作为KRAS制造技术

本发明专利技术公开了一种作为KRAS

【技术实现步骤摘要】
作为KRASG12C/SOS1抑制剂的新型订书肽及其用途
本专利技术涉及一种订书肽，其衍生自SOS1蛋白与KRAS蛋白的α-螺旋结合区。
技术介绍
肺癌是全球癌症死亡的主要原因(ChengandPlanken2018)，严重危害人类生命与健康，在过去的数十年，肺癌的治疗得到了极大的关注(Wang,Huangetal.2019)。非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80％(Jemal,Brayetal.2011)，Ras原癌基因是NSCLC中最常见的突变基因(Prior,Lewisetal.2012,Li,Liuetal.2018)，在所有肿瘤中约25％检测到突变(deCastroCarpenoandBelda-Iniesta2013)，v-Ki-ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因(KRAS)占肺腺癌RAS突变的90％(JohnC.HunterandSudershanGondi2015,Rothschild2015)。大多数致癌形式的RAS损害其固有的GTP酶活性，阻止GTP水解。RAS基因家族成员编码小GTP酶，其激活参与增殖，分化和细胞存活的各种信号传导途径。当RAS基因中的12,13或61位氨基酸发生点突变时，RAS蛋白具有转化细胞的潜力，NSCLC中97％的KRAS突变涉及12和13位氨基酸，其中第12位的突变占约80％。第12位氨基酸处的突变避免了GAP蛋白刺激KRAS。由于GAP作为加速GTP酶活性的催化剂，该位置的突变减缓了GTP向GDP的转变，增加了GTP水平。RAS蛋白作为分子开关起作用，其在GDP结合的无活性状态和GTP结合的活性状态之间循环，并通过GTP酶活化蛋白(GAP)和鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)介导该循环，其中SOS1和SOS2是GEF的成员(BONFINI,KARLOVICHetal.1992,Boriack-Sjodin,Margaritetal.1998,Bos,Rehmannetal.2007)。SOS通过将SOS螺旋发夹直接插入RAS开关或RAS与鸟嘌呤核苷酸之间的水介导相互作用激活RAS(Patgiri,Yadavetal.2011,Leshchiner,Parkhitkoetal.2015)。目前研究抑制KRAS活性的化合物包括破坏效应物例如鸟嘌呤核苷酸交换因子以及针对KRASG12C的化合物等，另外也有将蛋白-蛋白相互作用中以多肽二级结构为支撑骨架的折叠亚结构域中的α-螺旋肽单独提取出来，通过化学合成的方法加以构建将有可能得到选择性作用于KRAS蛋白的活性多肽药物先导物。但是多肽片段在离开蛋白质整体结构后将无法稳定形成结合所需的二级结构,而易于形成无规则卷曲构象从而导致结合活性下降,并且更易受肽酶的降解,无法直接成药。ElizavetaS.Leshchinera等人设计和合成SAH-SOS1A，其序列为Ac-RRFFGIXLTNXLKTEEGN-NH2，X代表(S)-α-甲基-α-戊烯基甘氨酸(S5)(Leshchiner,Parkhitkoetal.2015)，但对于多肽类药物的研发来说，序列过长往往会带来溶解度降低、稳定性变差、生产成本提高等问题，因此已上市的多肽药物长度大多在10个氨基酸左右。尽管随KRAS的机制及其病理突变有深入的了解，但针对KRAS突变的有效稳定靶向药物的研究仍遥遥无期，仍然是一个艰巨的挑战。
技术实现思路
本专利技术的目的是涉及一种订书肽及其制备方法，其源自SOS1蛋白与KRAS蛋白的α-螺旋结合区，其抑制KRAS蛋白的活化；本专利技术还涉及它们的制备方法、含有这些订书肽的药物组合物、以及它们单独使用的或与其它化合物组合而用于预防或治疗癌症(例如非小细胞肺癌)的用途。本专利技术的技术方案：一种订书肽，所述的订书肽包括氨基酸序列A0B0C0D0E0F0G0A1B1C1D1，其中：A0为F或保守取代；B0为G或保守取代；C0为I或保守取代；D0为Y或保守取代；E0为L或保守取代；F0为T或保守取代；G0为N或保守取代；A1为I或保守取代；B1为L或保守取代；C1为K或保守取代；D1为T或保守取代；所述订书肽包含有α-螺旋和两个非天然氨基酸X，所述两个非天然氨基酸X通过形成大环的接头在i和i+3位置、或在i和i+4位置、或在i和i+7位置交联；所述订书肽选自：Ac-FGIXLTNXLKT-NH2(SEQIDNO.1)；Ac-FFGIXLTNXLKTE-NH2(SEQIDNO.2)；其中两个非天然氨基酸X以烯烃封端并通过形成大环的接头交联；其中，SEQIDNO.1的氨基酸序列为苯丙氨酸-甘氨酸-异亮氨酸-非天然氨基酸X-亮氨酸-苏氨酸-天冬酰胺-非天然氨基酸X-亮氨酸-赖氨酸-苏氨酸。SEQIDNO.2的氨基酸序列为苯丙氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-异亮氨酸-非天然氨基酸X-亮氨酸-苏氨酸-天冬酰胺-非天然氨基酸X-亮氨酸-赖氨酸-苏氨酸-谷氨酸。20种常见天然存在的α-氨基酸及其三字符单字符表示如下：丙氨酸(Ala或A)、精氨酸(Arg或R)、天冬酰胺(Asn或N)、天冬氨酸(Asp或D)、半胱氨酸(Cys或C)、谷氨酸(Glu或E)、谷氨酰胺(Glu或Q)、甘氨酸(Gly或G)、组氨酸(His或H)、异亮氨酸(Ile或I)、亮氨酸(Leu或L)、赖氨酸(Lys或K)、甲硫氨酸(Met或M)、苯丙氨酸(Phe或F)、脯氨酸(Pro或P)、丝氨酸(Ser或S)、苏氨酸(Thr或T)、色氨酸(Trp或W)、酪氨酸(Tyr或Y)和缬氨酸(Val或V)。进一步的，所述两个非天然氨基酸X是(S)-α-甲基-α-戊烯基甘氨酸(S5)。进一步的，所述的氨基酸序列是Ac-FGIXLTNXLKT-NH2。进一步的，所述两个非天然氨基酸X通过形成大环的接头在i和i+4位置交联。进一步的，所述氨基酸序列的长度为11个氨基酸；且非天然氨基酸的位置固定。一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含上述所述的一种订书肽。进一步的，所述的一种药物组合物包含用于治疗癌症的药物。一种治疗癌症的方法，所述该方法包括向有需要的患者施用上述所述的一种订书肽。进一步的，所述癌症是KRASG12C相关癌症；例如胰腺癌、肺癌、结直肠癌等；其中，所述癌症是非小细胞肺癌；所述非小细胞肺癌患者带有突变型KRASG12C蛋白。进一步的，所述订书肽对H358细胞具有选择性地抑制作用；所述订书肽具有抗蛋白酶解能力以及血浆稳定性。根据本专利技术的订书肽包括肽中两个氨基酸侧链之间的共价键；多肽的钉合可用于物理地将肽限制为特定的构象(例如，将肽物理限制成其天然α-螺旋状态)；通过帮助保留与靶标分子相互作用所需的天然结构、增加细胞渗透性和/或保护肽免于蛋白水解降解，进而增强肽的药理学性质。根据本专利技术所述的一种订书肽，其设计基于抑制KRAS/SOS1蛋白的相互作用；RAS蛋白作为分子开关起作用，其在GDP结合的无活性状态和GTP结合的活性状态之间循环，并通过GTP酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种订书肽，其特征在于，所述的订书肽包括氨基酸序列A

【技术特征摘要】
1.一种订书肽，其特征在于，所述的订书肽包括氨基酸序列A0B0C0D0E0F0G0A1B1C1D1，其中：A0为F或保守取代；B0为G或保守取代；C0为I或保守取代；D0为Y或保守取代；E0为L或保守取代；F0为T或保守取代；G0为N或保守取代；A1为I或保守取代；B1为L或保守取代；C1为K或保守取代；D1为T或保守取代；
所述订书肽包含有α-螺旋和两个非天然氨基酸X，所述两个非天然氨基酸X通过形成大环的接头在i和i+3位置、或在i和i+4位置、或在i和i+7位置交联；
所述订书肽选自：Ac-FGIXLTNXLKT-NH2、Ac-FFGIXLTNXLKTE-NH2；其中两个非天然氨基酸X以烯烃封端并通过形成大环的接头交联。


2.根据权利要求1所述的一种订书肽，其特征在于，所述的两个非天然氨基酸X是(S)-α-甲基-α-戊烯基甘氨酸。


3.根据权利要求1所述的一种订书肽，其特征在于，所述的氨基酸序列是Ac-FGIXLTNXLKT-NH2。


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【专利技术属性】
技术研发人员：徐莉莉，狄斌，李翠翠，安橹燕，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32