用于定量检测人类MGMT基因甲基化程度的试剂盒和方法技术

本申请公开了一种用于定量检测人类MGMT基因甲基化程度的试剂盒和方法。本申请试剂盒包括MGMT基因检测试剂、内控β‑Actin基因检测试剂和标准品；MGMT基因检测试剂包括MGMT引物对和MGMT探针，分别为SEQ ID NO.1至3所示序列；内控β‑Actin基因检测试剂包括β‑Actin引物对和β‑Actin探针，分别为SEQ ID NO.4至6所示序列；两条探针采用不同荧光基团修饰；标准品由100％甲基化MGMT基因和0％甲基化MGMT基因按不同配比混合而成。本申请试剂盒，采用双重实时荧光定量PCR，利用标准品绘制标准曲线，实现MGMT基因甲基化程度相对定量，使用简单、方便，且成本低。

【技术实现步骤摘要】
用于定量检测人类MGMT基因甲基化程度的试剂盒和方法
本申请涉及MGMT基因甲基化检测领域，特别是涉及一种用于定量检测人类MGMT基因甲基化程度的试剂盒和方法。
技术介绍
MGMT基因编码一种O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶。在正常细胞中，MGMT可将被异常甲基化的鸟嘌呤O6位置的甲基移除，使因鸟嘌呤甲基化引起的DNA损伤得到修复。MGMT基因启动子CpG岛甲基化引起的MGMT表达缺失和DNA修复障碍与多种肿瘤的发生、发展密切相关。研究表明，超过50％的胶质瘤可发生MGMT基因启动子CpG岛甲基化，且此类型胶质瘤患者对替莫唑胺化疗敏感，替莫唑胺化疗联合放疗可明显延长患者生存期。因此，MGMT基因启动子CpG岛甲基化可以作为胶质瘤分子分型及预测其对烷化剂敏感性的分子标记。NCCN指南推荐MGMT启动子甲基化是所有的高级别胶质瘤(III级或IV级)重要的分子诊断工具，尤其是对于老年患者具有更多的诊断价值。MGMT启动子非甲基化的患者与MGMT启动子甲基化的患者相比，在替莫唑胺化疗中受益更少。因此，MGMT基因甲基化检测是胶质瘤分子分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于定量检测人类MGMT基因甲基化程度的试剂盒，其特征在于：包括MGMT基因检测试剂、内控β-Actin基因检测试剂和标准品；/n所述MGMT基因检测试剂包括MGMT引物对和MGMT探针，所述MGMT引物对的上下游引物分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列，所述MGMT探针为SEQ ID NO.3所示序列；/n所述内控β-Actin基因检测试剂包括β-Actin引物对和β-Actin探针，所述β-Actin引物对的上下游引物分别为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示序列，所述β-Actin探针为SEQ IDNO.6所示序列；/nSEQ ID NO.1...

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测人类MGMT基因甲基化程度的试剂盒，其特征在于：包括MGMT基因检测试剂、内控β-Actin基因检测试剂和标准品；
所述MGMT基因检测试剂包括MGMT引物对和MGMT探针，所述MGMT引物对的上下游引物分别为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示序列，所述MGMT探针为SEQIDNO.3所示序列；
所述内控β-Actin基因检测试剂包括β-Actin引物对和β-Actin探针，所述β-Actin引物对的上下游引物分别为SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示序列，所述β-Actin探针为SEQIDNO.6所示序列；
SEQIDNO.1：5’-CGCGTTTCGGATATGTTGGG-3’
SEQIDNO.2：5’-ATCAAAACGACCCCACACCC-3’
SEQIDNO.3：5’-CGCGGTGCGTATCGTTTGCG-3’
SEQIDNO.4：5’-AGTGAGTGGTGTGGGGTTAA-3’
SEQIDNO.5：5’-CCAACCTTACACATACCAAAACCA-3’
SEQIDNO.6：5’-TGGTTTGAGTGGTTGTGGTGGTGT-3’
所述MGMT探针和β-Actin探针的5’端分别采用不同的荧光基团修饰；
所述标准品由100％甲基化的MGMT基因和0％甲基化的MGMT基因按不同配比形成的一系列甲基化MGMT基因含量已知的混合核酸样品。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：还包括DNA提取试剂、甲基化转化试剂和实时荧光定量PCR检测试剂中的至少一种。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明炎，张晓妮，屈宏越，
申请(专利权)人：深圳市海普洛斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44