】图1是本专利技术实施例的DC培养图。图視本专利技术流式细胞仪检测DC的表型结果。 图3是本专利技术多肤作用DC后IL-2的分泌量;样本依次为1-6多肤，7:已知抗原表位 对照;8:阴性对照。 图4是本专利技术多肤作用DC后IL-4分泌量;样本依次为1-6:多肤，7:已知抗原表位对 照;8:阴性对照。 图5是本专利技术多肤作用DC后IFN-丫分泌量;样本依次为1-6:多肤，7:已知抗原表位 对照;8:阴性对照。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明。 -、实验材料的制备 1)抗原表位多肤的获得 用生物信息学软件对布鲁氏菌0mp25蛋白氨基酸的组成、性质W及其高级结构进行分 析，结合所有结果，挖掘获得可能具有免疫原性的屯个多肤片段，并委托南京金斯瑞生物科 技有限公司合成，得到各多肤序列如下： (Dnkaktstvgsikp孤w(SEQ ID NO. 3，在后述的内容中为多肤样本1); {^KNYDLAGTTVRNKUKSEQ ID NO. 4,在后述的内容中为多肤样本2); 感GDAGYSWAKKSKDGLE(SEQ ID N0.1，在后述的内容中为多肤样本3); (i)IKLNNGLDGESKF(SEQ ID N0.5，在后述的内容中为多肤样本4); (霞LK化VIVSAA化PFSATAFAADAI犯QPPVPAPVEVAPQYS(SEQ ID N0.6，在后述的内容中 为多肤样本5); 惠;^1^；￥01肥￥1口化146(569 10^.2，在后述的内容中为多肤样本6)。 2 )小鼠骨髓源树突状细胞(DC)的培养 颈椎脱位法处死BabVc小鼠，无菌状态下取股骨和腔骨，浸泡在RPMI-1640培养基中。 用Iml注射器吸取RPMI-1640培养液，从骨干的一端刺入骨髓腔，将骨髓冲洗到一无菌培养 皿中，每根骨头反复4~6遍，收集培养皿中的骨髓细胞悬液，离屯、，1500巧mXlO min。弃去 上清，加入5 ml无菌化iS-N也Cl溶液悬浮细胞溶解红细胞，于室溫下静置2分钟溶解红细胞 后，再次离屯、，1500 rpmX 5 min,弃上清。用RPMI-1640培养液洗涂后将细胞用完全培养基 悬浮，分至6孔培养板中，并在每孔中加入完全培养基至4 ml，再加入rmGM-CSF至终浓度10 ng/ml，化-4终浓度lOng/ml。将细胞培养板放入37°C，含5% C〇2的解箱中培养48~72小时。 轻轻吹打细胞后，连同培养液一起吸去悬浮细胞，仅保留贴壁细胞。加入新鲜的完全培养基 及相同浓度的rmGM-CSF，继续培养至第5天。半量换液，并补足rmGM-CSF;尽量保留悬浮细 胞。继续培养至第7天，用吸管轻轻吹打后收集所有悬浮细胞，即为富集的小鼠骨髓来源的 树突状细胞(Bone marrow-derived den化itic cell, BMDC)。细胞在显微镜下观察期形态 符合骨髓源树突状细胞的特征，参见图1，流式细胞检测细胞表面CDii航体达到70%W上，证 明培养树突状细胞高达本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种布鲁氏菌Omp25蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列中含有SEQ ID NO.1。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曹小安，周继章，李兆才，娄忠子，景志忠，付宝权，尚佑军，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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