抗TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用制造技术

本发明专利技术公开了抗TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用。本发明专利技术提供了保藏号为CGMCC No.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52‑2C4‑2E12‑2D3‑4C5，或提供了由保藏号为CGMCC No.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52‑2C4‑2E12‑2D3‑4C5产生的单克隆抗体。本发明专利技术提供的抗鼠TPD52单克隆抗体，其能识别重组和天然的TPD52，可用于检测癌细胞的试剂盒的开发，检测的癌细胞可以为乳腺癌、肺癌、前列腺癌、脂肪肉瘤、肾细胞癌、卵巢癌、肝癌、子宫内膜癌。

Hybridoma cell line with monoclonal antibody against tpd52 and its monoclonal antibody and Application

【技术实现步骤摘要】
抗TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用
本专利技术属于细胞工程领域，尤其涉及抗TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体与应用。
技术介绍
肿瘤蛋白D52(TumorproteinD52,TPD52)起初是在乳腺癌的cDNA文库中克隆得到，含有TPD52扩增的乳腺癌作为临床上一种分子亚型，对乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。TPD52结构较为保守，有1个卷曲螺旋结构域及2个PEST结构域，其多个转录本来自于不同的剪接体，并表达于不同的组织。过去的研究认为，TPD52对于肿瘤的发生发展发挥着重要作用，但在不同肿瘤中，其发挥的作用是不同的。多项研究发现，TPD52高表达于包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、肝癌、子宫内膜癌在内的多种癌组织中，促进细胞增殖及癌症进程。也有研究表明，TPD52在脂肪肉瘤、透明细胞肾细胞癌以及肺癌中都是低表达的。在肾细胞癌中，TPD52可以通过PI3K/Akt信号通路抑制癌细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT(epithelial–mesenchymaltransition，EMT)转换。除了在各种癌症中发挥不同作用，还有证据表明TPD52在DNA损伤修复过程中扮演着双重角色。有证据显示，抑制TPD52的表达可以弱化前列腺癌细胞的DNA损伤修复能力并诱导细胞自噬的产生，从而增强前列腺癌细胞对电离辐射的敏感性，而在此过程中，抑制TPD52的表达会增强ATM的磷酸化，但不会影响ATM的蛋白水平。另一项研究却发现，在乳腺癌细胞及BALB/c3T3细胞中，TPD52与ATM具有相互作用，TPD52的过表达会降低ATM的蛋白稳定性及磷酸化水平。Mayer等人在人结直肠癌和恶性胶质瘤标本，发现了包含TPD52蛋白在内的抗原肽谱，预示TPD52蛋白可能成为肿瘤分子伴侣多肽疫苗疗法的攻击靶标。TPD52与肿瘤生物学行为密切相关，可能参与肿瘤形成、增殖、侵袭和转移。TPD52单克隆抗体具有广泛的应用前景，可以用于多种类型肿瘤的检测。TPD52已被多种肿瘤纳入肿瘤蛋白标志物候选名单，并作为一个独立有效的预后因子。此外，TPD52诱导机体产生对肿瘤的保护性免疫，可能成为一个潜在的肿瘤免疫治疗靶标。目前，商品化的TPD52抗体亲和力低(或者说抗体特异性差)，几乎不能检测到内源的人或小鼠来源的TPD52蛋白。因此，制备出TPD52的单克隆抗体，并将之用于相关样本的检测，对于TPD52功能的研究及生物学认识具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术一个目的是提供一株杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5。本专利技术提供了保藏号为CGMCCNo.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5。本专利技术另一个目的是提供一种单克隆抗体。本专利技术提供的由第一个目的的保藏号为CGMCCNo.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5产生的单克隆抗体。本专利技术还有一个目的是提供单克隆抗体的应用。本专利技术提供的另一个目的是单克隆抗体在如下1)-8)中至少一种中的应用：1)检测TPD52蛋白；2)检测细胞中TPD52蛋白；3)检测待测样本中TPD52蛋白；4)特异结合TPD52蛋白；5)制备检测TPD52蛋白的产品；6)制备检测细胞中TPD52蛋白(是否表达或是否含有)的产品；7)制备检测待测样本中TPD52蛋白(是否表达或是否含有)的产品；8)制备特异结合TPD52蛋白(细胞中的TPD52蛋白或待测样本中的TPD52蛋白)的产品。上述应用中，所述产品可以为试剂盒或胶体金快速检测试纸条，但不限于此，也可以为蛋白质印迹检测产品或酶联免疫吸附检测产品。上述检测可以采用蛋白质印迹检测或酶联免疫吸附检测，也可以按照试剂盒或胶体金快速检测试纸条的说明书记载的方法检测。上述TPD52蛋白为内源TPD52蛋白或天然TPD52蛋白或重组TPD52蛋白。上述TPD52蛋白来源于天然细胞，或来源于鼠源细胞或人源细胞；上述应用中，所述细胞为天然细胞。上述应用中，所述细胞为鼠源细胞或人源细胞。上述应用中，所述细胞为肿瘤细胞。上述应用中，所述肿瘤细胞为含有TPD52蛋白的肿瘤细胞。上述应用中，所述肿瘤细胞为乳腺癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、脂肪肉瘤细胞、肾癌细胞、卵巢癌细胞、肝癌细胞和/或子宫内膜癌细胞。本专利技术提供的一种分泌抗TPD52单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为小鼠杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5，该细胞株已于2020年1月10日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCCNO.19287，分类命名：杂交瘤细胞株。该单克隆抗体，其为小鼠IgG2a亚型单克隆抗体；其可识别重组和天然的人源和鼠源TPD52分子。本专利技术的优点及有益效果：(1)本专利技术提供了一种抗鼠肿瘤蛋白D52(TPD52)单克隆抗体，该单克隆抗体由杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5分泌获得。通过ELISA、Westernblot、等实验证明其能识别重组和天然的肿瘤蛋白D52。(2)本专利技术获得的杂交瘤细胞株(TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5)产生的单克隆抗体为一种IgG2a类抗体，与TPD52的结合有极强特异性和敏感性。(3)本专利技术获得的杂交瘤细胞株(TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5)产生的单克隆抗体可应用于蛋白质印迹、酶联免疫吸附等，特异性和灵敏度高，为肿瘤蛋白TD52的功能研究提供支持。(4)本专利技术获得的杂交瘤细胞株(TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5)产生的单克隆抗体可用于检测癌细胞的试剂盒的开发(可为试剂盒开发提供原材料)，检测的癌细胞可以为乳腺癌、肺癌、前列腺癌、脂肪肉瘤、肾细胞癌、卵巢癌、肝癌、子宫内膜癌。附图说明图1为重组鼠源TPD52蛋白在大肠杆菌中的诱导表达情况。图2为重组鼠源TPD52蛋白150mM咪唑洗脱纯化及浓缩后的结果。图3为TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5抗体的识别特性和实际应用效果。图4为TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5抗体可识别包括鼠源及人源的多种细胞中的TPD52。图5为TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5抗体与市场上已有的商业化抗体的效果对比结果。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、重组鼠源TPD52蛋白的制备一、重组鼠源TPD52抗原的制备查找NCBI数据库，鼠源蛋白TPD52的基因ID为21985，编码该蛋白的基因的核苷酸序列(N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.保藏号为CGMCC No.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5。/n

【技术特征摘要】
1.保藏号为CGMCCNo.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5。


2.由权利要求1所述的保藏号为CGMCCNo.19287的抗鼠TPD52单克隆抗体杂交瘤细胞株TPD52-2C4-2E12-2D3-4C5产生的单克隆抗体。


3.权利要求2所述的单克隆抗体在如下1)-8)中至少一种中的应用：
1)检测TPD52蛋白；
2)检测细胞中TPD52蛋白；
3)检测待测样本中TPD52蛋白；
4)特异结合TPD52蛋白；
5)制备检测TPD52蛋白的产品；
6)制备检测细胞中TPD52蛋白的产品；
7)制备检测待测样本中TPD52蛋白的产品；
8)制备特异结合TPD52蛋白的产品。


4.根据权利要求3所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建，赵亚南，张跃辉，王龙珠，田春艳，贺福初，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11