用于NK细胞高效激活和扩增的培养体系、培养试剂盒及培养方法技术

本发明专利技术涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种NK细胞培养体系、NK细胞培养试剂盒及NK细胞培养方法。本发明专利技术提供的NK细胞培养体系和培养方法无需滋养细胞，只使用细胞因子和化合物，能够高效激活扩增NK细胞，能够显著提高NK细胞的扩增倍数，提高NK细胞的比例和数量，还能够提高NK细胞对肿瘤靶细胞的杀伤能力。并且，由于本发明专利技术的NK细胞培养体系和培养方法不依赖于滋养细胞，因此提高了临床使用的安全性，避免了回输后由于体内和体外环境的差异对NK细胞在体内的扩增和杀伤活性的影响，在临床应用方面前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养和细胞分化领域，具体涉及用于nk细胞高效激活和扩增的培养体系、培养试剂盒及培养方法，特别涉及一种高效提升人nk细胞体外扩增和分化效率的方法。

技术介绍

1、自然杀伤(natural killer，nk)细胞是人体天然免疫细胞中的重要组分，由造血干细胞分化而来，作为机体的第一道防线识别并攻击外来病原体和体内肿瘤细胞，是固有免疫系统的重要组成部分。同时，nk细胞与获得性免疫系统的b细胞和t细胞均为淋巴细胞家族成员，其被激活后所释放出的ifnγ能够诱导细胞表面mhc类分子的表达，放大抗原提呈作用，因此nk细胞能作为桥梁连接起固有免疫与获得性免疫两大系统。

2、nk细胞表面不表达特异性抗原识别受体，不受mhc分子的限制，无需预先致敏就能通过多种方式直接杀伤肿瘤细胞，这些方式包括：1.释放穿孔蛋白和颗粒酶素致使肿瘤细胞溶解；2.释放tnf作用于肿瘤细胞表面的tnf受体，致使细胞凋亡；3.nk细胞表面配体(fasl或trail)能与肿瘤细胞表面受体(fas或trailr)结合并诱导其凋亡；4.nk细胞表面的fc受体(cd16，fcri本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种自然杀伤细胞培养体系，包括至少一种包被刺激物、至少一种诱导培养基和至少一种扩增培养基。

2.根据权利要求1所述的自然杀伤细胞培养体系，其特征在于：所述诱导培养基以RPMI1640为基础培养基，包含以下浓度的组分：体积浓度为10％的FBS、100×GlutaMAXTM添加剂、50IU/mL～300IU/mL的IL-2、5ng/mL～30ng/mL的IL-15和0.5μg/mL～5μg/mL的OK432、5ng/mL～20ng/mL的IL-12和10ng/mL～100ng/mL的IL-18；

3.根据权利要求2所述的自然杀伤细胞培养体系，其特征在于：所述诱导培...

【技术特征摘要】

1.一种自然杀伤细胞培养体系，包括至少一种包被刺激物、至少一种诱导培养基和至少一种扩增培养基。

2.根据权利要求1所述的自然杀伤细胞培养体系，其特征在于：所述诱导培养基以rpmi1640为基础培养基，包含以下浓度的组分：体积浓度为10％的fbs、100×glutamaxtm添加剂、50iu/ml～300iu/ml的il-2、5ng/ml～30ng/ml的il-15和0.5μg/ml～5μg/ml的ok432、5ng/ml～20ng/ml的il-12和10ng/ml～100ng/ml的il-18；

3.根据权利要求2所述的自然杀伤细胞培养体系，其特征在于：所述诱导培养基中il-2的浓度为80iu/ml～150iu/ml，il-15的浓度为8ng/ml～15ng/ml，ok432的浓度为0.8μg/ml～2.0μg/ml，il-12的浓度为8ng/ml-15ng/ml，il-18的浓度为40ng/ml～70ng/ml；

4.根据权利要求1所述的自然杀伤细胞培养体系，其特征在于：所述包被刺激物包含mica、anti-cd16抗体和anti-cd137抗体；其中：所述mica的浓度为1μg/ml～5μg/ml，anti-cd16抗体的浓度为1μg/ml～15μg/ml，anti-cd137抗体的浓度范围为1μg/ml～20μg/ml。

5.一种自然杀伤细胞培养试剂盒，其特征在于：包括至少一种包被刺激物、至少一种诱导培养基和至少一种扩增培养基。

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【专利技术属性】
技术研发人员：卢社莲，李燕荣，李营营，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：