PACAP的稳定化肽制造技术

本发明专利技术以提高稳定性的PACAP肽的提供作为目的。发现通过将PACAP的序列中的3位和/或8位的天冬氨酸的羧基用四唑取代，通过稳定性显著地亢进解决课题。

Stable peptide of PACAP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PACAP的稳定化肽
本专利技术涉及有PACAP的生理活性的稳定化肽、含所述肽的神经保护剂、角膜神经突起形成促进剂、泪液分泌促进剂、干眼治疗剂、角膜上皮障碍治疗剂、角膜内皮障碍治疗剂、血管内皮功能改善剂、抗炎症剂、或者医药组合物。
技术介绍
神经细胞是构成中枢神经系统和末梢神经系统中大不同的神经系统的细胞。神经细胞由脑卒中，脑梗塞等的脑血管障碍等的外部要因，或异常蛋白质的蓄积、氧化应激、炎症等的内在要因等易受障碍，而其再生能低，从而一旦发生障碍，则成为显著地降低该患者的QOL的要因。作为伴随中枢神经系统的神经变性及脱落的神经变性疾病，除了阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩性侧索固化症、多发性固化症等的神经变性疾病之外，可举出青光眼等的视神经的变性疾病或神经性耳聋等的感觉神经变性疾病。随着神经科学的发展，发现了各种神经保护因子，期待作为神经障碍的预防或治疗药的开发。发现了使引起神经变性的自由基或兴奋性氨基酸减少的药剂或可保护和/或修复神经细胞的药剂(例如神经营养因子或免疫抑制剂等的免疫亲和素配体等)有神经保护作用，另一方面发现了垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP)、CD44或人脑羧基肽酶B(HBCPB)等的生物体内蛋白质有神经保护作用(专利文献1及2)。垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP)是从绵羊下丘脑提取物发现的神经肽。PACAP可有在垂体前叶细胞中刺激cAMP形成的活性。作为PACAP，存在由38个氨基酸残基构成的PACAP38和由27个氨基酸残基构成的PACAP27，两者均有同等的作用(非专利文献1及2)。PACAP属于血管活性肠多肽(VIP)/胰泌素/胰高血糖素超家族，人PACAP27的序列与血管活性肠多肽(VIP)有68％的相同性。PACAP和VIP与PAC1受体(PAC1R)、VPAC1受体(VPAC1R)及VPAC2受体(VPAC2R)结合，但其亲和性不同。PAC1R对于PACAP具有高的选择性而结合，对于PACAP的亲和性与对于VIP的亲和性比较而言是1000倍以上。一方面，VPAC1R及VPAC2R一同对于PACAP和VIP有同程度的亲和性。PACAP有多样的生理作用，作为神经保护物质、已知免疫抑制因子、血管扩张因子、外分泌线分泌促进因子(专利文献3)、神经突起形成促进因子(专利文献4)的生理作用。利用PACAP所具有的多样的生理活性而进行药品的开发。但是已知，如PACAP一样的比较短的肽多在水溶液中不稳定，还由于缺乏蛋白酶抗性而有在生物体内的半衰期短这样的问题。【现有技术文献】【专利文献】【专利文献1】特表2014-510101号公报【专利文献2】特开2012-232952号公报【专利文献3】特开2009-269818号公报【专利文献4】WO2005/102375号单行本【非专利文献】【非专利文献1】S.Bourgault(2009)CurrentMedicinalChemistry16,4462-4480【非专利文献2】LouiseDickson(2009)Pharmacology&Therapeutics,12,294-316【专利技术的概要】【专利技术要解决的课题】本专利技术旨在提供在水溶液中稳定性高的PACAP的稳定化肽、含所述肽的神经保护剂、神经突起形成促进剂、泪腺分泌促进剂、干眼治疗或预防用医药组合物、角膜上皮障碍治疗或预防用医药组合物、神经障碍治疗或预防用医药组合物、角膜内皮障碍治疗或预防用医药组合物、血管内皮功能改善剂。【用于解决课题的手段】本专利技术人为了提高PACAP在水溶液中的稳定性而进行锐意研究的结果，通过将存在于PACAP肽中的天冬氨酸的羧基取代为四唑，发现可大幅地提高在水溶液中的稳定性，从而完成本专利技术。从而，本专利技术涉及以下项目：[1]由在下式所表示的序列中，3位和/或8位的天冬氨酸残基的羧基被四唑取代的序列或其改变序列构成的肽：H-X1-D-G-I-F-T-D-X2-Y-X3-R-Y-R-X4-X5-X6-A-X7-X8-X9-Y-L-A-A-V-X10(SEQIDNO:3)式中，X1是中性氨基酸、X2是中性氨基酸、X3是中性氨基酸、X4是碱性氨基酸、X5是中性氨基酸或egTz、X6是非极性氨基酸、X7是非极性氨基酸、X8是碱性氨基酸、X9是碱性氨基酸、X10是非极性氨基酸，其中上述肽有与PAC1R、VPAC1R及VPACR2的结合性，上述改变序列是在SEQIDNO:3的序列中缺失或附加1个或多个氨基酸的序列。[2]项目1所述的肽，其中X1、X2及X3中的中性氨基酸是丙氨酸或丝氨酸。[3]项目1或2所述的肽，其中X4、X8及X9中的碱性氨基酸是赖氨酸或精氨酸。[4]项目1～3之任一项所述的肽，其中X5是谷氨酰胺、丙氨酸、或者egTz。[5]项目1～4之任一项所述的肽，其中X6还是甲硫氨酸、正亮氨酸、亮氨酸或丙氨酸。[6]项目1～5之任一项所述的肽，其中X7是缬氨酸或丙氨酸。[7]项目1～6之任一项所述的肽，其中X10是亮氨酸或丙氨酸。[8]项目1～7之任一项所述的肽，其中SEQIDNO:3的3位及8位的天冬氨酸的羧基被四唑取代。[9]项目1～8之任一项所述的肽，其中在上述肽中，N末端被乙酰化或甲磺酰化。[10]项目1～9之任一项所述的肽，其中在上述肽中，N末端被乙酰化。[11]项目1～10之任一项所述的肽，其中1个或2个氨基酸缺失。[12]项目1～11之任一项所述的肽，其中选自下列的1个序列附加到上述肽的C末端：GKRYKQRVKNK(SEQIDNO:37)；GKRYKQRVKN(SEQIDNO:38)；GKRYKQRVK(SEQIDNO:39)；GKRYKQRV(SEQIDNO:40)；GKRYKQR(SEQIDNO:41)；GKRYKQ(SEQIDNO:42)；GKRYK(SEQIDNO:43)；GKRY(SEQIDNO:44)GKR；GRR；GK；及GR；G。[13]神经保护剂，其含项目1～12之任一项所述的肽。[14]泪液分泌促进剂，其含项目1～12之任一项所述的肽。[15]抗炎症剂，其含项目1～12之任一项所述的肽。[16]血管内皮功能改善剂，其含项目1～12之任一项所述的肽。[17]角膜上皮障碍治疗剂或角膜内皮障碍治疗剂，其含项目1～12之任一项所述的肽。[18]干眼治疗剂，其含项目1～12之任一项所述的肽。[19]医药组合物，其含项目1～12之任一项所述的肽。[20]用于神经保护、泪液分泌促进、血管内皮功能改善或炎症抑制的方法，其包括：施用项目1～12之任一项所述的肽。[21]项目1～12之任一项所述的肽，其用于神经障碍、泪液减少疾病、角膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肽，其由在下式所表示的序列中，3位和/或8位的天冬氨酸残基的羧基被四唑取代的序列或其改变序列构成：/nH-X

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171114 JP 2017-2191811.肽，其由在下式所表示的序列中，3位和/或8位的天冬氨酸残基的羧基被四唑取代的序列或其改变序列构成：
H-X1-D-G-I-F-T-D-X2-Y-X3-R-Y-R-X4-X5-X6-A-X7-X8-X9-Y-L-A-A-V-X10(SEQIDNO:3)
在上述式中，
X1是中性氨基酸、
X2是中性氨基酸、
X3是中性氨基酸、
X4是碱性氨基酸、
X5是中性氨基酸或egTz、
X6是非极性氨基酸、
X7是非极性氨基酸、
X8是碱性氨基酸、
X9是碱性氨基酸、
X10是中性氨基酸，
其中
上述肽有与PAC1R、VPAC1R及VPACR2的结合性，
上述改变序列是SEQIDNO:3的序列中缺失或附加1个或多个氨基酸的序列。


2.权利要求1所述的肽，其中X1、X2及X3中的中性氨基酸是丙氨酸或丝氨酸。


3.权利要求1或2所述的肽，其中X4、X8及X9中的碱性氨基酸是赖氨酸或精氨酸。


4.权利要求1～3之任一项所述的肽，其中X5是谷氨酰胺、丙氨酸或egTz。


5.权利要求1～4之任一项所述的肽，其中X6还是甲硫氨酸、正亮氨酸、丙氨酸或亮氨酸。


6.权利要求1～5之任一项所述的肽，其中X7是缬氨酸或丙氨酸。


7.权利要求1～6之任一项所述的肽，其中X10是亮氨酸或丙氨酸。


8.权利要求1～7之任一项所述的肽，其中SEQIDNO:3的3位及8位...

【专利技术属性】
技术研发人员：町田慎之介，中嶋毅，
申请(专利权)人：千寿制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP