识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物制造技术

本发明专利技术提供了一种识别EBV‑LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。该TCR用于特异性结合HLA‑A2‑EBV‑LMP2

【技术实现步骤摘要】
识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物
本专利技术涉及T细胞
，尤其是指一种识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。
技术介绍
EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)是一种DNA病毒，属于单纯疱疹病毒的亚型，广泛流行，据悉全世界大于90％的人EBV感染阳性(ThompsonMPetal.,ClinicalCancerResearch2004,10(3):803-821.)。EBV可以感染人B淋巴细胞和表皮细胞，其活动周期可分为裂解期和潜伏期。裂解期EBV进行DNA复制并生产感染性颗粒。潜伏期的不同阶段(0、I、II、III)，EBV表达不同种类的病毒蛋白(MacsweenKFetal.,TheLancetInfectiousDiseases2003,3(3):131-140.)。大多数EBV感染者没有任何症状，但有少数感染人群会发生恶性肿瘤病变。目前发现与EBV潜伏感染密切相关的恶性肿瘤有鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和胃癌等，这些肿瘤患者的癌细胞可表达不同潜伏周期的外源性EBV抗原，因而，EBV病毒抗原是T细胞介导的细胞免疫治疗的理想靶点。EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2的表达是维持病毒II型潜伏感染状态及导致细胞恶性转化的关键。例如，LMP2a可在细胞质膜形成磷酸化酪氨酸聚合物，并与Lyn，Syk协同刺激B细胞受体信号传递，从而诱导PI3K/AKT信号途径的活化(CaldwellRGetal.Immunity1998，9:405-411)。T细胞受体基因修饰的T淋巴细胞过继免疫疗法(Adoptivecelltransfer，ACT)通过将可识别病毒/肿瘤抗原的TCR基因整合至患者T细胞中，使得原本不具备抗原特异性的患者T细胞可识别并杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的效用(Jin,B.Y.,etal.JCIinsight2018,3(8)：e99488)。研究显示T细胞受体基因转导的T细胞能特异性地识别并杀伤EBV转化的LCL细胞；在荷瘤小鼠模型中，LMP2特异性TCR-T能显著抑制LMP2+肿瘤生长，在治疗鼻咽癌和移植后淋巴细胞增多症的I期临床试验中也证实了其应用的安全性和短期临床有效性(ZhengY,etal.CancerImmunolRes2015,3(10):1138-1147.)。分离并鉴定EBV-抗原特异性的TCR，是进行EBV相关肿瘤免疫治疗的基础。不同的TCR与目标抗原结合的特异性和亲和力不同。制备得到的TCR-T细胞TCR蛋白的表达水平、免疫原性、肿瘤杀伤效用也不相同。这些抗原特异性TCR-T细胞的临床转化将让包括鼻咽癌、NK/T淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、胃癌等多种EBV阳性恶性肿瘤患者受益。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种能识别并结合HLA-A2-EBV-LMP2426-434抗原复合物的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种识别EBV-LMP2抗原的TCR，用于特异性结合HLA-A2-EBV-LMP2426-434抗原复合物；所述TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；所述TCRα链可变区的CDR3氨基酸序列为CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQIDNO：7，和/或所述TCRβ链可变区的CDR3氨基酸序列为CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQIDNO：10。其中，所述HLA-A2-EBV-LMP2426-434抗原复合物由人白细胞表面抗原HLA-A2及EBV-LMP2426-434短肽(CLGGLLTMV)组成，表达于目标靶细胞表面。进一步地，所述TCRα链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：αCDR1：TSESDYY，示于SEQIDNO：5；αCDR2：QEAYKQQN，示于SEQIDNO：6；αCDR3：CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQIDNO：7。进一步地，所述TCRβ链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：βCDR1：SGHTA，示于SEQIDNO：8；βCDR2：FQGNSA，示于SEQIDNO：9；βCDR3：CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQIDNO：10。进一步地，所述TCRα链可变区的氨基酸序列为与SEQIDNO：1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ链可变区的氨基酸序列为与SEQIDNO：2具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。一种核酸分子，包含用于编码上述任一所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR的核苷酸序列和/或相应的互补序列。进一步地，所述核酸分子中，用于编码TCRα链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO：3，和/或用于编码TCRβ链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO：4。进一步地，所述核酸分子中，用于编码所述TCRα链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列为：αCDR1：示于SEQIDNO：11；αCDR2：示于SEQIDNO：12；αCDR3：示于SEQIDNO：13。进一步地，所述核酸分子中，用于编码所述TCRβ链可变区的3个互补决定区的核苷酸序列为：βCDR1：示于SEQIDNO：14；βCDR2：示于SEQIDNO：15；βCDR3：示于SEQIDNO：16。一种载体，包含上述任一所述的核酸分子。进一步地，所述载体为病毒载体。更进一步地，所述载体为逆转录病毒载体或慢病毒载体。一种细胞，转导上述任一所述的核酸分子、上述所述的载体中的一种或几种；该细胞表达结合HLA-A2-EBV-LMP2426-434抗原复合物的特异性TCR。进一步地，所述细胞为干细胞或T细胞。一种药物，其活性成分包含上述任一所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR、上述任一所述的核酸分子、上述所述的载体、上述所述的细胞中的一种或几种。进一步地，该药物用于治疗EBV阳性恶性肿瘤或EB病毒感染。进一步地，所述EBV阳性恶性肿瘤包括鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和胃癌。本专利技术的有益效果在于：将识别EBV-LMP2抗原的TCR克隆至逆转录病毒载体后转染T细胞，CD8+T细胞的TCR转导率达19.8％；经过TCR基因修饰后的T细胞，能够特异性识别靶细胞并释放细胞因子，能够特异地识别低表达的HLA-A2-EBV-LMP2426-434抗原复合物。附图说明图1为本专利技术的插入逆转录病毒载体的TCR序列元件结构示意图；图2为本专利技术采用流式细胞术检测HLA-A2-EBV-LMP2426-434特异性TCR(A4)基因修饰T细胞(TCR-T细胞)的转导效率的结果图；图3为本专利技术采用ELISA检测A4TCR-T细胞与靶细胞共培养后特异性释放细胞因子的能力的结果图；图4为本专利技术采用ELISA检测A4TCR-T细胞与HLA-A*0201基因转导的人鼻咽癌细胞系C666-1A0201(HLA-A2阳性且EBV-LMP2抗原阳性)共培养后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种识别EBV-LMP2抗原的TCR，其特征在于，用于特异性结合HLA-A2-EBV-LMP2

【技术特征摘要】
1.一种识别EBV-LMP2抗原的TCR，其特征在于，用于特异性结合HLA-A2-EBV-LMP2426-434抗原复合物；所述TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；
所述TCRα链可变区的CDR3氨基酸序列为CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQIDNO：7，
和/或所述TCRβ链可变区的CDR3氨基酸序列为CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQIDNO：10。


2.如权利要求1所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR，其特征在于，所述TCRα链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：
αCDR1：TSESDYY，示于SEQIDNO：5；
αCDR2：QEAYKQQN，示于SEQIDNO：6；
αCDR3：CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQIDNO：7。


3.如权利要求1所述的识别EBV-LMP2抗原的TCR，其特征在于，所述TCRβ链可变区的3个互补决定区氨基酸序列为：
βCDR1：SGHTA，示于SEQIDNO：8；
βCDR2：FQGNSA，示于SEQIDNO：9；
βCDR3：CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQIDNO：10。


4.如权利要求1至3任一所述的识别EBV-LMP2抗原的TC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明军，董莲花，陈磊，
申请(专利权)人：深圳市因诺转化医学研究院，深圳因诺免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44