一种全人源抗人白介素17A抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种全人源抗人白介素17A抗体。所述抗体包含重链可变区，和/或轻链可变区；所述重链可变区为a)：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.8所示，或b)：所述a)中的人重链框架区改变后的重链可变区；所述轻链可变区为a)：其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.9所示，或b)：所述a)中的人轻链框架区改变后的轻链可变区。本发明专利技术获得的全新的IL‑17A的人抗体分子具有抑制IL‑17A相关生物学活性；可以治疗IL‑17A相关疾病。

A Whole Human Anti-Interleukin 17A Antibody and Its Application

The invention discloses an all-human anti-interleukin 17A antibody. The antibody comprises a heavy chain variable region and/or a light chain variable region; the heavy chain variable region is a): its amino acid sequence is shown in SEQ ID NO.1, the nucleotide sequence encoding it is preferred as SEQ ID NO.8, or b): the heavy chain variable region in the human heavy chain frame region is changed; the light chain variable region is a): its amino acid sequence is shown in SEQ ID NO.2 and encodes its nucleus. The glycoside sequence is preferred as shown in SEQ ID NO.9, or b: the light chain variable region in the changed human light chain frame region of the aforementioned a). The novel human antibody molecule of IL 17A obtained by the invention has the biological activity of inhibiting IL 17A and can treat IL 17A related diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种全人源抗人白介素17A抗体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种全人源抗人白介素17A抗体及其用途。
技术介绍
人白细胞介素17(humaninterleukin-17，hIL-17)于1993年从一种激活的T细胞杂交瘤中分离出来，最初在啮齿类动物发现时称为细胞毒性T细胞抗原8(CTLA8)。目前已知IL-17即IL-17A主要由Th-17细胞分泌，且在IL-17家族中存在6个成员(IL-17A-F)，它们分别由150～180个氨基酸构成，通常以二聚体的形式存在。IL-17A可诱导多种细胞(包括成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞以及巨噬细胞等)产生其他细胞因子如IL-6、G-CSF、GM-CSF、IL-1β、TGF-β、TNF-α；化学趋化因子如IL-8，GRO-α，和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)；以及前列腺素PGE2。IL-17诱导化学趋化因子IL-8，GRO-α以及MCP-1增加，促使中性粒细胞和单核细胞的募集。IL-17诱导产生的IL-6和PGE2加强局部炎症反应；诱导细胞间黏附因子(ICAM)产生，促使T细胞反应。IL-17具有强大的促炎作用，其与多种疾病如类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)、银屑病、气道炎症、慢性炎性疾病、纤维增生疾病以及肿瘤的生长相关。类风湿性关节炎：一种以关节滑膜炎为特征，以慢性多发性关节炎为主要临床表现的一种自身免疫性疾病。研究表面，在病人关节的滑液中可以检测到活性的IL-17，IL-17刺激软骨细胞产生iNOS和NO及其它与分解代谢相关的酶，并与IL-1β，TNF-α一起刺激成骨细胞分泌如GM-CSF和IL-6等细胞因子，从而抑制软骨细胞增殖和蛋白多糖合成，调节破骨细胞，发生骨破坏。IL-17还可以诱导基质金属蛋白酶，直接在疾病进展中起到破坏性作用。因此，阻断IL-17/IL-17R通路可能是治疗RA的新途径。研究发现，利用抗鼠IL-17抗体治疗胶原诱导的关节炎(collagen-inducedarthritis，CIA)模型中，关节局部炎症，软骨破坏，骨质侵蚀明显减轻。银屑病(Teunissen等，1998)和银屑病关节炎：抗IL-17A抗体SecukinumabIII期研究结果显示，300mgSecukinumab治疗12周后在消除银屑病皮损方面的疗效显著高于安慰剂组(p<0.0001)2015年1月美国FDA批准Secukinumab治疗恶性瘢块状银屑病，此抗体在日本也应用于银屑病性关节炎。纤维化疾病：多种慢性纤维化性疾病均发现与IL-17信号传导通路相关(Mi等，2011)。各种原因引起的慢性病主要以慢性炎症和组织纤维化为基本病理特征。许多慢性病，包括哮喘、支气管扩张、慢阻肺、肺结核、肺癌、间质性肺病等，都伴有纤维增生或以纤维增生为主要病变。因此，纤维增生快慢和纤维化程度决定了这些疾病的临床预后。肺成纤维细胞、肝星型胶质细胞分别是肺、肝纤维化发生发展过程中的关键效应细胞。肺病：如慢性阻塞性肺病(chronicobstructivepulmonarydiseases)，是一种具有气流受限特征的疾病，气流受限不完全可逆、呈进行性发展，多与肺部对有害颗粒物或有害气体的异常炎症反应有关。其病程的恶化，与气道中中性粒细胞的数量增多有关。研究表明，在COPD急性加重期及稳定期IL-17水平显著升高，IL-17引起中性粒细胞增多，促进释放IL-6、IL-8，打破基质金属蛋白酶平衡，参与了COPD的发病，是引起肺内炎症细胞浸润及肺实质破坏的主要原因之一。肿瘤：IL-17促进多种肿瘤疾病的发生和发展(Zeng等，2015)，尤其是结肠癌、膀胱癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌以及胃癌、脑垂体瘤，此外亦有报道淋巴瘤(Maggio等，2002，Ferretti等，2015)、前列腺癌(Liu等，2016)、子宫内膜癌(Ning等，2016)、甲状腺癌(Lu等，2016)。IL-17对食管鳞状细胞癌以及卵巢癌则呈现保护作用(Zeng等，2015)。其他疾病如：急性移植物排斥(Antonysamy等，1999；Yoshida等，2006；Tang等，2001)；全身性硬化症(Kurasawa等，2000)；全身性红斑狼疮(Wong等，2000)；自身免疫炎性肠炎和克罗恩病(Nielsen等，2003；Fujino等，2003；Yen等，2006)；心血管疾病，包括动脉粥样硬化(Csiszar和Ungvari，2004)，川崎病(Sohn等，2003)，缺血性心脏病(Csiszar，2003)，非酒精性肝病(Giles等，2016)和中风；病毒感染导致的疾病等。综上所诉，此类疾病均出现IL-17异常表达，利用IL-17拮抗剂治疗此类疾病，具有重要价值。上世纪90年代中期以来，抗体药物在新药中崭露头角。在治疗性应用中，全人抗体可以克服鼠源单克隆抗体在临床应用中的诸多缺点：如诱发人体产生抗鼠抗体(HAMA)反应，不能有效引起CDC及ADCC等。随着对人类抗体基因及结构的研究及分子生物学技术的进展，利用噬菌体抗体库制备人源抗体，已成为获得全人抗体的最主要手段之一。噬菌体抗体库是利用基因重组技术将外源基因的基因型和表型统一在同一个噬菌体颗粒内。更重要的是，该类噬菌体抗体，不仅可以与特异的配体结合，而且保持感染能力。这样又将抗体的选择能力和噬菌体的扩增能力偶联起来，使得噬菌体展示技术成为一种极其有效的抗体筛选系统。经典的筛选方法是将抗原纯化，然后与抗体库孵育，通过数次“吸附—洗涤—洗脱—扩增”的过程(即生物淘选)，使得特异克隆得以富集。可以迅速得到针对靶抗原的抗体，通过功能筛选最终获得中和性抗体。针对IL-17A的抗体已见报道，WO2006/013107(诺华制药股份有限公司)报道了IL-17A的特异性抗体，特别称为AIN457(Secukinumab)，从杂交瘤分离人抗IL-17抗体与人IL-17A的亲和力为227pM。2014年10月，诺华公司公布的AIN457(Secukinumab)III期研究结果显示，300mgAIN457(Secukinumab)治疗12周后在消除银屑病皮损方面的疗效显著高于安慰剂组(p<0.0001)。2015年1月美国FDA批准Secukinumab治疗恶性瘢块状银屑病，此抗体在日本也应用于银屑病性关节炎。R&D公司已生产鼠抗人IL-17单克隆抗体MAB317。WO2006/054059(UCB细胞技术公司)描述了IL-17A中和性抗体分子，该分子最初从杂交瘤中分离并PEG化抗体片段。采用BIAcore测定该片段对IL-17的亲和力为133-365pM。CN200580026569.4(诺瓦提斯公司)报道IL-17A的特异性抗体，并应用与治疗IL-17介导的相关疾病。CN200680046605.8(伊莱利利公司)报道IL-17A的特异性抗体，并应用与治疗IL-17介导的相关疾病。CN200780023566.4(阿斯特拉捷利康股份公司)，报道利用噬菌体库分离获得抗IL-17单链抗体片段。CN200780029886.0(UCB医药有限公司)报道IL-17A的特异性抗体，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种全人源抗人白介素17A抗体，其特征在于，其包含重链可变区、和/或轻链可变区；所述重链可变区为a)：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.8所示，或b)：所述a)中的人重链框架区改变后的重链可变区；所述轻链可变区为a)：其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.9所示，或b)：所述a)中的人轻链框架区改变后的轻链可变区。

【技术特征摘要】
1.一种全人源抗人白介素17A抗体，其特征在于，其包含重链可变区、和/或轻链可变区；所述重链可变区为a)：其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.8所示，或b)：所述a)中的人重链框架区改变后的重链可变区；所述轻链可变区为a)：其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示、编码其的核苷酸序列优选如SEQIDNO.9所示，或b)：所述a)中的人轻链框架区改变后的轻链可变区。2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述人重链框架区改变为人重链框架区的替换，替换后的框架区根据抗体框架分类属于人的VH1、VH2、VH3、VH4和/或VH5；较佳地，属于人的VH3；更佳地，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；进一步更佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；和/或，所述人轻链框架区改变为人轻链框架区的替换和/或其点突变体，替换后的框架区根据抗体框架分类属于人的Vκ1、Vκ2、Vκ3、Vκ4、Vλ1、Vλ2和/或Vλ4；较佳地，属于人的Vκ1或其点突变体；更佳地，所述属于人的Vκ1的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；进一步更佳地，编码所述的轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示。3.如权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述点突变体的突变位置位于人轻链框架区的FR3区；较佳地，按照Kabat系统，所述突变位置位于序列SEQIDNO.4的第66位、第85位和/或第86位；更佳地，所述第66位突变后的氨基酸为丙氨酸，第85位突变后的氨基酸为天冬酰胺，第86位突变后的氨基酸为丝氨酸或者苏氨酸。4.如权利要求3所述抗体，其特征在于，所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.5、SEQIDNO.6或SEQIDNO.7所示；较佳地，编码所述的轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.12、SEQIDNO.13或SEQIDNO.14所示。5.如权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；较佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，且所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；或者所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，且所述轻链可变区的氨基酸如SEQIDNO.4所示；较佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，且所述轻链核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；或者所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，且所述轻链可变区的氨基酸如SEQIDNO.5所示；较佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，且所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；或者所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，且所述轻链可变区的氨基酸如SEQIDNO.6所示；较佳地，编码所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，且所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；或者所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，且所述轻链可变区的氨基酸如SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡卓伟，崔冰，孙巍，
申请(专利权)人：北京伟峰益民科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11