一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒，涉及肿瘤分子诊断技术领域。发明专利技术人研究发现，植物同源结构域锌指蛋白20(PHF20)在乳腺癌中高表达。而用shRNA基因沉默的方法对其下调后，对于乳腺癌细胞的成瘤都有明显的抑制作用。这表明PHF20除作为乳腺癌标志物外还可以作为药物调控的靶标。本发明专利技术为乳腺癌治疗和诊断提供了新生物标志物。PHF20作为乳腺癌的肿瘤标志物可用于制备乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒，具有重要的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒
本专利技术涉及肿瘤分子诊断
，尤其涉及一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物及应用、试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是在女性中常见的恶性肿瘤之一，在美国等西方国家约有11％的女性患有乳腺癌。在我国，随着城市化的扩大和生活方式的改变，乳腺癌患者以每年160万的速度在快速增加，每年因乳腺癌死亡的患者高达120万。乳腺癌患者在接受治疗后死亡的主要原因是肿瘤的耐药与转移，而癌症干细胞具有抵抗放疗和化疗的特点，因此被认为是肿瘤耐药和转移从而导致治疗方案失败的根源。传统的放疗与治疗手段被证明导致了乳腺癌干细胞在肿瘤中的富集。新的治疗方案有：根据肿瘤干细胞的标志物特征靶向消除癌症干细胞、抑制乳腺干细胞癌变的信号传导通路。但目前针对乳腺癌干细胞相关的标志物和信号通路的靶向治疗都存在问题：目前还没有找到有治疗价值的特异性的乳腺癌干细胞标记物；信号转导通路在正常细胞中也会表达，通过抑制通路的药物也被报道具有严重的副作用。因此，寻找更具有特异性的分子事件，从而为乳腺癌的治疗提供新策略，显得尤为有价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足和缺陷，提供一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物，为乳腺癌肿瘤的治疗提供新的靶点。本专利技术的另一目的在于将该肿瘤标志物用于制备乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断的制剂或试剂盒。为了解决上述问题，本专利技术提出以下技术方案：本专利技术提供的一种肿瘤标志物PHF20作为乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物的用途。PHF20的序列如SEQIDNO.5所示。一方面，本专利技术提供的一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物，所述肿瘤标志物为PHF20，是MOF复合物的组成蛋白之一，通过其Tudor区域识别二甲基化的组蛋白赖氨酸位点。专利技术人通过实验数据进行分析和验证，创造性地发现了PHF20基因与乳腺癌的关系，PHF20有望成为乳腺癌肿瘤诊断和预后判断的标志物，这为乳腺癌肿瘤的治疗提供了新的靶点。因此，PHF20可用于制备乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断制剂，还可用于制备乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断试剂盒。本专利技术另一方面提供一种乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒，所述试剂盒中包括PHF20的特异性引物和内参基因GAPDH的特异性引物。所述PHF20的特异性上游引物的序列如SEQIDNO.1所示，所述PHF20的特异性下游引物的序列如SEQIDNO.2所示，所述GAPDH的特异性上游引物的序列如SEQIDNO.3所示，所述GAPDH的特异性下游引物的序列如SEQIDNO.4所示。本专利技术提供的乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒为实时荧光定量PCR检测试剂盒。PHF20、内参基因GAPDH的特异性引物适用于SYBRGreen的检测。另外，试剂盒中还包括标准DNA模板和PCR反应体系，PCR反应体系中的PCR反应液为实时荧光定量PCR反应液，并进一步包含荧光染料。所述实时荧光定量PCR反应液包括dNTP、Mg2+、Taq酶及缓冲液，所述荧光染料为SYBRGreenII，Taq酶为热启动酶。本专利技术还提供利用上述试剂盒检测PHF20的方法，过程如下：1)提取样品总RNA；2)制备样品cDNA；3)定量扩增PHF20。下面对本专利技术作进一步说明：PHF20定位于20号染色体chr20:35771974-35950381，可应用于辅助乳腺癌肿瘤诊断的试剂盒中。通过本专利技术使用提供的实时荧光定量PCR检测试剂盒，对随机抽取的乳腺癌肿瘤患者的乳腺癌肿瘤与配对正常乳腺组织中的PHF20表达水平进行检测，发现PHF20在乳腺癌肿瘤组织与配对正常乳腺组织中存在差异性表达，且在乳腺癌肿瘤组织中具有高表达。以上结果表明PHF20可能作为新型乳腺癌肿瘤诊断标志物。所述的乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒包括：(1)从乳腺癌肿瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、75％乙醇、无酶水；(2)将总RNA逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、氯化镁、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶及随机引物；(3)将cDNA实时荧光定量PCR所需试剂，包括PHF20实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水；PHF20特异性PCR引物包括：①PHF20上游引物(SEQIDNO.1)②PHF20-下游引物(SEQIDNO.2)；GAPDH内参特异性PCR引物包括：①GAPDH上游引物(SEQIDNO.3)②GAPDH下游引物(SEQIDNO.4)。本专利技术发现并证实了PHF20基因在乳腺癌肿瘤的组织细胞中具有高表达，可作为新型乳腺癌肿瘤诊断标志物或药物靶点。本专利技术为乳腺癌肿瘤的辅助诊断提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为PHF20表达高低对患者生存时间的影响；图2为PHF20在正常乳腺组织、乳腺癌组织、浸润性乳腺癌的表达差异；图3为PHF20在乳腺癌细胞系MCF-7、HTB21、MDA231、HTB23、HTB25、HTB27、HTB123、MDA-MB-436、HTB123、MDA-MB-453、HTB123、MDA-MB-468与PBMC细胞、MCF-10A细胞的表达差异；图4为敲除PHF20基因对乳腺癌HTB21细胞和MDA-MB-231细胞的影响(A)及对体外成瘤的影响(B)。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下将描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：比较PHF20基因在乳腺癌患者的表达和生存率的关系为了了解PHF20在乳腺癌患者肿瘤组织中的表达情况，以及表达量与生存期的相关性，我们在TCTA数据库中分析了302例乳腺癌患者肿瘤样品中PHF20mRNA表达水平，我们根据所有患者PHF20表达量的平均值为分界点，将患者分为PHF20高表达的患者(42例)和PHF20低表达的患者(260例)，结合患者的随访资料我们统计后发现发现PHF20的表达量越高，病人的生存时间越短，二者既为负相关(图1)，以上结果提示PHF20可以作为评估病人预后的一项指标。实施例2：利用本专利技术提供的乳腺癌肿瘤辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒检测PHF20基因在正常乳腺组织、乳腺癌组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤标志物PHF20作为乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物的用途。/n

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤标志物PHF20作为乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物的用途。


2.一种乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物，其特征在于，所述肿瘤标志物为PHF20，通过其Tudor区域识别二甲基化的组蛋白赖氨酸位点。


3.如权利要求2所述的乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物在制备乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断制剂中的应用。


4.如权利要求2所述的乳腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物在制备乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断试剂盒中的应用。


5.一种乳腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断的试剂盒，其特征在于，包括PHF20的特异性引物。


6.如权利要求5所述的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明军，赵蔚，
申请(专利权)人：深圳市因诺转化医学研究院，深圳因诺免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44