子宫肌瘤新抗原、其应用和子宫肌瘤疫苗制造技术

本发明专利技术公开一种子宫肌瘤新抗原，其选自氨基酸序列如SEQ ID NO：1至9中任一项所示的多肽中的至少一种。本发明专利技术提供的子宫肌瘤新抗原可用于制备预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的药物。本发明专利技术还提供了一种子宫肌瘤疫苗，其包括本发明专利技术的子宫肌瘤新抗原以及一种或多种医药上可接受的载体。本发明专利技术提供的子宫肌瘤疫苗的靶向性好、效果显著、副作用小。

New antigens of uterine leiomyoma, their application and vaccine of uterine leiomyoma

【技术实现步骤摘要】
子宫肌瘤新抗原、其应用和子宫肌瘤疫苗
本专利技术属于生物医药
，涉及子宫肌瘤新抗原、子宫肌瘤新抗原在制备预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的药物中的应用和一种子宫肌瘤疫苗。
技术介绍
子宫肌瘤，又称子宫平滑肌瘤，是妇科常见的一种良性肿瘤，多发于30岁-50岁之间的女性，发病率高达20％-40％，其临床主要症状为：腹胀、腹痛、尿频、尿急，不规则性阴道出血导致月经出血过多，时间过长。经期腹胀腹痛最为严重，性交时伴有出血、性欲减退等症状。症状的轻重与肌瘤的大小和生长的部位都有一定的关系。患者一旦被查出患有子宫肌瘤，一般还会出现情绪紧张、睡眠质量下降等症状，工作、生活学习、夫妻生活都会受到一定影响，必需采取积极有效的治疗方案。目前，子宫肌瘤临床上多以手术治疗为主，而子宫肌瘤容易复发，75-95％会在手术后2-3年复发，为了防止复发，常采取将整个子宫全部切除的治疗方案。然后，子宫切除后，人体的整个血液循环以及女性特有功能都会有所改变，并伴随有精神上的打击，最终可能会导致人体提前衰老，且严重影响夫妻生活，甚至可能导至婚姻破裂。切除子宫是子宫肌瘤患者万不得已的选择。因此，需要找到更好地治疗子宫肌瘤、预防子宫肌瘤复发的新方法。免疫治疗通过调动机体的免疫系统，调动T细胞和免疫记忆来杀伤肿瘤细胞，具有靶向性好、副反应低、无损伤等优势。肿瘤新抗原疫苗是免疫治疗的一种，是一种精准的医疗策略，通过找出患者肿瘤组织特有的体细胞突变，分析出这些突变产生的新抗原，制备能够被患者组织相容性复合体(MHC)特异识别的新抗原疫苗，注入患者体内，激活特异性T细胞应答和免疫风暴，可以特异性靶向癌细胞，理论上可以做到消除所有肿瘤及其转移灶，防止肿瘤复发。新抗原(neoantigens)，是指在正常组织中不表达，而仅在肿瘤组织表达的抗原，包括致瘤病毒整合进基因组产生的抗原和突变蛋白产生的抗原。新抗原不仅具有高特异性，而且因其未经胸腺阴性筛选还具有强免疫原性。目前肿瘤新抗原研究，都是集中在恶性肿瘤，良性肿瘤或癌前病变中肿瘤新抗原的表达鲜少涉及。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能有效应用于预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的新抗原以及疫苗。根据本专利技术的一个方面，提供了一种子宫肌瘤新抗原，其选自氨基酸序列如SEQIDNO：1至9中任一项所示的多肽中的至少一种。本专利技术提供的子宫肌瘤新抗原针对的是存在于MED12基因或NT5DC1基因的特异性突变，主要针对MED12-G44V突变和NT5DC1-C399Y突变，但不仅局限于这两种突变。本专利技术提供的子宫肌瘤新抗原可用于制备预防和/或治疗人类或其他哺乳动物的子宫肌瘤、或者预防人类或其他哺乳动物的子宫肌瘤复发的药物。在一些实施方式中，可应用于制备预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的疫苗。根据本专利技术的另一个方面，提供了一种子宫肌瘤疫苗，包括上述的子宫肌瘤新抗原以及一种或多种医药上可接受的载体。本专利技术提供的子宫肌瘤疫苗，不仅可以用于治疗子宫肌瘤，而且还可以用于预防子宫肌瘤的发生和复发。当未患子宫肌瘤的健康人或手术后的子宫肌瘤患者注射本专利技术的疫苗后，体内会产生靶向本专利技术中子宫肌瘤新抗原对应的突变位点的特异性杀伤性T细胞和记忆T细胞，在正常细胞基因突变的过程中，若产生相关的突变，体内已存在的T细胞能够迅速识别并清除携带突变的细胞，从而有效的预防子宫肌瘤的发生。在一些实施方式中，载体可以为抗原提呈细胞(antigenpresentingcell，APC)。在一些实施方式中，抗原提呈细胞可以选自树突状细胞(dendriticcells，DC)、B淋巴细胞、单核-巨噬细胞等APC中的一种或多种。在一些实施方式中，APC可以来自患者本身，也可以来源于异体供者。在一些实施方式中，可以通过将子宫肌瘤新抗原与抗原提呈细胞共培养，以将子宫肌瘤新抗原负载在抗原提呈细胞上，从而获得预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的疫苗。在一些实施方式中，子宫肌瘤疫苗的组成还可以包括免疫佐剂。在一些实施方式中，免疫佐剂可以选自TLR9的激动剂、poly-ICLC(CAS：59789-29-6)、γ-干扰素中的一种或多种。在一些实施方式中，TLR9的激动剂可以为全硫代修饰的富CpG序列的非甲基化寡聚脱氧核苷酸，其中，富CpG序列的非甲基化寡聚脱氧核苷酸的核苷酸序列如SEQIDNO：10所示。在一些实施方式中，每1×104个抗原提呈细胞，子宫肌瘤疫苗中子宫肌瘤新抗原的添加量可以为50-500μg，TLR9的激动剂的添加量可以为20-150μg，γ-干扰素的添加量可以为0-1800单位。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术对良性肿瘤子宫肌瘤的肿瘤新抗原进行了研究，发现了子宫肌瘤的新抗原，并应用其预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发，提供了一种新的预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的方法。肿瘤新抗原是区分肿瘤细胞和正常细胞的特异性靶点，是肿瘤免疫细胞治疗的最佳靶点，与其它治疗方法相比，运用新抗原疫苗对子宫肌瘤进行预防或治疗，靶向性更好、副作用更小。(2)本专利技术提供的子宫肌瘤新抗原针对的是存在于MED12基因或NT5DC1基因的特异性突变，主要针对MED12-G44V突变和NT5DC1-C399Y突变，但不仅局限于这两种突变。MED12基因突变发生在70％的子宫肌瘤，因此，利用本专利技术提供的子宫肌瘤新抗原制备的子宫肌瘤疫苗与其他肿瘤疫苗相比，更具有普适性和通用性。(3)本专利技术提供的9条子宫肌瘤新抗原，两条或以上新抗原组合运用制备得到的子宫肌瘤疫苗的免疫效果强于利用单条新抗原制备得到的子宫肌瘤疫苗。利用多条新抗原制备得到的子宫肌瘤疫苗，多条疫苗肽在体内被酶切成的短多肽，这些短多肽，有些可以被I型HLA递呈刺激CD8+细胞的产生，有些可以被II型HLA递呈刺激CD4+细胞的产生。CD4+细胞分泌的细胞因子会刺激更多的CD8+细胞产生并聚集，从而更有效的杀伤肿瘤细胞。CD4+细胞和CD8+细胞与HLA之间的协同增效作用，能够产生更强的免疫反应。(4)目前针对肿瘤治疗的靶向药大多数是靶向单个靶点，长时间的用药容易产生耐药性。本专利技术提供的子宫肌瘤疫苗可以通过不同靶点的新抗原的组合使用，使制得的子宫肌瘤疫苗可以同时靶向2个靶点，双靶点的治疗方案可以有效降低肿瘤的耐药发生概率，使得治疗效果更佳更持久。(5)本专利技术提供的子宫肌瘤疫苗，运用时，不需要经过基因组测序、数据分析及疫苗定制等步骤，只需要简单的个别突变位点检测，就能够直接用于携带有突变的患者，将患者等待治疗的时间从70-90天缩短到1-2天，能够避免患者错过最佳治疗的时间，也可以大幅度降低医疗成本。附图说明图1表示利用ELISPOT法检测的子宫肌瘤新抗原激活的CTL的活性；图2表示子宫肌瘤疫苗对子宫肌瘤细胞的杀伤活性。...

【技术保护点】
1.子宫肌瘤新抗原，选自氨基酸序列如SEQ ID NO：1至9中任一项所示的多肽中的至少一种。/n

【技术特征摘要】
1.子宫肌瘤新抗原，选自氨基酸序列如SEQIDNO：1至9中任一项所示的多肽中的至少一种。


2.根据权利要求1所述的子宫肌瘤新抗原在制备预防子宫肌瘤和/或治疗子宫肌瘤和/或预防子宫肌瘤复发的药物中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物为疫苗。


4.子宫肌瘤疫苗，包括权利要求1所述的子宫肌瘤新抗原以及一种或多种医药上可接受的载体。


5.根据权利要求4所述的子宫肌瘤疫苗，其特征在于，所述载体为抗原提呈细胞。


6.根据权利要求5所述的子宫肌瘤疫苗，其特征在于，所述载体选自树突状细胞、B淋巴细胞、单核-巨噬细胞中的一种或多种。


7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶英亮，毛力真，
申请(专利权)人：江苏兰恩生物治疗技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32