一种肺癌抗原组合及其应用、细胞毒性T淋巴细胞制造技术

本发明专利技术提供了一种肺癌抗原组合及其应用、细胞毒性T淋巴细胞，属于生物医药技术领域，所述肺癌抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.1～4所示。采用本发明专利技术提供的肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞，得到的细胞毒性T淋巴细胞，能够有效杀伤表达肺癌相关抗原的细胞。

A lung cancer antigen combination and its application, cytotoxic T lymphocytes

【技术实现步骤摘要】
一种肺癌抗原组合及其应用、细胞毒性T淋巴细胞
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种肺癌抗原组合及其应用、细胞毒性T淋巴细胞。
技术介绍
我国肺癌发病率最高，且死亡率高，随着精准治疗的推广，常规的化疗、放疗和靶向已无法满足肿瘤的个性化和多变性，因此，寻找个性化的肿瘤新抗原，培养识别个性化肿瘤新抗原的CTL(细胞毒性T淋巴细胞)，将是彻底清除肿瘤的有效方法。靶向肿瘤新抗原的CTL的培养，关键是如何选择肿瘤新抗原，目前常用的手段是，通过生物信息学方法，对肿瘤新抗原与HLA的亲和力进行预测，选取亲和力高的，作为备选的肿瘤新抗原，优点是快速且高通量，缺点是，基于算法脱离实验，结果不准确。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种肺癌抗原组合及其应用、细胞毒性T淋巴细胞，采用本专利技术提供的肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞得到的细胞毒性T淋巴细胞，能够有效杀伤肺癌细胞。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种肺癌抗原组合，所述肺癌抗原的氨基酸序列如SEQIDNo.1～4所示。本专利技术还提供了上述技术方案所述的肺癌抗原组合在制备细胞毒性T淋巴细胞中的应用。优选的，所述应用包括：以每种肺癌抗原的终浓度为10～50μg/ml共培养外周血单个核细胞，得到细胞毒性T淋巴细胞。优选的，所述每种肺癌抗原的终浓度为15～30μg/ml。优选的，所述每种肺癌抗原的终浓度为20μg/ml。本专利技术还提供了上述技术方案所述的肺癌抗原组合在制备治疗肺癌的药物中的应用。本专利技术还提供了一种细胞毒性T淋巴细胞，采用上述技术方案所述的肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞，得到。本专利技术还提供了上述技术方案所述的细胞毒性T淋巴细胞在制备治疗肺癌的药物中的应用。本专利技术提供了一种肺癌抗原组合及其应用、细胞毒性T淋巴细胞，采用本专利技术提供的肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞，得到的细胞毒性T淋巴细胞，能够有效杀伤肺癌细胞。附图说明图1为1-24号肿瘤新抗原筛选；图2为流式分析细胞表型结果；图3为3T3-B1501负载抗原5和9组合；图4为3T3-A0201负载抗原10和11组合。具体实施方式本专利技术提供了一种肺癌抗原组合，所述肺癌抗原的氨基酸序列如SEQIDNo.1～4所示，具体如下所示：SEQIDNo.1：GLGLGPGSI；SEQIDNo.2：ILVASCSEDM；SEQIDNo.3：GIQEERARI；SEQIDNo.4：AQVWVKGPRY。在本专利技术中，所述SEQIDNo.1和2对应的HLA等位基因是HLA-B*15:01；所述SEQIDNo.3对应的HLA等位基因是HLA-A*02:01；所述SEQIDNo.4对应的HLA等位基因是HLA-A*02:01。本专利技术还提供了上述技术方案所述的肺癌抗原组合在制备细胞毒性T淋巴细胞中的应用。在本专利技术中，所述应用优选包括：以每种肺癌抗原的终浓度为10～50μg/ml共培养外周血单个核细胞，得到细胞毒性T淋巴细胞。本专利技术对培养得到细胞毒性T淋巴细胞的方法没有特殊限定，采用常规培养细胞毒性T淋巴细胞的方法即可。在本专利技术中，所述每种肺癌抗原的终浓度更优选为15～30μg/ml，最优选为20μg/ml。本专利技术还提供了上述技术方案所述的肺癌抗原组合在制备治疗肺癌的药物中的应用。在本专利技术中，所述药物优选以肺癌抗原为唯一活性成分，还包括药学上可接受的辅料或辅助性成分，肺癌抗原的质量比优选为0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5，更优选为1：1：1：1：1：1：1：1：1：1。在本专利技术中，所述药物的剂型优选包括片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液或缓释剂。本专利技术对所述肺癌抗原组合在上述剂型中的用量没有特殊限定，采用常规剂型中药物的用量即可。本专利技术对所述上述剂型使用的辅料或者辅助性成分的种类和含量没有特殊限定，采用常规即可。本专利技术还提供了一种细胞毒性T淋巴细胞，采用上述技术方案所述的肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞，得到。在本专利技术中，采用肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞得到细胞毒性T淋巴细胞的方法与上述相同，在此不再赘述。在本专利技术中，采用肺癌抗原组合共培养外周血单个核细胞，得到的细胞毒性T淋巴细胞能够识别肺癌抗原组合，具有特异性杀伤作用并且提高杀伤作用，进而来治疗肺癌。本专利技术还提供了上述技术方案所述的细胞毒性T淋巴细胞在制备治疗肺癌的药物中的应用。在本专利技术中，所述药物优选以细胞毒性T淋巴细胞为唯一活性成分，还包括药学上可接受的辅料或辅助性成分。在本专利技术中，所述药物的剂型优选包括片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液或缓释剂。本专利技术对所述细胞毒性T淋巴细胞在上述剂型中的用量没有特殊限定，采用常规剂型中药物的用量即可。本专利技术对所述上述剂型使用的辅料或者辅助性成分的种类和含量没有特殊限定，采用常规即可。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例11.肺癌相关肿瘤新抗原：患者林某的肿瘤组织的全外显子测序结果，进行肿瘤新抗原分析(鼎成肽源生物信息技术有限公司)，对24条抗原进行合成(南京金斯瑞多肽合成部)；表1多肽序列及对应编号2、共培养制备APC：1)复苏冻存PBMC(2.5×107cells)，以1640+10％FBS稀释冻存液，1500rpm5min，以10mL1640+10％FBS重悬，1×106cells/mL，37℃、5％CO2复苏培养24h；2)配制多肽，1640+10％FBS+200U/mLIL-2+1600U/mLGM-CSF，多肽终浓度为50ng/mL，混匀后备用；3)1500rpm5min，离心收集细胞，以多肽溶液重悬细胞，密度调整至1×106cells/mL；4)37℃、5％CO2培养24h后，细胞为APC，轻轻吹打细胞混匀备用；3、共培养1)离心收集PBMC，1640+10％FBS重悬，计数调整至1×106cells/mL；2)按照100：1的比例加入APC，混匀，记为Day0；3)37℃、5％CO2培养48h后，每天按照总体家补加IL-2，终浓度为200U/mL；4)培养至Day21时，收集细胞即为CTL；4、肿瘤新抗原的筛选：1)收集CTL细胞，以1640+10％FBS重悬，计数调整至2×106cells/mL；2)10mLcells+10mL1640+10％FBS将细胞调整至1×106cells/mL，再加入8μL500U/μLIL-2，IL-2终浓度为200U/mL，再分至96孔板中(平底)，200μL/孔；3)每孔加入对应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肺癌抗原组合，其特征在于，所述肺癌抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.1～4所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种肺癌抗原组合，其特征在于，所述肺癌抗原的氨基酸序列如SEQIDNo.1～4所示。


2.权利要求1所述的肺癌抗原组合在制备细胞毒性T淋巴细胞中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括：以每种肺癌抗原的终浓度为10～50μg/ml共培养外周血单个核细胞，得到细胞毒性T淋巴细胞。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述每种肺癌抗原的终浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，王海燕，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11