一种抗人CCL1抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种能够结合人CCL1的抗体，其包括VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包括如SEQ ID NO:5～7所示的HCDR1～3，所述VL结构域包括如SEQ ID NO:8～10所示的LCDR1～3。本发明专利技术还公开了制备抗体的方法及所述抗体的应用。本发明专利技术获得的全新的结合人CCL1的抗体具有抑制CCL1相关生物学活性的作用，可以治疗CCL1相关疾病或用于检测CCL1。相关疾病或用于检测CCL1。相关疾病或用于检测CCL1。

An anti human CCL1 antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CCL1抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗人CCL1抗体及其应用。

技术介绍

[0002]化学趋化因子是指能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子，通过与受体结合向细胞内传递信号，在炎症反应、细胞迁移、血管生成等方面发挥重要作用。这些因子具有相似的结构与功能，根据其氨基端两个半胱氨酸的残基的相对位置可分为CXC、CC、C及CX3C共四大类。与趋化因子相似，根据趋化因子对CXC或CC的选择性，9个人类趋化因子受体被分为两个亚类，CXC趋化因子受体(CXCR)和CC趋化因子受体(CCR)。
[0003]趋化因子C
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C基序配体1(CCL1)是位于人类染色体17q11.2
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q12上的CC亚家族趋化因子基因簇中的基因之一。已知CCL1由活化的单核/巨噬细胞、T淋巴细胞(Th1、Th2、Tc)和内皮细胞产生。它主要行使对单核/巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的化学趋化作用，被认为在炎症过程中发挥重要功能。此外，C
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C基序趋化因子受体8(CCR8)，是已知的CCL1受体，在单核/巨噬细胞、Th2和调节性T淋巴细胞(Treg)中高表达。CCL1与多种疾病如纤维化疾病、慢性阻塞性肺部疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)、慢性肺炎、急性呼吸窘迫症、硬化性胆管炎、感染性疾病以及肿瘤的生长相关。
[0004]肺纤维化：肺部最为严重的一种病理状态，其病理改变大多表现为最初的下呼吸道炎症，以及肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，伴有成纤维母细胞和II型肺泡细胞增殖、细胞因子释放，细胞外基质蛋白和胶原沉积，最终引起肺部改变。肺纤维化患者肺部肺泡逐渐被纤维性物质取代，导致肺组织变硬变厚，肺脏气体交换能力逐步丧失，导致患者不同程度缺氧而出现呼吸困难，最后因呼吸衰竭而死亡。肺纤维化是呼吸病的四大病种之一，病因复杂，发病机制不明，目前已有的治疗肺纤维化的药物和方法十分有限，且疗效差强人意，预后极差，5年生存率仅为50％。研究发现，无论是肺纤维化病人还是肺纤维化小鼠的肺泡灌洗液中CCL1的含量显著增加，并且CCL1表达越高，肺功能越差。CCL1主要由肺泡巨噬细胞分泌，大量分泌的CCL1一方面诱导巨噬细胞和T细胞的募集并活化为M2型或Th2型，另一方面又能促进肺纤维化效应细胞
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成纤维细胞的活化。此外，特异性敲除肺泡巨噬细胞中CCL1的表达抑制博来霉素所致的小鼠肺纤维化。因此，CCL1参与了肺纤维化的发病。
[0005]与此同时，我们发现肝纤维化组织中，CCL1的表达显著增加，CCL1诱导肝星型细胞的迁移和活化。敲除CCL1表达抑制CCl4诱导的小鼠肝纤维化。
[0006]肺病：如急性呼吸窘迫症(Acute Respiratory Distress Syndrome)，由各种肺内和肺外致病因素所导致的急性弥漫性肺损伤和进而发展的急性呼吸衰竭。研究发现，在ARDS病人肺泡灌洗液中CCL1水平显著升高，CCL1引起大量炎性细胞的浸润，促进炎症介质及细胞因子的释放，参与了ARDS的发病。此外，亦有报道证明CCL1参与了慢性肺炎(Hiroyuki Kishi等，2016)、COPD(Takabatake N等，2006)、过敏性哮喘(R.Montes
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Vizuet等，2006)的发病。
[0007]肿瘤：CCL1促进多种肿瘤疾病的发生和发展。乳腺癌(Kuehnemuth B等，2018；Xu Y
等，2017)，结肠癌(Li Z等，2018)，膀胱癌(Yeh CR等，2015)，肺癌(Pastor MD等，2016)，肝癌(Wiedemann GM等，2019)。
[0008]此外，CCL1还参与了下列疾病的进程，如：
[0009]1型糖尿病(Joseph Cantor；2007)；
[0010]小柳原田病(Chang R等，2018)；
[0011]过敏性皮炎和银屑病(Kim HO等，2012；Gombert M等，2005)；
[0012]硬化性胆管炎(Zen Y等；2013)；
[0013]腹膜粘连(Hoshino A等；2007)；
[0014]大疱性类天疱疮(Miyagaki T等；2009)；
[0015]脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(Saito M等，2017)。
[0016]因此，利用CCL1拮抗剂治疗此类疾病，具有重要价值。
[0017]上世纪90年代中期以来，抗体药物在新药中崭露头角。在治疗性应用中，全人抗体可以克服鼠源单克隆抗体在临床应用中的诸多缺点：如诱发人体产生抗鼠抗体(HAMA)反应，不能有效引起CDC及ADCC等。随着对人类抗体基因及结构的研究及分子生物学技术的进展，利用噬菌体抗体库制备人源抗体，已成为获得全人抗体的最主要手段之一。
[0018]噬菌体抗体库是利用基因重组技术将外源基因的基因型和表型统一在同一个噬菌体颗粒内。更重要的是，该类噬菌体抗体，不仅可以与特异的配体结合，而且保持感染能力。这样又将抗体的选择能力和噬菌体的扩增能力偶联起来，使得噬菌体展示技术成为一种极其有效抗体筛选系统。经典的筛选方法是将抗原纯化，然后与抗体库孵育，通过数次“吸附—洗涤—洗脱—扩增”的过程(即生物淘选)，使得特异克隆得以富集。可以迅速得到针对靶抗原的抗体，通过功能筛选最终获得中和性抗体。
[0019]针对CCL1的抗体已见报导，例如，R&D公司已生产鼠抗人CCL1单克隆抗体MAB272，但其仅作为试剂用于检测领域，而不能抑制CCL1相关生物学活性并用于治疗CCL1相关疾病。由此，本领域急需一种治疗性抗人CCL1抗体。

技术实现思路

[0020]为解决现有技术中缺乏一种具有治疗作用的抗CCL1抗体的缺陷，本专利技术提供一种具有潜在医学和药学价值的抗人CCL1抗体及其应用。
[0021]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案的第一方面为：提供一种能够结合人CCL1的抗体，其中，所述的抗体包括VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL结构域包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其具有下述CDR或CDR的变体：
[0022]HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；
[0023]HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；
[0024]HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；
[0025]LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；
[0026]LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；
[0027]LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
[0028]所述CDR的变体为在所述CDR的氨基酸序列上具有1～3个氨基酸残基的增加、缺失或替换；或与所述CDR的氨基酸序列具有至少80％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够结合人CCL1的抗体，其特征在于，所述的抗体包括VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL结构域包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述VH结构域还包括VH框架区，所述VL结构域还包括VL框架区；所述的VH框架区为人或鼠的VH1、VH2、VH3、VH4、VH5或VH6的VH框架区；所述的VL框架区为人的或鼠的Vκ1、Vκ2、Vκ3或Vκ4或Vλ1、Vλ2、Vλ3或Vλ4的VL框架区。3.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的框架区包括：HFR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；HFR2，氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；HFR3，氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；LFR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；LFR2，氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；LFR3，氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。4.如权利要求2或3所述的抗体，其特征在于，所述的抗体具有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区。5.如权利要求1
‑
4任一项中所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为全人源抗体。6.如权利要求1
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5任一项中所述的抗体，其特征在于，所述的抗体选自Diabody、Triabody、Tetrabody、Fab、scFv
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Fc和IgG；优选地，当所述抗体为scFv
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Fc时...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡卓伟，刘姗姗，严君，崔冰，
申请(专利权)人：北京伟峰益民科技有限公司，
类型：发明
国别省市：