用于结直肠癌早期诊断的外泌体RNA分子标记物组合及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，更具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与结直肠癌相关的外泌体RNA标记物及其应用。

【技术实现步骤摘要】
用于结直肠癌早期诊断的外泌体RNA分子标记物组合及其应用
本专利技术涉及生物检测领域，更具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与结直肠癌相关的外泌体RNA分子标志物组合及其应用。
技术介绍
结直肠癌(Colorectalcancer，CRC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一，在我国其发病率和病死率仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。结直肠癌在疾病早期几乎无明显症状，随着病灶逐渐增大开始出现腹泻、便秘、腹痛甚至便血等症状，晚期则出现贫血、消瘦等全身症状。近年来，我国结直肠癌的发病率和死亡率呈持续上升趋势。有统计显示我国结直肠癌发病率、死亡率在全部恶性肿瘤中上升至第5位，其中新发病例近40万，死亡病例近20万。由于结直肠癌早期多无明显症状，多数患者发现时已属于中晚期，严重影响患者生存质量及预后。因此，结直肠癌的早期诊断、早期治疗显得尤为重要，已逐渐成为提高国家医疗水平和改善人民生活质量的重要问题。在结直肠癌的筛查中，电子结肠镜检查仍然是金标准，研究显示电子结肠镜筛查能够显著降低结直肠癌死亡率。虽然结肠镜检查具有重要的临床意义，但由于检查前需要完备的术前准备，同时又是一项侵入性检查，因此在对每个人进行结肠镜检查仍具有挑战性。目前临床上粪便潜血检测(FOBT)及粪便DNA检测(FDT)是两种可行的无创性筛查手段，尽管这两种方法都有助于降低结直肠癌的死亡率，但较低的特异度和敏感度使其临床应用受到了一定的限制。血液septin9甲基化检测是基于血液的无创检测手段，但其检测的灵敏度并不高。因此开发一项基于血液的高灵敏度及特异度的无创检测手段至关重要。细胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs)是指由细胞分泌或从细胞膜上脱落的具有双层膜结构的囊泡状小体，其直径在30-1000nm左右，主要分为微囊泡(MicroVesicles,MVs)和外泌体(exosomes)两部分，其中外泌体功能复杂，具有多种生物活性，近年来逐渐成为了国内外研究热点。目前研究显示，外泌体是由细胞内的内溶酶体微粒内陷形成多囊泡体后与细胞膜融合并向细胞外分泌的大小均一，直径在30～150nm的囊泡状结构，其外部主要由脂质双分子层构成，内部包含DNA、RNA及蛋白质等多种生物活性物质；近年来研究表明，外泌体广泛存在于血液、唾液、尿液、乳汁和胸腹水等部位，具有抗原呈递、细胞凋亡、炎症反应、肿瘤发展及转移等广泛的生物学功能。尤其在针对恶性肿瘤细胞的研究中发现，肿瘤细胞分泌的外泌体中含有miRNA、mRNA及lncRNA等分子，在肿瘤发生发展过程中起到不可忽视的作用，因此外泌体中富含的miRNA、mRNA及lncRNA分子可以作为肿瘤等多种疾病的无创诊断标志物，在结直肠癌早期诊断中具有巨大潜力。
技术实现思路
专利技术人经过多年的研究，筛选获得了与结直肠癌密切相关，能够用于临床诊断RNA分子标志物组合，其包括两个长链非编码RNAlnc-MKRN2-42:1和lnc-MSI1-2:1、两个mRNA：TOP1和PPDF，以及一个miRNAmiR-106b-3p。所述RNA分子标志物的联合使用能够高灵敏度和特异性的指示结直肠癌，具有优越的诊断性能。在第一个方面中，本公开提供了一种用于结直肠癌诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物组合，其包括miR-106b-3p、lnc-MKRN2-42:1、lnc-MSI1-2:1、TOP1基因转录本和PPDPF基因转录本。在一个实施方案中，所述miR-106b-3p的序列如SEQIDNO：17所示，具体为：CCGCACUGUGGGUACUUGCUGC(SEQIDNO:17)；所述lnc-MKRN2-42:1的序列如SEQIDNO：18所示，具体为：GCCGGGCACAGUGGCGCGUGCCUGUAGUCCCAGCUACUCGGGAGGCUGAGGUGGGAGGAUCGCUUGAGCCCAGGAGUUCUGGGCUGUAGUGCGCUAUGCCGAUCGGGUGUCCGCACUAAGUUCGGCAUCAAUAUGGUGACCUCCCGGGAGCGGGGGACCACCAGGUUGCCUAAGGAGGGGUGAACCGGCCCAGGUCGGAAACAGAGCAGGUCAAAACUCCCGUGCUGAUCAGGAGACAGAGUUUGUGAGCAGACAACUGGUCUGACCAAAAUUUAUGAGGUGGGAAUUUCCUCU(SEQIDNO:18)；所述lnc-MSI1-2:1的序列如SEQIDNO：19所示，具体为：GCUGGUAAUGGUCACACUAGGUGGCGUCCGCGUGAGGUGGAGGUGUCAGCGGCUCCUGUCUGCAGCUUCCUGGGGUCCUGGCGGCGCUCUUCUCCUGAGCCAGAAUCCAGCAGGAAGGACAGAAUGGGCGCUAGAGUGUGAAAAGAGGGCGAACUCACGUGGAUGUGACUCUCCGGGUCGCUCUUCCCUGUCACCCAGCUCCUCCUGCCGGUUUCCUGUGGGCAUCGCCUGCAUUGCUUUUAUCCCGGGGACGGAUUAGGGGGGUCCAGAGGAGGACUUGCUGGCACAAAUAACCCAAUGGAGGCUUUCGAGCACGGCUGGCUGGGGUUUGCGAUCCAACGGCCUUUUGCUGACCUGAAAGUCAACGCAAAGCUCAUCUUCAUUCUAGAGAAAAAGAAGCCUCAUAUCUGAGAUCAGGACCCCGCUUUCUCCUUGACAUUCCACAGCAAAACGUGAACAGCUGAACAAACACACAGUCCGGUUUCCCGAGACCAAAGGGUCAGGGGAAACCCCCGCUGAAAACGUGCAUCAGUGGAACAACUACUCUCUUCCAGGUCCCACCGAGGGCAAAGAGGAGAAAUAGAAUCCCUCACAAGAAAUCCACAACUUCUAGAAAUCCGCAGCACACACAGAACACACUUACCUCUCACAGCUCUACGGACACUUCACACCCCACAGUGGGACCGUCUGAUUGCAUUUGCAUUUUGGGACAUGUAGUCCAGAAAGCUUAAAUGAUGCGAGAAAAACCACAAGUCCCACAAUCCUCCGCGUCUCGCAAUUGACAGCCCCAGAUCAUCCAGGAACGCCCCCUGUCGGCUCUUUCUGGUCAGAGGUUCCCCCGUUAAUAUAAAAGCUUUUAAUCAUGGAUUUUUUUCUUUGUUUUCAAUUUCUGUGGGCACUUAGUAGGUGUAUAUAUUUAUAGUGUACAUAAGAUUUUUUUUCUUUUUUCUUUUUUUUUUUUAAGACGGAGUUGUUGUUUUUUUUUUUUGAAAAAACUCCAGUCUGGAGUGCAGUGGCACGAUCUCGGCUCACUGCAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于结直肠癌诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物组合，其包括miR-106b-3p、lnc-MKRN2-42:1、lnc-MSI1-2:1、TOP1基因转录本和PPDPF基因转录本。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于结直肠癌诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物组合，其包括miR-106b-3p、lnc-MKRN2-42:1、lnc-MSI1-2:1、TOP1基因转录本和PPDPF基因转录本。


2.根据权利要求1所述的RNA分子标志物，所述miR-106b-3p的序列如SEQIDNO：17所示；所述lnc-MKRN2-42:1的序列如SEQIDNO：18所示、所述lnc-MSI1-2:1的序列如SEQIDNO：19所示；TOP1基因转录本的序列如SEQIDNO：20所示、和/或所述PPDF基因转录本的序列如SEQIDNO：21所示。


3.根据权利要求1或2所述的RNA分子标志物，其中所述RNA分子标志物存在于外泌体，所述外泌体来自体液。


4.根据权利要求3所述的RNA分子标志物，其中，所述体液为血液、尿液、唾液或痰液。


5.一种用于检测权利要求1至4中任一项所述RNA分子标志物的试剂，所述试剂包括引物和/或探针，其中
检测lnc-MKRN2-42:1的引物为：如SEQIDNO:1所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:2所示的下游引物序列；检测lnc-MKRN2-42:1的探针序列如SEQIDNO:3所示；
检测lnc-MSI1-2:1的引物为：如SEQIDNO:4所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:5所示的下游引物序列；检测lnc-MSI1-2:1的探针序列如SEQIDNO:6所示；
检测TOP1基因转录本的引物为：如SEQIDNO:7所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:8所示的下游引物序列；检测TOP1基因转录本的探针序列如SEQIDNO:9所示；
检测PPDPF基因转录本的引物为：如SEQIDNO:10所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:11所示的下游引物序列；检测PPDPF基因转录本的探针序列如SEQIDNO:12所示；和
检测miR-106b-3p的引物为：如SEQIDNO:14所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:16所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱圣韬，闵力，孔关义，刘翔，张澍田，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京;11