用于结直肠癌诊断及预测的外泌体RNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，更具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与结直肠癌相关的外泌体长链RNA标记物及其应用。

【技术实现步骤摘要】
用于结直肠癌诊断及预测的外泌体RNA及其应用
本专利技术涉及生物检测领域，更具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与结直肠癌相关的外泌体RNA分子标志物及其组合与应用。
技术介绍
结直肠癌(colorectalcancer,CRC)是我国常见的恶性肿瘤之一。在西方国家其发病率居恶性肿瘤的第2～3位，随着我国人民生活水平的不断提高和饮食习惯的改变，我国结直肠癌的发病率也在逐年升高，已跃居第3～5位。结直肠癌的预后与早期诊断密切相关，多数早期结直肠癌可以治愈，5年生存率可达90％，而晚期则不足10％，因此提高国人早期结直肠癌及癌前病变的检出率，从而降低结直肠癌的发病率，提高结直肠癌的治愈率，延长患者的生存期显得尤为重要。电子结肠镜是结直肠癌的重要诊疗手段，通过观察病变粘膜及活组织检查等手段能够实现早期诊断及治疗。但是电子结肠镜作为有创检查手段，不仅会给受检者带来痛苦，同时可能出现出血、穿孔等并发症，因此在一部分患者的筛查应用中受到限制。临床上也可通过采集患者血液进行肿瘤标记物检测等无创检查方法，但由于其灵敏度、特异度受限，只能作为一项参考指标。因此，开发一种高灵敏度的无创结直肠癌早期检测方法至关重要。近年来细胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs)逐渐成为国内外研究热点，它是由细胞分泌的或由细胞膜脱落的囊泡状小体，具有双层膜结构，直径在30-1000nm不等，细胞外囊泡主要包含微囊泡(MicroVesicles,MVs)和外泌体(exosomes)两大部分，近年来发现二者尤其是外泌体具有多种类型的生物学功能，其在疾病诊断中有着重要的意义。外泌体是细胞内多泡体与细胞膜融合后被细胞分泌到细胞外的膜性小囊泡，其直径通常介于30～150nm之间，近年来发现主要参与在抗原呈递、细胞凋亡、炎症反应、肿瘤发生发展及转移等过程，是细胞间信息传递的重要媒介。外泌体可广泛分布于包括血液、唾液、尿液、乳汁和胸腹水在内的各种体液系统，其内部可携带DNA、RNA及蛋白质等多种活性物质，研究表明外泌体内部mRNA、lncRNA等分子在肿瘤的发生发展中起到至关重要的作用，可作为多种类型肿瘤的无创诊断标志物，因而外泌体mRNA、lncRNA的检测可作为结直肠癌早期诊断的手段。
技术实现思路
专利技术人经过多年的研究，筛选获得了与结直肠癌密切相关，能够用于临床诊断RNA分子标志物组合，其包括两个长链非编码RNA：lnc-MKRN2-42:1和lnc-MSI1-2:1，以及两个基因的转录本(mRNA)：TOP1和PPDPF。所述RNA分子标志物不论是单独使用还是部分或者全部的联合使用能够高灵敏度和特异性的指示结直肠癌，具有优越的诊断性能。在第一个方面中，本公开提供了一种用于结直肠癌诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物，其包括选自lnc-MKRN2-42:1、lnc-MSI1-2:1、TOP1基因转录本和PPDPF基因转录本中一种或多种RNA分子的组合。在一个实施方案中，所述所述lnc-MKRN2-42:1的序列如SEQIDNO：13所示，具体为：GCCGGGCACAGUGGCGCGUGCCUGUAGUCCCAGCUACUCGGGAGGCUGAGGUGGGAGGAUCGCUUGAGCCCAGGAGUUCUGGGCUGUAGUGCGCUAUGCCGAUCGGGUGUCCGCACUAAGUUCGGCAUCAAUAUGGUGACCUCCCGGGAGCGGGGGACCACCAGGUUGCCUAAGGAGGGGUGAACCGGCCCAGGUCGGAAACAGAGCAGGUCAAAACUCCCGUGCUGAUCAGGAGACAGAGUUUGUGAGCAGACAACUGGUCUGACCAAAAUUUAUGAGGUGGGAAUUUCCUCU(SEQIDNO:13)；所述lnc-MSI1-2:1的序列如SEQIDNO：14所示，具体为：GCUGGUAAUGGUCACACUAGGUGGCGUCCGCGUGAGGUGGAGGUGUCAGCGGCUCCUGUCUGCAGCUUCCUGGGGUCCUGGCGGCGCUCUUCUCCUGAGCCAGAAUCCAGCAGGAAGGACAGAAUGGGCGCUAGAGUGUGAAAAGAGGGCGAACUCACGUGGAUGUGACUCUCCGGGUCGCUCUUCCCUGUCACCCAGCUCCUCCUGCCGGUUUCCUGUGGGCAUCGCCUGCAUUGCUUUUAUCCCGGGGACGGAUUAGGGGGGUCCAGAGGAGGACUUGCUGGCACAAAUAACCCAAUGGAGGCUUUCGAGCACGGCUGGCUGGGGUUUGCGAUCCAACGGCCUUUUGCUGACCUGAAAGUCAACGCAAAGCUCAUCUUCAUUCUAGAGAAAAAGAAGCCUCAUAUCUGAGAUCAGGACCCCGCUUUCUCCUUGACAUUCCACAGCAAAACGUGAACAGCUGAACAAACACACAGUCCGGUUUCCCGAGACCAAAGGGUCAGGGGAAACCCCCGCUGAAAACGUGCAUCAGUGGAACAACUACUCUCUUCCAGGUCCCACCGAGGGCAAAGAGGAGAAAUAGAAUCCCUCACAAGAAAUCCACAACUUCUAGAAAUCCGCAGCACACACAGAACACACUUACCUCUCACAGCUCUACGGACACUUCACACCCCACAGUGGGACCGUCUGAUUGCAUUUGCAUUUUGGGACAUGUAGUCCAGAAAGCUUAAAUGAUGCGAGAAAAACCACAAGUCCCACAAUCCUCCGCGUCUCGCAAUUGACAGCCCCAGAUCAUCCAGGAACGCCCCCUGUCGGCUCUUUCUGGUCAGAGGUUCCCCCGUUAAUAUAAAAGCUUUUAAUCAUGGAUUUUUUUCUUUGUUUUCAAUUUCUGUGGGCACUUAGUAGGUGUAUAUAUUUAUAGUGUACAUAAGAUUUUUUUUCUUUUUUCUUUUUUUUUUUUAAGACGGAGUUGUUGUUUUUUUUUUUUGAAAAAACUCCAGUCUGGAGUGCAGUGGCACGAUCUCGGCUCACUGCAACCUCCCUCUCCCGGGUUCAACCGAUUCUCCUGCCUCAGCCUCCCGAGUAGCUGGGAUUAUUUUUGUAUUUUUAGUAGAGACGGGGGUUUCGCCAUGUUGGCCAGGCUCGUCUUGAACUCCUAACCUCAGGUGAUCCGCACGCCUUGACCUCCCAAAGUGCUGGGAUUAUAGGCGUGAGCCACUGCGCCCGGCCAUCUUUUCUCUUAUUUUUUGUCUUUUUUUCUUUUCUCUGUGCCUGUCUAUGCUUUACCCACAUGAGAUGUUUU本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于结直肠癌诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物，其包括选自lnc-MKRN2-42:1、lnc-MSI1-2:1、TOP1基因转录本和PPDPF基因转录本中一种或更多种的RNA分子的组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于结直肠癌诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物，其包括选自lnc-MKRN2-42:1、lnc-MSI1-2:1、TOP1基因转录本和PPDPF基因转录本中一种或更多种的RNA分子的组合。


2.根据权利要求1所示的RNA分子标志物，所述lnc-MKRN2-42:1的序列如SEQIDNO：13所示，所述lnc-MSI1-2:1的序列如SEQIDNO：14所示，TOP1转录本的序列如SEQIDNO：15所示，和/或所述PPDPF转录本的序列如SEQIDNO：16所示。


3.根据权利要求1或2所述的RNA分子标志物，其中所述RNA分子标志物存在于外泌体，所述外泌体来自体液。


4.根据权利要求3所述的RNA分子标志物，其中，所述体液为血液、尿液、唾液或痰液。


5.一种用于检测权利要求1至3中任一项所述RNA分子标志物的试剂，所述试剂包括引物和/或探针，其中
检测lnc-MKRN2-42:1的引物为：如SEQIDNO:1所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:2所示的下游引物序列；检测lnc-MKRN2-42:1的探针序列如SEQIDNO:3所示；
检测lnc-MSI1-2:1的引物为：如SEQIDNO:4所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:5所示的下游引物序列；检测lnc-MSI1-2:1的探针序列如SEQIDNO:6所示；
检测TOP1基因转录本的引物为：如SEQIDNO:7所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:8所示的下游引物序列；检测TOP1基因转录本的探针序列如SEQIDNO:9所示；和/或
检测PPDPF基因转录本的引物为：如SEQIDNO:10所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:11所示的下游引物序列；检测PPDPF基因转录本的探针序列如SEQIDNO:12所示。


6.根据权利要求1至4中任一项所述的RNA分...

【专利技术属性】
技术研发人员：闵力，孔关义，朱圣韬，郭俊峰，张澍田，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京;11