用于肺癌诊断的试剂盒、装置及方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开一种用于肺癌诊断的试剂盒、装置和方法，其中试剂盒包括检测外泌体长RNA标志物和miRNA标志物组合的引物和探针，所述长RNA标志物包括ARPC5、MBOAT2、IL1B中的一种或多种，所述miRNA标志物包括miR‑450b‑5p、miR‑let‑7f、miR‑3615、miR‑885‑5p、miR‑106b‑3p、miR‑30e‑5p、miR‑4746‑5p、miR‑125a‑5p中的一种或多种。本发明专利技术的基于外泌体的无创的早期肺癌诊断的方法，在早期肺癌中具有高灵敏度及高特异性，为肺癌的早期诊断提供了重要价值。对我国肺癌的防治有很大的帮助。

【技术实现步骤摘要】
用于肺癌诊断的试剂盒、装置及方法
本专利技术涉及医学诊断领域，具体涉及一种用于早期肺癌的诊断试剂盒、装置及方法。
技术介绍
肺癌是我国乃至全球主要癌种之一。根据2018年最新全球癌症统计数据，肺癌在所有癌种中发病率及致死率均居于首位。而根据2019年中国肿瘤登记数据，中国2015年新增390.2万癌症病例，癌症的死亡病例约为233.8万，其中肺癌是中国癌症死亡的主要原因。因此，为提升我国肺癌诊疗行为，改善肺癌患者预后，早期诊断成为肺癌诊治的重要问题。随着低剂量螺旋CT的应用，越来越多的影像学表现为肺结节(肺间质内<3cm的单一病变、而且无相关的肺不张或淋巴结病)被发现。然而并非所有的肺结节都是恶性，肺结节良恶性鉴别一直以来是胸外科临床诊疗的难点。目前也有采用血浆循环肿瘤细胞、循环肿瘤游离DNA等的无创检测手段，但其在早期肺癌诊断中检测的灵敏度并不高；因此，亟待开发一种高灵敏度的无创肺癌早期检测的方法。
技术实现思路
本专利技术的提供了一种基于外泌体的无创的早期肺癌诊断的试剂、装置和方法。本专利技术一方面提供一种用于肺癌诊断的试剂盒，包括检测外泌体长RNA标志物和miRNA标志物组合的引物和探针，所述长RNA标志物包括ARPC5、MBOAT2、IL1B中的一种或多种，所述miRNA标志物包括miR-450b-5p、miR-let-7f、miR-3615、miR-885-5p、miR-106b-3p、miR-30e-5p、miR-4746-5p、miR-125a-5p中的一种或多种。优选，所述标志物为miR-450b-5p、let-7f-2-3p和ARPC5三者的组合。优选，所述标志物为miR-106b-3P、miR-30e-5p和MBOAT2三者的组合。优选，所述标志物为miR-106b-3P、miR-30e-5p、miR-3615、miR-885-5p和ARPC5五者的组合。优选，所述标志物为miR-106b-3P、miR-125a-5p、miR-3615、miR-450b-5p和IL1B五者的组合。。优选，外泌体来源包括血液、唾液及痰液的一种或多种。优选，所述引物和探针包括：用于检测内参ACTB的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号1所示的核苷酸序列，下游引物如序列号2所示的核苷酸序列，探针如序列号3所示的核苷酸序列；用于检测ARPC5的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号4所示的核苷酸序列，下游引物如序列号5所示的核苷酸序列，探针如序列号6所示的核苷酸序列；用于检测IL1B的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号7所示的核苷酸序列，下游引物如序列号8所示的核苷酸序列，探针如序列号9所示的核苷酸序列；用于检测MBOAT2的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号10所示的核苷酸序列，下游引物如序列号11所示的核苷酸序列，探针如序列号12所示的核苷酸序列；用于检测let-7f-2的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号13所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号14所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号15所示的核苷酸序列；用于检测miR-106b-3p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号16所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号17所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号18所示的核苷酸序列；用于检测miR-125a-5p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号19所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号20所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号21所示的核苷酸序列；用于检测miR-30e-5p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号22所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号23所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号24所示的核苷酸序列；用于检测miR-3615的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号25所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号26所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号27所示的核苷酸序列；用于检测miR-450b-5p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号28所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号29所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号30所示的核苷酸序列；用于检测miR-4746-5p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号31所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号32所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号33所示的核苷酸序列；用于检测miR-885-5p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号34所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号35所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号36所示的核苷酸序列；用于检测内参U6的逆转录引物、PCR引物和探针：所述U6的逆转录引物如序列号39所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号37所示的核苷酸序列，下游引物如序列号38所示的核苷酸序列，探针如序列号40所示的核苷酸序列。本专利技术另一方面提供一种用于肺癌诊断的装置，包括检测外泌体长RNA标志物和miRNA标志物组合的引物和探针，所述长RNA标志物包括ARPC5、MBOAT2、IL1B中的一种或多种，所述miRNA标志物包括miR-450b-5p、miR-let-7f、miR-3615、miR-885-5p、miR-106b-3p、miR-30e-5p、miR-4746-5p、miR-125a-5p中的一种或多种。本专利技术另一方面提供一种用于肺癌诊断的方法，包括检测外泌体长RNA标志物和miRNA标志物组合的特异性，所述长RNA标志物包括ARPC5、MBOAT2、IL1B中的一种或多种，所述miRNA标志物包括miR-450b-5p、miR-let-7f、miR-3615、miR-885-5p、miR-106b-3p、miR-30e-5p、miR-4746-5p、miR-125a-5p中的一种或多种。本专利技术提供了一种基于外泌体的无创的早期肺癌诊断的方法，在早期肺癌中具有高灵敏度及高特异性，为肺癌的早期诊断提供了重要价值。对我国肺癌的防治有很大的帮助。更进一步，其中灵敏度最高的组合可达到100％的灵敏度，特异性最高的组合可以实现96.67％的特异性，具有较好的性能。附图说明图1是miR-450b-5p+let-7f-2-3p+ARPC5组合检测肺癌的ROC曲线。图2是miR-106b-3P+miR-30e-5p+MBOAT2组合检测肺癌的ROC曲线。图3是miR-106b-3P+miR-30e-5p+miR-450b-5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于肺癌诊断的试剂盒，其特征在于，包括检测外泌体长RNA标志物和miRNA标志物组合的引物和探针，所述长RNA标志物包括ARPC5、MBOAT2、IL1B中的一种或多种，所述miRNA标志物包括miR-450b-5p、miR-let-7f、miR-3615、miR-885-5p、miR-106b-3p、miR-30e-5p、miR-4746-5p、miR-125a-5p中的一种或多种。/n

【技术特征摘要】
20200330 CN 202010262401X1.一种用于肺癌诊断的试剂盒，其特征在于，包括检测外泌体长RNA标志物和miRNA标志物组合的引物和探针，所述长RNA标志物包括ARPC5、MBOAT2、IL1B中的一种或多种，所述miRNA标志物包括miR-450b-5p、miR-let-7f、miR-3615、miR-885-5p、miR-106b-3p、miR-30e-5p、miR-4746-5p、miR-125a-5p中的一种或多种。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标志物为miR-450b-5p、let-7f-2-3p和ARPC5三者的组合。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标志物为miR-106b-3P、miR-30e-5p和MBOAT2三者的组合。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标志物为miR-106b-3P、miR-30e-5p、miR-3615、miR-885-5p和ARPC5五者的组合。


5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标志物为miR-106b-3P、miR-125a-5p、miR-3615、miR-450b-5p和IL1B五者的组合。


6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，外泌体来源包括血液、唾液及痰液的一种或多种。


7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物和探针包括：
用于检测内参ACTB的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号1所示的核苷酸序列，下游引物如序列号2所示的核苷酸序列，探针如序列号3所示的核苷酸序列；
用于检测ARPC5的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号4所示的核苷酸序列，下游引物如序列号5所示的核苷酸序列，探针如序列号6所示的核苷酸序列；
用于检测IL1B的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号7所示的核苷酸序列，下游引物如序列号8所示的核苷酸序列，探针如序列号9所示的核苷酸序列；
用于检测MBOAT2的引物和探针：所述RNA的上游引物如序列号10所示的核苷酸序列，下游引物如序列号11所示的核苷酸序列，探针如序列号12所示的核苷酸序列；
用于检测let-7f-2的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号13所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号14所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号15所示的核苷酸序列；
用于检测miR-106b-3p的逆转录引物、PCR引物和探针：所述的逆转录引物如序列号16所示的核苷酸序列，PCR上游引物如序列号17所示的核苷酸序列，下游引物如序列号41所示的核苷酸序列，探针如序列号18所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：赫捷，高树庚，高亦博，郭威，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：北京;11