抗TNFα抗体及其功能片段制造技术

本发明专利技术涉及能够与肿瘤坏死因子α(TNFα)结合的抗体分子及其功能片段，涉及它们的制备方法并且涉及它们的治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗TNFα抗体及其功能片段
本专利技术涉及能够与肿瘤坏死因子α(TNFα)结合的抗体分子及其功能片段，涉及它们的制备方法并且涉及它们的治疗用途。
技术介绍
TNFα是一种同三聚体促炎细胞因子，由免疫系统细胞释放并与之相互作用。还已经证实的是，TNFα在许多人类疾病中表现出上调，包括慢性疾病，例如类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎和多发性硬化症。已提出用于预防和治疗内毒素性休克的针对TNFα的抗体(Beutler等，Science，234，470-474，1985)。Bodmer等人(CriticalCareMedicine，21，S441-S446，1993)和Wherry等人(CriticalCareMedicine，21，S436-S440，1993)讨论了抗TNFα抗体治疗脓毒症休克的治疗潜力。Kirschenbaum等人也讨论了抗TNFα抗体在治疗脓毒症休克中的用途(CriticalCareMedicine，26，1625-1626，1998)。使用抗TNFα单克隆抗体能够有效地治疗胶原诱导的关节炎(Williams等(PNAS-USA，89，9784-9788，1992))。在Feldman等人(TransplantationProceedings，30，4126-4127，1998)、Adorini等人(TrendsinImmunologyToday，18，209-211，1997)和在Feldman等人(AdvancesinImmunology，64，283-350，1997)中讨论了抗TNFα抗体在治疗类风湿性关节炎和克罗恩病中的用途。先前在这种治疗中使用的TNFα抗体通常是嵌合抗体，例如美国专利号5,919,452中所述的那些。在现有技术中已经描述了针对TNFα的单克隆抗体。Meager等人(Hybridoma，6，305-311，1987)描述了针对重组TNFα的鼠单克隆抗体。Fendly等人(Hybridoma，6，359-370，1987)描述了针对重组TNFα的鼠单克隆抗体在界定TNF上中和表位中的用途。此外，在国际专利申请WO92/11383中，公开了特异性针对TNFα的重组抗体，包括CDR移植抗体。Rankin等人(BritishJ.Rheumatology，34，334-342，1995)描述了这种CDR移植抗体在治疗类风湿性关节炎中的用途。美国专利号5,919,452公开了抗TNFα嵌合抗体和它们在治疗与TNFα有关的病理中的用途。进一步的抗TNFα抗体公开于Stephens等人(Immunology，85，668-674，1995)、DrugsinR&D，Vol.4No.3，2003，第174-178页、EP2623515A1、WO2012/007880A2、WO2015/144852A1、WO2015/065987A1、GB-A-2246570、GB-A-2297145、US8,673,310、US2014/0193400、EP2390267B1、US8,293,235、US8,697,074、WO2009/155723A2和WO2006/131013A2中。与高变区或CDR的来源抗体相比，现有技术的重组抗TNFα抗体分子通常对TNFα具有降低的亲和力。所有目前市售的TNFα抑制剂以每周或更长的间隔作通过静脉或皮下推注施用，导致高起始浓度，其直至下一次注射前稳定下降。目前已批准的抗TNFα生物疗法包括(i)英夫利昔单抗，嵌合IgG抗人单克隆抗体WiekowskiM等：″Infliximab(Remicade)″，HandbookofTherapeuticAntibodies，WILEY-VCH；Weinheim，2007-01-01，p.885-904)；(ii)依那西普，具有IgG1Fc的TNFR2二聚体融合蛋白(iii)阿达木单抗，全人单克隆抗体(mAb)KupperH等：″Adalimumab(Humira)″，HandbookofTherapeuticAntibodies，WILEY-VCH；Weinheim，2007-01-01，p.697-732)；(iv)赛妥珠单抗，聚乙二醇化Fab片段MelmedGY等：″Certolizumabpegol″，NatureReviews.DrugDiscovery，NaturePublishingGroup，GB，Vol.7，No.8，2008-08-01，p.641-642)；(v)戈利木单抗，人IgG1K单克隆抗体MazumdarSetal：″Golimumab″，mAbs，LandesBioscience，US，Vol.1，No.5，2009-09-01，p.422-431)。然而，各种生物仿制药正在开发中，并且在欧洲已经批准了称为Remsima的英夫利昔单抗的模拟物。英夫利昔单抗对TNFα具有相对低的亲和力(KD＞0.2nM；Weir等，2006，Therapy3：535)并且在L929测定中具有有限的中和效力。此外，英夫利昔单抗显示与来自食蟹猴(Cynomolgus)或恒河猴(Rhesusmonkeys)的TNFα基本上没有交叉反应性。然而，对于抗TNFα抗体，高度期望与来自猴子的TNFα的交叉反应性，因为这考虑到用灵长类动物进行动物试验，在许多方面反映了在人类中的情况。依那西普虽然是二价分子，但是以每个依那西普分子一个三聚体的比例结合TNFα，排除了大抗原-生物治疗复合物的形成(Wallis，2008，LancetInfectDis，8：601)。它不抑制单核细胞中LPS诱导的细胞因子分泌(Kirchner等，2004，Cytokine，28：67)。阿达木单抗的效力类似于英夫利昔单抗的效力。阿达木单抗的另一缺点是其稳定性差，例如在热解折叠测试中测定的。在这样的测试中阿达木单抗的解链温度(Tm)被测定为67.5℃。但是，抗体的Tm值越低，其一般稳定性越低。较低的Tm使得抗体不太适用于药物用途，例如用于口腔给药。赛妥珠单抗的效力略高于英夫利昔单抗，但仍不令人满意。赛妥珠单抗在MLR中不抑制T细胞增殖(Vos等，2011，Gastroenterology，140：221)。SaldanhaJW等：″MolecularEngineeringI：Humanization″，HandbookofTherapeuticAntibodies，Chapter6，2007-01-01，WILEY-VCH，Weinheim，p.119-144公开了用于人源化单克隆抗体的不同策略，包括CDR移植、重塑/镶饰、SDR转移和去免疫技术。需要改进的抗体分子来治疗慢性炎性疾病，例如炎性肠病。抗体分子应该至少具有(i)对人TNFα的高亲和力(即KD＜200pM)，(ii)抑制TNFα诱导的L929细胞凋亡的高效力，(iii)与食蟹猴和恒河猴的TNFα显著的亲和力(例如KD＜2nM)，和(iv)在热解折叠实验中测定的可变结构域的高解链温度(例如Tm＞70℃)。
技术实现思路
本申请的专利技术人发现某些抗TNFα抗体及其功能片段表现出有利性质的组合，包括对人TNFα的高亲和力(KD＜200pM)，大于英夫利昔单抗的抑制TNF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够结合人肿瘤坏死因子α(TNFα)的抗体或其功能片段，其中所述抗体或功能片段包含：(i)VL结构域，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列的CDR1区、具有SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的CDR2区和具有SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的CDR3区；和(ii)VH结构域，其包含具有SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列的CDR1区、具有SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列的CDR2区和具有SEQ ID NO：6中所示的氨基酸序列的CDR3区。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.17 EP 16160923.51.一种能够结合人肿瘤坏死因子α(TNFα)的抗体或其功能片段，其中所述抗体或功能片段包含：(i)VL结构域，其包含具有SEQIDNO：1中所示的氨基酸序列的CDR1区、具有SEQIDNO：2中所示的氨基酸序列的CDR2区和具有SEQIDNO：3中所示的氨基酸序列的CDR3区；和(ii)VH结构域，其包含具有SEQIDNO：4中所示的氨基酸序列的CDR1区、具有SEQIDNO：5中所示的氨基酸序列的CDR2区和具有SEQIDNO：6中所示的氨基酸序列的CDR3区。2.根据权利要求1所述的抗体或功能片段，其中所述抗体或功能片段包含：(i)VL结构域，其包含具有SEQIDNO：1中所示氨基酸序列的CDR1区、具有SEQIDNO：2中所示氨基酸序列的CDR2区和具有SEQIDNO：3中所示氨基酸序列的CDR3区；和(ii)VH结构域，其包含具有SEQIDNO：4中所示氨基酸序列的CDR1区、具有SEQIDNO：7中所示氨基酸序列的CDR2区和具有SEQIDNO：6中所示氨基酸序列的CDR3区。3.根据权利要求1或2所述的抗体或功能片段，其中所述抗体或功能片段(i)以小于200pM的解离常数(KD)结合人TNFα；(ii)与恒河猴(Macacamulatta(Rhesus))的TNFα以及与食蟹猴(Macacafascicularis(Cynomolgus))的TNFα交叉反应；(iii)如通过L929测定法所测定，具有比英夫利昔单抗更强的抑制TNFα诱导细胞凋亡的效力；(iv)包含具有通过差示扫描荧光测定法测定的至少75℃的解链温度的可变结构域；和/或(v)能够以至少2的化学计量比(抗体：TNFα三...

【专利技术属性】
技术研发人员：迪·冈德，塞巴斯蒂安·迈尔，
申请(专利权)人：努玛创新有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH