一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分泌抗Aβ1‑42单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株包括杂交瘤细胞株2A8和杂交瘤细胞株3F6，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:C202060和CCTCC NO:C202061。本发明专利技术还公开了一种由分泌抗Aβ1‑42单克隆抗体的杂交瘤细胞株所分泌的特异性识别脑脊液或血液中Aβ1‑42多肽的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术通过获得针对Aβ1‑42多肽不同抗原表位的单克隆抗体2种，特异性强且灵敏度高，可通过配对检测脑脊液或血液中的Aβ1‑42多肽的含量，应用于检测Aβ1‑42多肽含量变化或诊断以Aβ1‑42多肽异常表达为表征的疾病的产品的应用。

A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against a \u03b2 1-42 and its application

【技术实现步骤摘要】
一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
技术介绍
阿尔兹海默症（Alzheimer'sdisease，AD）是神经系统退行性疾病，伴有特殊病理和生化变化，是一种获得性、持续性及全面性的认知功能障碍的临床综合症。目前AD的诊断仍依赖于检测量表、MCI、CT等传统手段，这就会出现诊断不及时等情况。研究表明，β-淀粉样蛋白（Aβ）是淀粉样蛋白前体（APP）经蛋白水解酶作用后的底物，由第21号染色体编码，是阿尔兹海默症的主要病理蛋白之一。APP被至少3种酶加工，其切割途径包括分泌酶途径I和分泌酶途径II。在分泌酶途径中，APP首先被β-分泌酶裂解，随后在γ-分泌酶作用下，被切割形成含有39-43个氨基酸的多肽。其中，Aβ1-42是最常见的亚型之一，由42-43个氨基酸组成的蛋白质片段，主要位于阿尔兹海默症患者的脑内。阿尔茨海默症患者的脑脊液和血液中，Aβ1-42的含量会出现明显的降低，这是由于Aβ1-42易聚集导致的。因此，亟需一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
技术实现思路
为解决现有技术存在的缺陷，本专利技术提供一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：本专利技术的第一目的是提供一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株2A8和杂交瘤细胞株3F6，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述杂交瘤细胞株2A8的保藏号为CCTCCNO:C202060，所述杂交瘤细胞株3F6的保藏号为CCTCCNO:C202061。本专利技术的第二目的是提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由上述的杂交瘤细胞株所分泌，所述单克隆抗体能够特异性识别脑脊液或血液中的Aβ1-42多肽。本专利技术的第三目的是提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株2A8所分泌，所述单克隆抗体能够特异性识别脑脊液或血液中的Aβ1-16多肽。本专利技术的第四目的是提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株3F6所分泌，所述单克隆抗体能够特异性识别脑脊液或血液中的Aβ28-42多肽。本专利技术的第五目的是提供一种含有上述单克隆抗体的试剂盒。作为优选，所述试剂盒中包含有所述单克隆抗体的固相载体、校准品Aβ1-42蛋白、碱性磷酸酶标记的检测抗体、发光底物。其中，固相载体选用磁微粒。本专利技术的第六目的是提供一种上述单克隆抗体在制备用于检测Aβ1-42多肽的试剂中的应用。作为优选，所述检测Aβ1-42多肽的试剂为检测Aβ1-42多肽含量减少或诊断以Aβ1-42多肽异常表达为表征的试剂。作为优选，所述检测Aβ1-42多肽的试剂的捕获抗体为杂交瘤细胞株2A8分泌的单克隆抗体，检测抗体为杂交瘤细胞株3F6分泌的单克隆抗体。本专利技术的有益效果是：第一，本专利技术通过获得分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株，获得针对Aβ1-42多肽不同抗原表位的单克隆抗体2种，特异性强且灵敏度高，可通过配对检测脑脊液或血液中的Aβ1-42多肽的含量，应用于检测Aβ1-42多肽含量变化或诊断以Aβ1-42多肽异常表达为表征的疾病的产品的应用。本专利技术作为新的阿尔兹海默症诊断标志物对于阿尔兹海默症的诊断和预示，具有关键意义。第二，采用磁微粒化学发光法进行试剂盒开发，相较于酶联免疫技术，有助于提高检测灵敏度和操作便捷性，同时，也有助于后期配套自动化检测仪器的检测产品的开发。细胞保藏：本专利技术提供的一种分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株2A8和杂交瘤细胞株3F6，所述杂交瘤细胞株2A8和杂交瘤细胞株3F6是本专利技术的专利技术人自行筛选得到的，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述杂交瘤细胞株2A8的保藏号为CCTCCNO:C202060，所述杂交瘤细胞株3F6的保藏号为CCTCCNO:C202061，保藏日期为2020年4月3日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。附图说明图1是本专利技术实施例2中2A8、3F6、4E7和4F7抗体SDS-PAGE分析示意图。图2是本专利技术实施例3中2A8、3F6、4E7和4F7抗体的抗体特异性识别分析示意图。图3是本专利技术中Aβ1-42检测试剂盒校准曲线图。图4是本专利技术中ROC曲线统计结果。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备。小鼠免疫：用Aβ1-42多肽偶联蛋白免疫BALB/c小鼠，每只小鼠每次免疫50ug抗原。首次免疫Aβ1-42多肽抗原与弗氏完全佐剂1：1混合，随后Aβ1-42多肽与弗式不完全佐剂1：1混合，每个两周免疫一次，共免疫3次，第三次免疫十天后断尾采血，检测血清效价。杂交瘤细胞融合：检测小鼠血清效价达到1:10000后用Aβ1-42多肽偶联蛋白(不含佐剂)腹腔加强免疫(30μg)，3天后无菌取免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞混合在50mL离心管，然后加入1mL预热PEG作用45s后，立即缓慢滴加37℃预热的无血清DMEM培养基至35mL，42℃水浴15min，1000rpm/mim离心10min弃上清，加50mL预热HAT培养基，轻吹打混匀，转移至已铺饲养细胞的96孔培养板中，每孔100μL，置培养箱中培养。采用Aβ1-42多肽鉴定细胞上清，对阳性杂交瘤进行3次克隆筛选，得到分泌特异单克隆抗体的杂交瘤细胞4株，分别为2A8、3F6、4E7和4F7，并鉴定抗体亚型，结果显示2A8和4E7为IgG2a，3F6和4F7为IgG2b。实施例2：Aβ1-42单克隆抗体的制备、纯化、效价检测及特异性分析。单抗腹水制备：10-12周龄BALB/c小鼠腹腔注射液体石蜡，0.5mL/只，7d后腹腔接种上述杂交瘤细胞株，1x106/只，7-10d后，待小鼠腹部膨胀，收集腹水上清备用。抗体纯化：将收集的腹水用0.45μm的滤器过滤溶液，加入终浓度为50％的硫酸铵固体，4℃搅拌均匀后，静置1h，12000rpm收集沉淀，并用50mMPBS溶液重溶沉淀。将得到的粗纯抗体以1mL/min流速上样到ProteinA-Sepharose亲和层析柱中，用5个柱体积的结合缓冲液(50mMPBS，pH7.0)清洗，然后用0.1M甘氨酸-盐酸溶液pH2.7洗脱抗体(每个收集管预先加入1MpH9.0Tris缓冲液中和)，得到目的抗体，并用50mMPBS溶液透析3次。将透析后的抗体进行10％SDS-PAGE电泳，结果显示，4种抗体在50kD与25kD处有条带，灰度分析纯度均大于90％，2A8、3F6、4E7和4F7抗体SDS-PAG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，包括杂交瘤细胞株2A8和杂交瘤细胞株3F6，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述杂交瘤细胞株2A8的保藏号为CCTCCNO:C202060，所述杂交瘤细胞株3F6的保藏号为CCTCC NO:C202061。/n

【技术特征摘要】
1.分泌抗Aβ1-42单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，包括杂交瘤细胞株2A8和杂交瘤细胞株3F6，保藏于中国典型培养物保藏中心，所述杂交瘤细胞株2A8的保藏号为CCTCCNO:C202060，所述杂交瘤细胞株3F6的保藏号为CCTCCNO:C202061。


2.单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株2A8和3F6所分泌，所述单克隆抗体能够特异性识别脑脊液或血液中的Aβ1-42多肽。


3.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株2A8所分泌，所述单克隆抗体能够特异性识别脑脊液或血液中的Aβ1-16多肽。


4.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株3F6所分泌，所述单克隆抗体能够特异性识...

【专利技术属性】
技术研发人员：周小进，缪志刚，陈卓友，孙欢欢，
申请(专利权)人：苏州仁端生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32