多肽、其衍生物及其在制备抗肺纤维化的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合GSK‑3β的多肽或所述多肽的衍生物，所述多肽的氨基酸序列来自于与GSK‑3β结合的A20序列；所述多肽的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示；所述多肽的衍生物包括所述特异性结合GSK‑3β的多肽与细胞穿膜肽连接形成的嵌合肽。本发明专利技术还公开了含其的药物组合物及相关应用。利用本发明专利技术的多肽、多肽的衍生物和药物组合物应用于治疗肺纤维化疾病中，能够显著抑制肺纤维化、显著降低肺重指数、明显减少肺肺泡灌洗液中多种炎性细胞的数量、显著降低肺组织羟脯氨酸和胶原含量、显著改善肺功能，具有疗效显著、毒副作用少、使用安全的优点。

【技术实现步骤摘要】
多肽、其衍生物及其在制备抗肺纤维化的药物中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种多肽、其衍生物及其在制备抗肺纤维化的药物中的应用。
技术介绍
肺纤维化是肺部最为严重的一种病理状态，其病理改变大多表现为最初的下呼吸道炎症，以及肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，伴有成纤维母细胞和II型肺泡细胞增殖、细胞因子释放，细胞外基质蛋白和胶原沉积，最终引起肺部改变。肺纤维化患者肺部肺泡逐渐被纤维性物质取代，导致肺组织变硬变厚，肺脏气体交换能力逐步丧失，导致患者不同程度缺氧而出现呼吸困难，最后因呼吸衰竭而死亡。肺纤维化是呼吸病四大病种之一，病因复杂，发病机制不明，目前已有的治疗肺纤维化的药物和方法十分有限，且疗效差强人意，预后极差，5年生存率仅为50％。泛素修饰酶A20，也被称为TNFAIP3，最早在人脐静脉内皮细胞中被发现，主要通过抑制TNF-α介导的细胞凋亡、阻断NF-κB信号通路等发挥作用，参与体内免疫反应的调节。研究发现，A20作为一种公认的抗炎蛋白，被证实在多种自身免疫性疾病中发挥了重要的负调节作用，例如哮喘、过敏和囊性纤维化等。敲除A20的小鼠出现严重的炎症反应并过早的死亡。在急性炎症刺激下，A20通过下调NF-κB信号通路参与调控巨噬细胞的分化。此外，增加巨噬细胞中A20的表达能够抑制Toll样受体引起的炎症反应。GSK-3β则是一种在进化上非常保守的丝氨酸/苏氨酸激酶。现有技术中已有特异性结合GSK-3β的多肽，例如L803-mts，该多肽目前被应用于预防和治疗中枢神经系统疾病中，目前没有任何特异性结合GSK-3β的多肽可以应用于预防和/或治疗肺纤维化的相关报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对目前缺乏安全有效的预防和/或治疗肺纤维化药物的现状，提供一种多肽、多肽的衍生物和药物组合物及其在制备治疗和/或预防肺纤维化的药物中的应用。本专利技术的多肽、多肽的衍生物和药物组合物能够阻断GSK-3β与A20蛋白的相互作用，从而应用于预防和/或治疗肺纤维化药物的制备中。利用上述多肽、多肽的衍生物和药物组合物应用于治疗肺纤维化疾病中，能够显著抑制肺纤维化、显著降低肺重指数、明显减少肺肺泡灌洗液中多种炎性细胞的数量、显著降低肺组织羟脯氨酸和胶原含量、显著改善肺功能，具有疗效显著、毒副作用少、使用安全的优点。本专利技术人经过深入的研究和反复的试验，发现持续反复的肺损伤促进蛋白激酶GSK-3β的表达，高表达的GSK-3β与A20发挥相互作用，诱导A20磷酸化，抑制A20酶活性，导致肺泡巨噬细胞活化，进而分泌大量的促纤维化因子促进肺成纤维细胞(肺纤维化的主要效应器细胞)的增殖、迁移和活化。从而推断出阻断GSK-3β与A20之间的相互作用是治疗肺纤维化的一个潜在途径。GSK-3β与A20的相互作用与肺纤维化相关的机制为本专利技术首次发现。继而本专利技术人通过研究开发获得了靶向GSK-3β与A20蛋白相互作用的多肽，并且发现该多肽能够应用于制备治疗和/或预防肺纤维化的药物中。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案之一是：一种特异性结合GSK-3β的多肽或所述多肽的衍生物，所述多肽的氨基酸序列来自于与GSK-3β结合的A20序列；所述多肽的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:1(其氨基酸序列为：Leu-Val-Leu-Arg-Lys-Ala-Leu-Phe-Ser-Thr-Leu-Lys)、SEQIDNO:2(其氨基酸序列为：Trp-Asn-Asp-Glu-Trp-Asp-Asn-Leu-Ile-Lys-Met-Ala)或SEQIDNO:3(其序氨基酸列为：Ile-His-Ile-Phe-Val-Leu-Cys-Asn-Ile)所示；可适当引入氨基酸替换、缺失或添加，只要改变后的氨基酸序列仍然能够形成与GSK-3β特异性结合的多肽且该多肽仍然保持改变前的活性即可。所述多肽的衍生物包括所述特异性结合GSK-3β的多肽与细胞穿膜肽连接形成的嵌合肽。较佳地，所述多肽为α螺旋肽。较佳地，所述细胞穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端，优选连接在所述多肽的N端；更佳地，所述细胞穿膜肽和所述多肽之间以两个谷氨酸连接。本专利技术中所述的细胞穿膜肽可为本领域常规的细胞穿膜肽，只要其能辅助将所述多肽送入细胞以发挥作用即可，一般而言，所述的细胞穿膜肽为由10～30个氨基酸组成的短肽分子。较佳地，所述细胞穿膜肽选自Pep2肽(HLYVSPW，其氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:4所示)、HIV-1病毒反转录激活因子(Trans-activatortranscription，Tat)蛋白的TAT肽(YGRKKRRQRRR，其氨基酸序列如SEQIDNO:5所示)、果蝇触角同源异型蛋白的转录因子Antp肽(RQIKIWFQNRRMKWKK，其氨基酸序列如SEQIDNO:6所示)、Pep-1肽(KETWWETWWTEWSQPKKKRKV，其氨基酸序列如SEQIDNO:7所示)、MPG肽(GALFLGFLGAAGSTMGAWSQPKSKRKV，其氨基酸序列如SEQID:8所示)和RGD肽(Arg-Gly-Asp，其氨基酸序列如SEQIDNO:9所示)中的任意一种或多种；更佳地，所述细胞穿膜肽为Pep2肽。本专利技术中，所述的多肽衍生物更佳地是将所述Pep2肽连接在如序列表中SEQIDNO:1，SEQIDNO:2和SEQIDNO:3任意一条所示的多肽的N端、或者将所述TAT肽连接在如序列表中SEQIDNO:1所示的多肽的N端，或者将所述Antp肽连接在如序列表中SEQIDNO:1所示的多肽的N端所形成的嵌合肽，所述嵌合肽的氨基酸序列较佳地如序列表中SEQIDNO:10(其氨基酸序列为：HLYVSPWGGLVLRKALFSTLK)、SEQIDNO:11(其氨基酸序列为：HLYVSPWGGWNDEWDNLIKMA)、SEQIDNO:12(其氨基酸序列为：HLYVSPWGGIHIFVLCNI)、SEQIDNO:13(其氨基酸序列为：YGRKKRRQRRRGGLVLRKALFSTLK)和SEQIDNO:14(其氨基酸序列为：RQIKIWFQNRRMKWKKGGLVLRKALFSTLK)中任一条所示。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案之二是：一种抗肺纤维化的药物组合物，其活性成分含有上述多肽或所述多肽的衍生物。本专利技术所述的“活性成分”是指具有预防和/或治疗肺纤维化功能的化合物。较佳地，所述活性成分为单一活性成分；或者所述活性成分还包括其它具有抗肺纤维化活性的化合物。较佳地，所述药物组合物还包括一种或多种药用载体。本专利技术中所述的药用载体可为本领域常规药用载体，较佳地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂、稀释剂等。本专利技术中，所述药物组合物的剂型没有特别限制，可为本领域常规剂型。所述药物组合物的剂型较佳地是固体、半固体或液体。所述药物组合物的剂型也可以是水溶液、非水溶液或混悬液。该药物组合物的剂型更佳地是片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂或输注剂。所述药物组合物的给药途径可为本领域常规的给药途径，所述给药本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合GSK-3β的多肽或所述多肽的衍生物，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列来自于与GSK-3β结合的A20序列；所述多肽的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示；所述多肽的衍生物包括所述特异性结合GSK-3β的多肽与细胞穿膜肽连接形成的嵌合肽；/n较佳地，所述多肽为α螺旋肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合GSK-3β的多肽或所述多肽的衍生物，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列来自于与GSK-3β结合的A20序列；所述多肽的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3所示；所述多肽的衍生物包括所述特异性结合GSK-3β的多肽与细胞穿膜肽连接形成的嵌合肽；
较佳地，所述多肽为α螺旋肽。


2.如权利要求1所述的多肽或所述多肽的衍生物，其特征在于，所述细胞穿膜肽连接在所述多肽的N端或者C端；较佳地，所述细胞穿膜肽和所述多肽之间以两个谷氨酸连接。


3.如权利要求1或2所述的多肽或所述多肽的衍生物，其特征在于，所述细胞穿膜肽选自HIV-1病毒反转录激活因子蛋白的TAT肽、果蝇触角同源异型蛋白的转录因子Antp肽、Pep-1肽、Pep-2肽、MPG肽和RGD肽中的一种或多种，优选Pep-2肽。


4.如权利要求3所述的多肽或所述多肽的衍生物，其特征在于，所述嵌合肽的氨基酸序列如SEQIDNO：10、SEQIDNO：11、SEQIDNO：12、SEQIDNO：13或SEQIDNO：14所示。


5.一种抗肺纤维化的药物组合物，其特征在于，其活性成分含有如权利要求1～4任一项所述的多肽或所述多肽的衍生物；较佳地：
所述活性成分为单一活...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡卓伟，刘姗姗，吕晓希，
申请(专利权)人：北京伟峰益民科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11