本发明专利技术公开了１０－１００万Ｄａ碱溶性香菇多糖提取、分离、纯化新工艺及分子量测定的方法，以香菇子实体为原料，通过粉碎、碱水浸提、过滤、浓缩、洗涤、级分、低温干燥得粗品、粗品溶解、离心、ＤＥＡＥ纤维素柱除杂纯化、离子交换树脂吸附脱色、过滤通过不同分子量的膜包超滤浓缩。采用ＧＰＣ激光光散射凝胶色谱仪测定分子量，按测定分子量的范围，再分别装入透析袋透析、冻干得分子量为１０－１００万Ｄａ含量为９８％以上的各组分碱溶性香菇多糖。本方法工艺先进、产品质量稳定、纯度高、目标明确、易工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
碱瘠性香恭多llli取、分离、纯皿分子量的翻定拨术领域本专利技术是对现有香菇多糖提取工艺的改进，公开了碱溶性番菇多 糖提取、分离、纯化新工艺及分子量测定的新方法。以香菇子实体为 原料进行提取、分离、纯化、涉及天然生物反应调节剂的制备及其检 測方法。
技术介绍
香菇中富含蛋白质、杂多糖和香菇多糖等多种成分，是我国传统 的中药材，具有补肝益气的作用。香菇多糖(英文名Lentinan),其 —级餘构是e-(卜3)葡萄糖为主链，0- (1-6)葡萄糖为側链的葡 聚糖:，是一种免疫调节型抗肿癯辅助药物。1965年日本千原吴郎发 现^t抗肿瘤活性后，各国科学家就对香菇多糖进行广泛研究，发现 香燕多糖不但治疗多种免疫缺乏疾病，如慢性病毒性肝炎和由病毒引 起的慢性疾病，还能对多种肿癯有较强的抑制和治疗作用。1985年 曰本首先开发成功注射用香菇多糖作为抗肿瘤新药上市。我国1988 年开始进口日本味之素的香菇多糖，并用于临床。香菇多糖提取工艺十分复杂，香菇除含有多糖物质外，还含有一 定量蛋白质、胶质、粗纤维及脂肪等成分。目前常采用的方法是沸水 浸提乙醇析出的方法，而这样提取多糖的纯度并不高，仍需经过一系 列后续处理才能使多糖含量达到90%左右。此提取步骤不仅耗费了大量的乙醇。而且得到的香菇多糖含量并不高,遣成后续工艺处理复杂。有关香菇多糖的分子量测定，目前我国均采用GPC凝胶色谱(示差仪)测定a由于所采用的凝胶柱型号各不相同，对分子量的测定误差很大， 无法准确判断香菇多糖原料是否合格。为了使香菇多糖原料分子量测定更准确，我们用GPC凝胶色谱仪激光光散射的方法来测定香菇多糖的分子量，该方法是通过香薛多糖粒径来判断分子量的大小，再计算 出重均分子量。具有测定分子量简便、准确率高、无霈对照品，即可 测出香菇多糖样品的准确分子量。
技术实现思路
本专利技术目的就是为了寻找一种新的较为易于生产、成本低、目标 明确、检测方便、可行的碱溶性番菇多糖的提取、分离、纯化新工艺 及其分子量测定方法。香菇多糖提取、分离、纯化具体过程通过下列步骤实施-千香菇一粉碎一碱提3次(40-50t:) 一浓缩一碱洗—水洗—级 分一低温千燥一粗品溶解—离心一上淸液上DEAE纤维素纯化，离子 交换树脂柱吸附一过滤一超滤膜浓縮一测分子量一透析，透析物冷 冻干燥 操作工艺l.取干香薛子实体粉碎后，加8—10倍，0.3—lmol/LN幼H溶液、温 控30-50 r搅拌提取3次。每次3—4小时。合并提取液，滤去不 溶物、浓缩至原液体积8—10分之一。用0.3mol/LNa0H浓縮液洗涤2次再用同样体积去离子水洗涤2次浓縮液，用茚三酮检测，基本无 残余蛋白质,将洗涤后的浓缩液在快速搅拌下加不同含量的乙醇进行 级分，将级分粘稠物低温干燥，得粗品，将粗品溶解后离心，取上层 清液上DME纤维素柱除杂纯化，用0.15TOl/LNaoH洗脱，合并洗脱 液，上离子交换树脂柱吸附脱色，合并洗脱液，过滤，按设定分子量 膜包分别超滤浓缩，用GPC激光光散射凝胶色谱仪测定分子量，按分 子量范围，分别透析、冻干得各组份碱溶性香菇多糖。经检测分子量 为40^80万Da的碱溶性香菇多糖其外观、吸湿性、溶解度、比旋度、 熔点、特性粘度、酸碱度、千燥失重、分子量及分子量分布、纯度、 含量、红外吸收光谱(见附图说明图1、图2)均与国家标准WS广(X-032)-2004Z 香兹多糖的规定一致。提取、分离、纯化番菇多糖具体实施方式实施例1:取合格的干香菇原料8公斤，粉碎后，置于带夹套的反应锅中。 加入0.5mol/LNaoH的碱溶液80公斤加热至40 t ，保温搅拌4小时, 过滤，残渣再用上述方法提取2次。合并全部溶液，浓縮至原体积的 十分之一，再加人0. 3mol/LNa0H 2倍于浓縮液的碱液浓缩洗涤2次， 再用同样体积去离子水浓缩洗涤2次，洗涤后的浓缩液用茚三酮检测 反应不显蓝紫色。将洗涤后的浓缩液在快速搅拌下用50-70%的乙醇 进行级分，继续搅拌15分钟后静置4小时，沉淀产生、倾去上清液, 沉淀物再用80-90%的酒精溶解搅拌15分钟后静置4小时,沉淀产生，沉淀物在50"低温干燥得无蛋白残留碱溶性番菇多糖粗品400克。将香菇多糖粗品按1: 100比例溶于0.15mol/L的碱溶液中溶解。 溶解后离心，取上清液，上DEAE纤维素柱除杂化，上离子交换树脂 柱吸附脱色，洗脱液过滤后分别用5-30万分子量膜包依次浓缩至最 小体积，用GPC激光光散射凝胶色谱仪测定分子量，将不同级别分子 量的浓缩液分别装入透析袋，用去离子水透析48小时后冻干，得含 量为9挑以上。重均分子量为10万一,万Da的各组份香菇多糖共 20克。实施例2:取合格的干香菇原料10公斤，粉碎后，置于带夹套的反应锅中。 加入0.5mol/LnaoH的碱溶液100公斤加热至40匸，保温搅拌4小 时，过滤，残渣再用上述方法提取2次。合并全部溶液，浓缩至原体 积的十分之一，再加人0.3mol/L Na0H 2倍于浓缩液的碱液浓缩洗涤 2次，再用同样体积去离子水浓縮洗绦2次，洗涤后的浓縮液用茚三 酮检测反应不显蓝紫色。将诜涤后的浓縮液在快速搅拌下用50-70% 的乙醇进行级分，继续搅拌15分钟后静置4小时，沉淀产生、倾去 上清液，沉淀物再用80-90%的酒精溶解携拌15分钟后静置4小时， 沉淀产生，沉淀物在50TC低温干燥得无蛋白残留璩溶fe香菇多糖粗 品500克。将番菇多糖粗品按i: 100比例溶于0.15mol/L的碱溶液中溶解。 溶解后离心，取上清液，上腿AE纤维素柱除杂化，上离子交换树脂柱吸附脱色，洗脱液过滤后分别用5-30万分子量膜包依次浓缩至最 小体积，用GPC激光光散射凝胶色谱仪测定分子量，将不同级别分子 量的浓縮液分别装入透析袋，用去离子水透析48小时后冻干，得含量为雜%以上。重均分子量为10万一IOO万Da的各组份眷菇多糖共 25克。实施例3:取合格的千香菇原料13公斤，粉碎后，置于带夹套的反应锅中， 加入0.5mol/LimoH的碱溶液130公斤加热至40 保温搅拌4小 时，过滤，残渣再用上述方法提取2次，合并全部溶液，浓缩至原体 积的十分之一，再加人0.3mol/L NaOH 2倍于浓縮液的碱液浓縮洗涤 2次，再用同样体积去离子水浓缩洗涤2次，洗涤后的浓缩液用茚三 醣检测反应不显蓝紫色。将洗涤后的浓缩液在快速揽拌下用50-70% 的乙醇进行级分，继续搅拌15分钟后静置4小时，沉淀产生、倾去 上清液，沉淀物再用80-90%的酒精溶解搅拌15分钟后静置4小时， 沉淀产生，沉淀物在501C低温千燥得无蛋白残留碱溶性香菇多糖粗 品650克。将香菇多糖粗品按1: 100比例溶于0.15moi/L的碱溶液中溶解。 溶解后离心，取上清液，上DEAE纤维素柱除杂化，上离子交换树脂 柱吸附脱色，洗脱液过滤后分别用5-30万分子量膜包依次浓縮至最 小体积，用GPC激光光散射凝胶色谱仪测定分子量，将不同级别分子量的浓縮液分别装入透析袋，用去离子水透析48小时后冻干，得含 量为98%以上。重均分子量为10万一IOO万Da的各组份香菇多糖共 32克。实施例4:取合格的千香菇原料12公斤，粉碎后，置于带夹套的反应锅中。 加入0.5mol/LnaoH的碱本文档来自技高网...
【技术保护点】
碱溶性香菇多糖提取、分离、纯化新工艺及分子量的测定方法，其特征在于：取干香菇子实体粉碎后，加水加热浸提、过滤、浓缩、洗涤、级分、低温干燥、溶解、离心、ＤＥＡＥ纤维素除杂纯化、离子交换树脂柱吸附脱色、过滤、超滤、浓缩，用ＧＰＣ凝胶色谱仪测定分子量，按测定分子量的范围透析、冻干即得本专利技术产物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金文准，王务鼎，王卫健，周晓海，胡荣大，
申请(专利权)人：金文准，王务鼎，王卫健，周晓海，胡荣大，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]
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