抗TNFα抗体及其功能片段制造技术

本发明专利技术涉及能够与肿瘤坏死因子α(TNFα)结合的抗体分子及其功能片段，其制备方法及其治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗TNFα抗体及其功能片段
本专利技术涉及能够与肿瘤坏死因子α(TNFα)结合的抗体分子及其功能片段，其制备方法及其治疗用途。专利技术背景TNFα是一种同源三聚体促炎细胞因子，由免疫系统细胞释放并与之相互作用。TNFα还被证明在许多人类疾病中上调，包括慢性疾病，例如类风湿性关节炎、克罗恩病(Crohn'sdisease)、溃疡性结肠炎和多发性硬化症。已提出了针对TNFα的抗体用于预防和治疗内毒素性休克(Beutler等人，Science,234,470-474,1985)。Bodmer等人(CriticalCareMedicine,21,S441-S446,1993)和Wherry等人(CriticalCareMedicine,21,S436-S440,1993)讨论了抗TNFα抗体在治疗感染性休克中的治疗潜力。Kirschenbaum等人(CriticalCareMedicine,26,1625-1626,1998)也讨论了抗TNFα抗体在治疗感染性休克中的用途。可以使用抗TNFα单克隆抗体有效地治疗胶原蛋白诱导的关节炎(Williams等人(PNAS-USA,89,9784-9788,1992))。Feldman等人(TransplantationProceedings,30,4126-4127,1998)、Adorini等人(TrendsinImmunologyToday,18,209-211,1997)和Feldman等人(AdvancesinImmunology,64,283-350,1997)讨论了抗TNFα抗体在治疗类风湿性关节炎和克罗恩病中的用途。先前在这种治疗中使用的TNFα抗体通常是嵌合抗体，例如美国专利号5,919,452中所描述的那些。在现有技术中已经描述了针对TNFα的单克隆抗体。Meager等人(Hybridoma,6,305-311,1987)描述了针对重组TNFα的鼠单克隆抗体。Fendly等人(Hybridoma,6,359-370,1987)描述了使用针对重组TNFα的鼠单克隆抗体来定义TNFα上的中和表位。此外，在国际专利申请WO92/11383中，公开了TNFα特异性重组抗体，包括CDR移植抗体。Rankin等人(BritishJ.Rheumatology,34,334-342,1995)描述了这种CDR移植抗体在治疗类风湿性关节炎中的用途。美国专利号5,919,452公开了抗TNFα嵌合抗体及其在治疗与TNFα存在相关的病理中的用途。Stephens等人(Immunology,85,668-674,1995)、GB-A-2246570、GB-A-2297145、US8,673,310、US2014/0193400、EP2390267B1、US8,293,235、US8,697,074、WO2009/155723A2和WO2006/131013A2公开了其他的抗TNFα抗体。与高变区或CDR从中衍生的抗体相比，现有技术的重组抗TNFα抗体分子通常对TNFα的亲和力降低。所有目前市售的TNFα抑制剂均作为推注注射以每周或更长间隔静脉内或皮下施用，导致高起始浓度，所述浓度稳定下降直至下一次注射。目前批准的抗TNFα生物治疗剂包括(i)英夫利昔单抗(infliximab)，它是一种嵌合IgG抗人单克隆抗体(WiekowskiM等人："Infliximab(Remicade)",HandbookofTherapeuticAntibodies,WILEY-VCH；Weinheim,2007-01-01,p.885-904)；(ii)依那西普(etanercept)，它是一种TNFR2二聚体融合蛋白，具有IgG1Fc(iii)阿达木单抗(adalimumab)，它是一种完整的人单克隆抗体(mAb)(KupperH等人："Adalimumab(Humira)",HandbookofTherapeuticAntibodies,WILEY-VCH；Weinheim,2007-01-01,p.697-732)；(iv)赛妥珠单抗(certolizumab)，它是一种聚乙二醇化Fab片段(MelmedGY等人："Certolizumabpegol",NatureReviews.DrugDiscovery,NaturePublishingGroup,GB,Vol.7,No.8,2008-08-01,p.641-642)；(v)戈利木单抗(Golimumab)，它是一种人IgG1K单克隆抗体(MazumdarS等人："Golimumab",mAbs,LandesBioscience,US,Vol.1,No.5,2009-09-01,p.422-431)。然而，多种生物仿制药正在开发中，并且欧洲已经批准了称为Remsima的英夫利昔单抗的模拟物。英夫利昔单抗对TNFα的亲和力相对较低(KD>0.2nM；Weir等人，2006,Therapy3:535)，并且在L929测定中具有有限的中和效力。此外，英夫利昔单抗与来自食蟹猴(Cynomolgus)或恒河猴(Rhesus)的TNFα基本上没有交叉反应性。然而，对于抗TNFα抗体，非常需要与来自猴子的TNFα有交叉反应性，因为这将允许用灵长类动物进行动物试验，在许多方面反映人类的情况。依那西普虽然是二价分子，但是它以每个依那西普分子一个三聚体的比例结合TNFα，排除了大抗原-生物治疗复合物的形成(Wallis,2008,LancetInfectDis,8:601)。它不抑制单核细胞中LPS诱导的细胞因子分泌(Kirchner等人，2004,Cytokine,28:67)。赛妥珠单抗的效力略高于英夫利昔单抗的效力，但仍然不令人满意。赛妥珠单抗不抑制MLR中的T细胞增殖(Vos等人，2011,Gastroenterology,140:221)。EP2623515A1公开了人源化抗TNFα抗体及其抗原结合片段(Fab)。从所公开的实施例中可以清楚地看出，在L929中和测定中，所得人源化Fab片段的效力与英夫利昔单抗的效力相当(参见表2和5)。测试了交叉反应性的唯一抗TNFαIgG抗体仅与恒河猴TNF-α弱结合(参见[0069]；图3)。未测试与食蟹猴TNFα的交叉反应性。此外，与人TNFβ存在弱结合(见图3)。因此，EP2623515A1没有公开抑制TNFα诱导的L929细胞凋亡的效力高于英夫利昔单抗并且与恒河猴TNFα和食蟹猴TNFα有交叉反应性的抗TNFα抗体或其功能片段。WO2012/007880A2公开了一种融合蛋白形式的修饰型单结构域抗原结合分子(SDAB)，其包含结合一个或多个靶标的一个或多个单抗原结合结构域(例如TNFα)、接头以及一个或多个聚合物分子。给出的唯一具体实例称为SDAB-01，包括用柔性接头连接的与TNFα结合的两个抗原结合结构域，以及一个支持位点特异性PEG化的C-末端半胱氨酸(见图3)。WO2012/007880A2未能比较SDAB-01与已知TNFα抗体如英夫利昔单抗在基于L929细胞的中和测定中的效力，也未能评估其他SDAB-01特异性参数，如阻断TNFα-TNFRI/II相互作用的效力本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.能够与人肿瘤坏死因子α(TNFα)结合的抗体或其功能片段，其中所述抗体或功能片段包含(i)VL结构域，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，所述CDR1区具有与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR2区具有与SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR3区具有与SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，以及(ii)VH结构域，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，所述CDR1区具有与SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR2区具有与SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR3区具有与SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.17 EP 16000653.21.能够与人肿瘤坏死因子α(TNFα)结合的抗体或其功能片段，其中所述抗体或功能片段包含(i)VL结构域，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，所述CDR1区具有与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR2区具有与SEQIDNO：2所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR3区具有与SEQIDNO：3所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，以及(ii)VH结构域，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，所述CDR1区具有与SEQIDNO：4所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR2区具有与SEQIDNO：5所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列，所述CDR3区具有与SEQIDNO：6所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗体或其功能片段，其中所述抗体或功能片段包含(i)VL结构域，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，所述CDR1区具有如SEQIDNO：7所示的氨基酸序列，所述CDR2区具有如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列，所述CDR3区具有如SEQIDNO：8所示的氨基酸序列，以及(ii)VH结构域，其包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，所述CDR1区具有如SEQIDNO：9所示的氨基酸序列，所述CDR2区具有如SEQIDNO：10所示的氨基酸序列，所述CDR3区具有如SEQIDNO：11所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其功能片段，其中所述抗体或功能片段(i)与人TNFα结合的解离常数(KD)小于1nM，特别是小于750pM，更特别是小于100pM；(ii)与恒河猴(Rhesus)TNFα和食蟹猴(Cynomolgus)TNFα交叉反应；(iii)抑制TNFα诱导的细胞凋亡的效力大于英夫...

【专利技术属性】
技术研发人员：迪·贡德，塞巴斯蒂安·迈耶，
申请(专利权)人：努玛创新有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH