抗－ＴＮＦ－α多肽，其含有至少一个抗－ＴＮＦ－α单结构域抗体。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了多肽，其含有针对肿瘤坏死因子α(TNF-α)的一个或多个单结构域抗体。本专利技术还涉及它们用于诊断和治疗的用途。这些抗体可以具有与人框架序列高度同源的框架序列。描述了仅含有肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体或者其与其他药物联合的组合物。
技术介绍
认为肿瘤坏死因子α(TNF-α)在各种疾病，例如，在炎性疾病如类风湿性关节炎、局限性回肠炎、溃疡性结肠炎和多发性硬化中起重要作用。已经很详细地研究了TNF-α和受体(CD120a，CD120b)。生物活性形式的TNF-α是三聚体并且通过邻近亚单位形成的沟对于细胞因子-受体相互作用是重要的。已经开发了拮抗细胞因子的作用的一些策略并且这些策略当前被用于治疗各种疾病状态。对TNF-α具有足够特异性和选择性的TNF-α抑制剂可以是有效的预防或治疗性药物化合物，其用于预防或治疗某些疾病，其中TNF-α被暗示作为病因。已经描述了通过针对TNF-α的抗体治疗毒性休克(EP 486526)、肿瘤退化、细胞毒性抑制(US 6448380，US 6451983，US 6498237)、自身免疫疾病如RA和局限性回肠炎(EP 663836，US 5672347，US 5656272)、移植排斥宿主反应(US 5672347)、细菌性脑膜炎(EP 585705)的方法。然而当前可利用的药物没有一种可以完全有效治疗自身免疫病，并且多数受到严重毒性的限制。此外，开发对这种靶序列具有足够潜能和选择性的新的化学实体(NCE)是极端困难和漫长的过程。另一方面基于抗体的治疗剂具有作为药物的重要潜力，因为对它们的靶标具有异常的特异性和低的内在毒性。此外，当与开发新的化学实体(NCE)相比时，开发时间可以显著缩短。然而，当配体的受体-结合结构域嵌入在沟中时(TNF-α就是这样)，难以针对多聚体蛋白产生常规抗体。本专利技术中描述的重链抗体来自骆驼科，公知该这些抗体具有腔结合倾向(WO 97/49805；Lauwereys等人EMBO J.17，5312，1998))。因此，这种重链抗体内在地适于结合诸如TNF的配体的受体结合结构域。此外，公知这种抗体长期保持稳定，因此，增加了它们的保存期限(Perez等人，Biochemistry，40，74，2001)。此外，使用与哺乳动物细胞培养发酵相比廉价的表达系统，如酵母或其他微生物在发酵罐中“一起”产生这种重链抗体片段(EP 0 698 097)。使用来自诸如小鼠、绵羊、山羊、兔等等来源的抗体和其人源化衍生物治疗需要调节炎症的病症由于几个原因存在问题，。常规抗体在室温下不稳定，并且必须冷冻制备和保存，需要必要的冷冻实验室设备、保存和运输，这消耗了时间和费用。冷冻有时在发展中国家中是不可行的。此外，所述抗体的生产或者小规模产生是昂贵的，因为表达完整和由活性的抗体所需的哺乳动物细胞系统需要时间和设备的高水平支持，并且产率非常低。此外，常规抗体的大尺寸将限制，例如，发炎组织部位的组织渗透。此外，常规抗体的结合活性依赖于pH，并因此不适于用于通常生理pH范围之外的环境中诸如，例如，治疗胃出血、胃手术。而且，常规抗体在低或高pH下不稳定并因此不适于经口施用。然而，已经阐明骆驼科抗体抗严酷的条件，如极端pH、变性试剂和高温(Dumoulin等人，Protein Science11，500，2002)，因此使得它们适于通过经口施用递送。此外，常规抗体具有结合活性，其取决于温度，因此不适于用于在生物活性温度范围(例如，37±20℃)之外的温度下实施的测定或试剂盒。多肽治疗剂，尤其基于抗体的治疗剂具有作为药物的重要潜力，因为它们具有对它们的靶标的异常特异性和低的内在毒性。然而，技术人员公知已得到的针对治疗上有用的靶标的抗体需要额外的修饰以准备将其用于人的治疗，从而避免当施用于人时在人个体中发生的不想要的免疫学反应。该修饰过程通常被称为“人源化”。技术人员公知在不同于人的物种产生的抗体需要人源化以便使得该抗体可用于人的抗体治疗((1)CDR嫁接Protein Design LabsUS 6180370，US 5693761；Genentech US6054297；Celltech460167，EP 626390，US 5859205；(2)贴面(veneering)XomaUS 5869619，US 5766886，US 5821123)。需要一种产生抗体的方法，该方法避免了对实质人源化的需要，或者完全不需要人源化。需要一类新的抗体，这些抗体具有明确的框架区或者氨基酸残基并且可被施用于人受试者而不需要实质人源化，或者根本不需要人源化。常规抗体的另一个重要的缺陷是它们是复杂的大分子并且因此相对不稳定，并且它们对蛋白酶降解敏感。这意味着常规抗体药物不能经口、舌下、局部、鼻、阴道、直肠或者吸入施用，因为它们不能抵抗这些部位的低pH、这些部位和血液中蛋白酶的作用和/或因为它们的大尺寸。它们必须通过注射(静脉内、皮下，等)施用以克服这些问题的若干问题。通过注射施用需要专家训练以便正确和安全地使用皮下注射器或针。还需要无菌设备、治疗性多肽的液体制剂、所述多肽无菌和稳定形式的小瓶包装，和对于受试者，需要针进入的适合部位。此外，在接受注射前和注射时受试者通常经历生理和心理上的压力。因此，需要一种递送治疗多肽的方法，该方法避免了对注射的需要，该方法不仅节省费用/时间，而且对受试者更方便和更舒适。基于单结构域的抗体治疗具有作为药物的重要潜力，因为它们具有对它们的靶标的异常特异性和低的内在毒性。然而，进一步提高它们的内在和功能亲合力导致对患者的许多益处，如更小的治疗剂量、更快的治疗，和更小的副作用。专利技术目的本专利技术的目的是提供包含结合TNF-α的一个或多个单结构域抗体的多肽、所述多肽的同系物、所述多肽的同系物的功能部分。所述多肽结合TNF-α时改变TNF-α的生物学活性。所述多肽可以结合到TNF-α的受体-结合沟，或者可以不结合到受体结合沟中。这种多肽是单结构域抗体。本专利技术的另一个目的是提供单结构域抗体，其可以是本领域中任一种单结构域抗体或者任一将来的单结构域抗体。实例包括，但不限于，重链抗体、天然没有轻链的抗体、从常规4-链抗体衍生的单结构域抗体、工程化抗体和单结构域支架，其不同于从抗体衍生的那些支架。根据本专利技术的一个方面，如此处所用的单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，其已知为缺少轻链的重链抗体(WO 9404678)。为了阐明，从缺少轻链的重链抗体衍生的该可变结构域被称为VHH或者nanobody以将其与四链免疫球蛋白的常规VH区别。这种VHH分子可以来自在骆驼科(Camelidae)物种，例如在骆驼、美洲驼、单峰骆驼、羊驼和驮马中产生的抗体。本专利技术的另一目的是提供静脉内、皮下、经口、舌下、局部、经鼻、阴道、直肠或通过吸入施用抗-TNF-α多肽的方法。本专利技术的另一目的是增强单价单结构域抗体的结合亲合力。专利技术概述本专利技术的一个实施方案是含有至少一种抗-TNF-α单结构域抗体的抗TNF-α多肽。本专利技术的另一实施方案是如上描述的抗TNF-α多肽，其中单结构域抗体相应于SEQ ID NOs1到16和79到84任一个代表的序列。本专利技术的另一实施方案是如上描述的抗TNF-α多肽，其还本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：卡伦·西莱恩克，马克·劳韦里斯，汉斯·德哈德，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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