预测５－羟色胺再摄取抑制剂类药物作用效果的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种预测５－羟色胺再摄取抑制剂类药物作用效果的试剂盒，含有下述组分：（１）红细胞裂解液；（２）白细胞裂解液；（３）蛋白沉淀液；（４）核酸储存液；（５）ＰＣＲ反应混合液（含ＭｇＣｌ２、ｄＮＴＰ、ＰＣＲ扩增引物和内标）；（６）ＤＮＡ聚合酶；（７）阳性质控；（８）阴性对照；（９）内切酶缓冲体系；（１０）限制性内切酶；（１１）ＰＣＲ用水；（１２）１０×电泳上样缓冲液：０．２５％溴酚兰，４０％（ｗ／ｖ）蔗糖水溶液。本发明专利技术通过提取生物样品中的基因组ＤＮＡ，经过聚合酶链式反应－限制性酶切片段多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析方法，检测个体生物样品中ＨＴＲ１Ａ基因的多态性情况，预测５－羟色胺再摄取抑制剂药物的作用效果。属于医药生物技术领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种预测5-羟色胺再摄取抑制剂类药物作用效果的试剂盒，属于医药生物

技术介绍
抑郁症是最常见的精神障碍之一，对于抑郁症的治疗，目前最常用的方法仍然是药物治疗。抗抑郁药效应主要与这类药物对5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)系统的作用有关。抗抑郁药种类繁多，主要有以下几类5-羟色胺再摄取抑制剂；去甲肾上腺素再摄取抑制剂；5-羟色胺/去甲肾上腺素双重再摄取抑制剂；三环抗抑郁药；其他环类抗抑郁药；单胺氧化酶抑制剂(经典/选择性)；其他无法归类的药物。5-羟色胺再摄取抑制剂中包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(selective serotonin reuptake inhibitors，SSRI)和同时作用于其他途径的抗抑郁药两类。SSRI由于其药理活性的高度选择性，临床使用的安全性较好，不良反应较少。抗抑郁药的起效并非即刻性的，一般需要在服药2～4周方能出现实质性的临床改善，这给临床治疗选药，疗效判定和换用药物等带来严重的困难。同时，抗抑郁药在起效之前会由于其固有的药理学特性，带来一系列不良反应，包括加重失眠、焦虑、激越，甚至会由于抑郁症临床症状改善时间上的不一致导致一过性自杀危险增加。目前在临床上最常应用的抗抑郁药是以氟西汀为代表的SSRI类药物包括氟西汀(fluoxetine)、帕罗西汀(paroxetine)、舍曲林(sertralin)、西酞普兰(citalopram)、氟伏沙明(fluvoxamine)和左旋西酞普兰(escitalopram)。SSRI的主要作用机制是选择性阻断中枢5-羟色胺(5-HT)神经元突触前膜5-HT的再摄取，进而升高突触间隙中可资利用的5-HT水平。长期用药过程中，在服药约10～14天左右，会出现某些5-HT受体密度/活性改变(如功能下调或上调)。这些受体功能在药物治疗过程中的变化，可能决定了抗抑郁治疗的效果。SSRI类药物的抗抑郁有效率一般在50％～70％。其主要不良反应包括一过性焦虑、失眠、激越加重，胃肠道不良反应，性功能障碍等。由于抗抑郁药并非对于每个抑郁症病人都有良好的疗效，而且存在起效时间上的延搁，但在临床上医生仍只能凭经验选择药物，一般需要治疗观察至少4～6周后才能确定所选择药物的治疗是否有效，此后，对于疗效不好的病人再凭借经验换用第二个药物，再观察4～6周，所有实际上有大约30％～40％的病人不能及时得到最佳药物治疗，其后果是延误治疗时间，给病人带来痛苦，导致更多的不良反应，尤其可能因为抑郁症状没有较快较彻底地克服而加重病人的自杀危险性。除SSRI类药物之外，还有一些抗抑郁药或具有抗抑郁作用的其他类药物的抗抑郁疗效也与其对5-HT再摄取的抑制作用或经由其他方式影响5-HT系统功能有关。这些药物包括(但不限于)万拉法新(venlafaxine)，米氮平(mirtazapine)，曲唑酮(trazodone)，度洛西汀(duloxetine)，minacipran，tianeptine，氯米帕明(clomipramine)，阿米替林(amitriptyline)，多虑平(doxepine)，多塞平(doxepine)，米帕明(imipramine)，丁螺环酮(buspirone)。遗传背景不仅可能影响疾病的发生，而且影响药物疗效的个体差异。随着药物遗传学研究的不断深入和发展，在未来抑郁症的药物治疗中，将可能利用遗传学筛查方法，实现因人而异的个体化临床用药目标，有效避免不合理用药、错误用药乃至滥用药物倾向，减少用于治疗药物不良反应的费用，避免无效用药造成的浪费。药物治疗的有效性和安全性极其重要，很多人在有效性方面属于无效用药，或者疗效较差；而在用药安全性方面，会出现各种不良反应、毒副作用甚至导致死亡。除外药物本身的原因以及患者的性别、年龄、其他疾病相互作用、妊娠、饮食状况和生活环境等，遗传因素在个体化医疗、特别是个体化用药方面起着极其重要的作用。临床上用于预测药物疗效的方法常常仅仅凭借医生的临床经验，严格遵守治疗指南，根据患者常规的临床检查和既往治疗，经验性地选择一种药物治疗，治疗一段时期之后，根据病情变化和相应的检查判断疗效，如果提示疗效不佳或副作用较大时才会考虑调整药物治疗，即改变药物剂量或者联合或更换其它药物治疗。这种预测方法具有明显的滞后性及盲目性，并且不能真正预测某一药物的疗效，更不能给医生选择药物提供准确的个体化信息。因此，基于目前临床药物疗效的预测方法，医生在用药时仍不能根据患者个体差异进行药物及其剂量的选择以及药物的配伍，不能迅速有效地控制或者治疗疾病并且降低或避免毒副作用的发生，而且不同程度地增加患者的痛苦和经济负担。药物疗效和副作用的个体差异与遗传因素有关。药物遗传多态性表现为药物代谢酶的多态性、药物作用受体的多态性和药物靶标的多态性等。这些多态性的存在可能导致许多药物治疗中药效和不良反应的个体差异Science，2000；2871977-1978J ClinInvest，1994；941872-1882。药物基因组学是继人类基因组计划完成之后出现的功能基因组学研究的一个分支，是基于基因多态性的DNA检测手段，如对一些疾病相关基因的单核苷酸多态性(SNP)检测，或对特定药物具有敏感性或抵抗性的患病人群进行SNP检测，能够预测患者将对某一特定的药物产生怎样的反应(疗效或副作用方面等)，从而解决药物治疗的安全和有效两个问题，进而优选出最佳的治疗方法，指导医生为患者拟定个体化的给药方案；另外，还有助于减少临床用药不当，提高疗效，降低毒副作用，降低医疗费用，具有极高的社会效益和卫生经济学意义。SNP是指不同个体间在基因水平上的单核苷酸变异，平均每1000对碱基出现一个SNP，两个无关个体间大约有300万个SNP。SNP在个体化用药上可谓是举足轻重。影响药物有效性的主要因素包括药物前体因代谢而激活，药物与靶细胞的结合能力，药物与药靶的结合和活性，活性药物被代谢、降解和排出；而安全性则取决于药物在体内的代谢、降解和排出环节以及药物在体内的非特异性结合和活性。不同个体在其中每一环节SNP的不同，最终都可能会造成对同一药物反应的差异，有时由于这种个体间遗传学上的差别，同一药物在不同个体内的效果和毒副作用的差异可以达到300倍之多。已经证实抑郁症与遗传因素存在密切的关系。目前一致认为抑郁症为由遗传和环境交互作用所引起的一类复杂疾病，其中遗传因素决定了某些人具有易感性，在环境因素作用下导致最终疾病的发作。近年来关于抑郁症的抗抑郁药物疗效的药物基因组学研究较多，主要集中于药物代谢酶基因、与药物作用受体有关的基因、与抑郁症相关的各神经递质的合成、代谢、受体等生物学通路基因。口服氟西汀经肠道吸收后主要在肝脏代谢，经过CYP450 2D6同功酶代谢生成去甲氟西汀。去甲氟西汀具有与氟西汀类似的药理学活性，但水溶性更强，容易经过肾脏排泄。编码P450酶2D6的基因位于22号常染色体，目前已发现的等位基因从2D6-1到2D6-44。在欧美白人中，最常见的是2D6-3A、2D6-4A、2D6-4B、2D6-5和2D6-6A。这些突变基因使酶的活性消失，并因此决定为慢代谢表型。中国人慢代谢型主要是2D6基因缺失，慢代谢型频率很低，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预测５－羟色胺再摄取抑制剂类药物作用效果的试剂盒，含有下述组分：（１）红细胞裂解液：ＮＨ↓［４］Ｃｌ，ＫＨＣＯ↓［３］，ＥＤＴＡ；（２）白细胞裂解液：蛋白酶Ｋ、ＲＮａｓｅＡ、ＮａＣｌ、Ｔｒｉｓ、ＥＤＴＡ、ＳＤＳ；（３）蛋白沉淀液：７．５Ｍ乙酸胺（ｐＨ７．４）；（４）核酸储存液：１Ｍ三羟甲基氨基甲烷－盐酸（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ８．０）；（５）２×ＰＣＲ反应混合液：１．０ｍｌ［１００ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ，１００ｍＭＫＣｌ，ｐＨ８．３（２０℃）］；５．０ｕＭＭｇＣｌ２；各０．４ｍＭｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＴＴＰ，无菌双蒸水配制，ｐＨ７．０；ＨＴＲ１Ａ基因的多态性位点基因型检测引物；（６）ＴａｑＤＮＡ聚合酶（５Ｕ／ｕｌ）：保存缓冲液：２０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０），１００ｍＭＫＣｌ，０．１ｍＭＥＤＴＡ，１ｍＭＤＴＴ，０．５％ＮＰ４０，０．５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０，５０％甘油；（７）阳性质控：含有ＨＴＲ１Ａ基因的多态性位点杂合基因型个体全血标本，或者含有ＨＴＲ１Ａ基因的多态性位点杂合型的质粒；（８）阴性对照：经ＤＮＡａｓｅＩ处理的双蒸水；（９）内切酶缓冲体系（１０×）；（１０）限制性内切酶；（１１）ＰＣＲ用水；（１２）６×电泳上样缓冲液：０．２５％溴酚兰，４０％（ｗ／ｖ）蔗糖水溶液。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平，王玉，洪秀梅，张善春，王滨燕，王燕，徐希平，
申请(专利权)人：北京华安佛医药研究中心有限公司，安徽省生物医学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]