C20orf24蛋白缺失突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种C20orf24蛋白缺失突变体及其应用。一种C20orf24蛋白缺失突变体，为缺失了Rab5ip结构域的C20orf24蛋白；其氨基酸序列为MSGGRRKEEPPQPQLANGALKVSVWSKVLRSDAA WEDKDEFLDGVLYLYFSNYLQIDEEEYGGTWELTKEGFMTSFALFMVIWIIFYTAIHYD。C20orf24蛋白缺失突变体具有抑制癌细胞增殖生长的作用，同时将其应用于制备治疗癌症药物中，显示其广阔的使用价值。

C20orf24 protein deletion mutant and its application

【技术实现步骤摘要】
C20orf24蛋白缺失突变体及其应用
本专利技术属于医药
，尤其涉及一种C20orf24蛋白缺失突变体及其应用。
技术介绍
结直肠癌是世界上最难治疗的疾病之一，有发病率高，致死率高和存活预后差等特点。现在主流的治疗方法是手术加放化疗结合的方法，在靶向治疗领域，应用比较多的有血管生成因子(VEGF)抑制剂贝伐单抗和表皮生长因子受体阻滞剂帕尼单抗、西妥昔单抗和艾洛替尼。尽管如此，临床疗效仍不理想，化疗耐药和毒副作用的发生影响了癌症病人的预后，进一步开发针对致癌基因靶向药物势在必行。在结直肠癌中，Ras/MAPK信号通路在目前研究最为活跃的致癌通路之一，该通路的相关突变，如Ras和Raf蛋白的突变都在大多患者癌组织中都可以观察到。Ras/MAPK信号通路在胚胎的发育,细胞的分化、增殖、死亡等生物学过程中具有重要的调节作用，MAPK(mitogen-activatedproteinkinase，丝裂原活化蛋白激酶)家族是这一信号通路的主要成员。它包括了一系列蛋白激酶的级联反应:Ras与GTP结合后被激活,使Raf募集到细胞膜并与之结合,随后MEK、MAPK依次被磷酸化激活,MAPK活化一些转录因子、蛋白激酶等,引发多种生物学效应。该通路在肿瘤的分裂、存活、迁移以及侵袭能力等方面有重要的调节作用,主要参与各种生长因子、细胞因子、丝裂原以及激素受体活化后的信号转导。其异常激活常见于人类肿瘤中。目前，靶向该Ras的相关药物目前仍非常有限。位于EGFR与Ras之间，存在着另一重要的小GTP酶——RAB5A蛋白，与其他GTP酶一样，在发挥功能时不断进行GTP/GDP循环。RAB5A蛋白作为囊泡运输的分子开关，当与GTP结合时处于活性状态称之为“开”，当与GDP结合时处于失活状态称之为“关”。近几年，人们发现很多参与调控RAB5蛋白GTP/GDP循环的因子。调控该蛋白的活性，能够直接影响下游的Ras-MAPK通路，因此针对药物开发难度较大的Ras-MAPK通路，靶向RAB5蛋白能够为肿瘤治疗提供一个新的契机。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供C20orf24蛋白缺失突变体，C20orf24(Chromosome20OpenReadingFrame24)定位于人类20号染色体的一个基因，该基因的蛋白证据在2012年被证实。本专利技术的另一目的在于提供上述C20orf24蛋白缺失突变体的应用。为实现上述目的，本专利技术通过下述技术方案实现：一种C20orf24蛋白缺失突变体，优选为缺失了Rab5ip结构域的C20orf24蛋白；更优选为缺失了第44-79位氨基酸序列的C20orf24蛋白，其氨基酸序列为MSGGRRKEEPPQPQLANGALKVSVWSKVLRSDAAWEDKDEFLDGVLYLYFSNYLQIDEEEYGGTWELTKEGFMTSFALFMVIWIIFYTAIHYD。一种多核苷酸，优选为以下多核苷酸中的至少一种：(1)编码所述的C20orf24蛋白缺失突变体的多核苷酸；(2)与多核苷酸(1)互补的多核苷酸。一种载体，优选包含所述的多核苷酸。一种遗传工程化的宿主细胞，优选包含上述的载体。所述的C20orf24蛋白缺失突变体在制备治疗癌症药物中的应用，这是基于本专利技术人研究发现，C20orf24蛋白缺失突变体(C20orf24-DD)通过N和C端结构域与Rab5竞争性相互作用，从而抑制癌细胞增殖生长。所述的癌症包括但不限于结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、视网膜母细胞瘤、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、脑瘤、子宫颈癌、肉瘤、前列腺瘤、膀胱瘤、网状内皮组织瘤、Wilm氏瘤、星细胞瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、骨肉瘤、肾癌和头颈癌。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：本专利技术首次发现了C20orf24蛋白缺失突变体，并发现其具有抑制癌细胞增殖生长的作用，同时将其应用于制备治疗癌症药物中，显示其广阔的使用价值。附图说明图1为C20orf24对结直肠癌细胞HCT116和HT29增殖的影响图：其中，A为C20orf24在HCT116和HT29细胞中过表达成功图；B为C20orf24促进HCT116和HT29细胞克隆增殖图；C为C20orf24促进HCT116和HT29细胞克隆增殖的数目统计图。图2为干扰C20orf24对结直肠癌细胞HCT116和HT29增殖的影响图：其中，A为HCT116和HT29细胞中干扰C20orf24后的效果图；B为HCT116和HT29细胞中干扰C20orf24后对肿瘤生长抑制的效果图；sh-Ctrl表示对照组(包含质粒pLKO.1-Control)；sh-#1表示包含质粒pLKO.1-shC20orf24-#1的实验组；sh-#2表示包含质粒pLKO.1-shC20orf24-#2的实验组。图3为C20orf24与Rab5相互作用的效果图。图4为C20orf24及其突变体C20orf24-DD对Rab5活性的影响图；C20orf24-HA表示包含pLVX-Puro-mCherry-HA-C20orf24重组质粒的实验组；C20orf24-DD-HA表示包含C20orf24缺失突变体(C20orf24-DD)重组质粒的实验组。图5为C20orf24及其突变体C20orf24-DD对MEK-ERK通路及EGFR内吞的影响图。C20orf24-HA表示包含pLVX-Puro-mCherry-HA-C20orf24重组质粒的实验组；C20orf24-DD-HA表示包含C20orf24缺失突变体(C20orf24-DD)重组质粒的实验组。图6为C20orf24、C20orf24-DD、Rab5(S34N)对肿瘤生长的影响图：其中，A为C20orf24、C20orf24-DD、Rab5(S34N)对肿瘤生长的影响的效果图；B为C20orf24、C20orf24-DD、Rab5(S34N)对肿瘤体积的影响图；Control表示对照；C20orf24表示包含pLVX-Puro-mCherry-HA-C20orf24重组质粒的实验组；C20orf24-DD表示包含C20orf24缺失突变体(C20orf24-DD)重组质粒的实验组；C20orf24/Rab5(S34N)表示包含C20orf24缺失突变体(C20orf24-DD)重组质粒的实验组。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例11、pLVX-Puro-mCherry-HA-C20orf24重组质粒的构建：在pLVX-IRES-ZsGreen1载体(Clontech,Cat#632187)的骨架上构建pLVX-Puro-mCherry-HA-C20orf24的重组质粒，利用同源重组方法，采用C112-ClonExpressIIOneStepCloningKit试剂盒(诺唯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种C20orf24蛋白缺失突变体，其特征在于：为缺失了Rab5ip结构域的C20orf24蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种C20orf24蛋白缺失突变体，其特征在于：为缺失了Rab5ip结构域的C20orf24蛋白。


2.根据权利要求1所述的C20orf24蛋白缺失突变体，其特征在于：为缺失了C20orf24蛋白中第44-79位氨基酸序列的C20orf24蛋白缺失突变体，其氨基酸序列为MSGGRRKEEPPQPQLANGALKVSVWSKVLRSDAAWEDKDEFLDGVLYLYFSNYLQIDEEEYGGTWELTKEGFMTSFALFMVIWIIFYTAIHYD。


3.一种多核苷酸，其特征在于：为以下多核苷酸中的至少一种：
(1)编码权利要求1或2所述的C20orf24蛋白缺失突变体的多核苷酸；
(2)与...

【专利技术属性】
技术研发人员：何庆瑜，汪洋，张静，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44