一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物及制备方法与应用技术

本公开提供了一种ICD诱导剂‑IDO抑制剂缀合物及制备方法与应用，缀合物结构式为

An ICD inducer Ido inhibitor conjugate and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物及制备方法与应用
本公开涉及一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物及制备方法与应用。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。肿瘤的免疫逃逸有助于肿瘤的发生发展，其中，肿瘤免疫逃逸的机制包括肿瘤自身的改变、肿瘤诱导微环境的改变以及肿瘤微环境促进肿瘤的发展。近年来，针对免疫逃逸环节的免疫疗法于肿瘤治疗中取得了显著的成功。免疫疗法涉及多个因素和环节，与肿瘤细胞自身和肿瘤微环境的改变均有机制复杂的联系，目前在临床实践过程中仍面临着较大的挑战。肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigen,TAA)的产生是激活T细胞的一个重要因素，然而，肿瘤细胞常常通过一系列改变(如抗原表达的丢失、内吞抗原或抗原脱落等方式)来抑制T细胞的活化，从而躲避机体免疫系统的监视并伺机生长。另外，肿瘤细胞可像病毒一样发生“抗原漂移”，导致抗原表位突变而改变肿瘤的抗原性，继而逃避T细胞介导的攻击。近来研究发现，用特定化学药物或放射线治疗肿瘤时，肿瘤细胞在发生凋亡的同时，从非免疫原性细胞转化为免疫原性细胞，并由此激发机体内抗肿瘤的免疫杀伤效应，此现象被称之为肿瘤细胞的免疫原性死亡。研究发现某些蒽环类化合物和奥沙利铂等化疗药物不仅诱导肿瘤细胞凋亡，而且可以引起免疫原性细胞死亡(ICD)，通过诱导肿瘤细胞自噬，释放3类信号：钙网蛋白暴露在细胞表面，刺激树突状细胞(DC)吞噬；三磷酸腺苷释放，招募DC进入肿瘤灶；高迁徙率族蛋白B1促进DC与垂死肿瘤细胞形成稳定结合，诱导机体产生特异性的T细胞抗肿瘤免疫。吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase，IDO)是肝脏外唯一催化色氨酸(Trp)沿犬尿氨酸(Kyn)途径分解代谢的限速酶。IDO与肿瘤免疫逃逸密切相关，可通过多种机制介导肿瘤免疫逃逸:色氨酸耗竭抑制局部T细胞增殖，色氨酸代谢产物促进T细胞凋亡，诱导调节性T细胞增殖等。鉴于IDO在肿瘤免疫耐受的形成和维持中所发挥的重要作用，其已经成为抗肿瘤免疫治疗的新靶点。然而，临床前研究结果提示，IDO抑制剂单用的肿瘤杀伤活性较弱，抑制率在30％～50％，为提高IDO抑制剂的临床治疗效果，将其与化疗药物联合使用是一种重要的策略。联合用药可实现化疗药的ICD诱导作用与IDO抑制剂的免疫相关代谢调节作用的协同，从而达到更佳的肿瘤治疗效果。据本公开专利技术人所知，目前对于ICD诱导剂和IDO抑制剂的联合用药的研究多为利用附加载体进行两药的共递送，然而，经本公开专利技术人研究发现，这种附加载体进行共递送的方式较为繁琐。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本公开的目的是提供一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物及制备方法与应用，采用缀合物的方式同时递送ICD诱导剂和IDO抑制剂，更为方便。为了实现上述目的，本公开的技术方案为：第一方面，本公开提供了一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物，其结构式如下：本公开利用体内三羧酸循环中的反应物琥珀酸，即丁二酸的两个羧基作为能与Dox及NLG919产生易裂解连接部分的桥联物，从而使得两药形成Dox-NLG919缀合物。据本公开专利技术人基于目前的研究发现，采用丁二酸作为桥联物时，能够获得Dox和NLG919缀合物，而采用其他二酸或多酸，难以获得Dox和NLG919缀合物。第二方面，本公开提供了一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的制备方法，将NLG919与丁二酸酐进行酯化反应获得NLG919-SA，NLG919-SA与Dox进行酰胺化反应获得ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物；NLG919-SA的结构式为ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的结构式为本公开通过实验证实，采用丁二酸能够制备ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物。其次，丁二酸酐与NLG919、Dox的反应顺序也影响ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的成功合成，本公开研究发现，先将NLG919与丁二酸酐合成，然后再与Dox反应可以成功制备ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物，而若顺序调换，则无法获得ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物。第三方面，本公开提供了一种上述ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物在制备肿瘤治疗药物中的应用。第四方面，本公开提供了一种上述ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物在单药递送系统中的应用。本公开的有益效果为：1.本公开提供了一种用于瘤治疗过程中可实现类似单药递送的免疫原性细胞死亡(ICD)诱导剂-色氨酸代谢阻断剂缀合物，该缀合物包括能够引起强烈效应T细胞免疫反应的ICD诱导化疗药、阻断色氨酸代谢为犬尿氨酸的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)抑制剂。2.本公开提供的缀合物的桥连物为丁二酸，丁二酸通过酯键和酰胺键将ICD诱导剂和色氨酸代谢阻断剂连接在一起，同时酯键和酰胺键易被瘤内大量存在的酯酶与酰胺酶水解，从而释放ICD诱导剂和色氨酸代谢阻断剂。3.本公开首次合成了一种从属不同作用机制并可协同抗癌的Dox-NLG919缀合物，为协同递药带来了极大的便利。附图说明构成本公开的一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。图1为本公开实施例1制备的NLG919-SA的核磁共振氢谱(1HNMR)图。图2为本公开实施例1制备的NLG919-SA的电喷雾质谱(ESI-MS)图。图3为本公开实施例1制备的Dox-NLG919缀合物的核磁共振氢谱(1HNMR)图。图4为本公开实施例1制备的Dox-NLG919缀合物的电喷雾质谱(ESI-MS)图。图5为本公开实施例2制备产物的电喷雾质谱(ESI-MS)图。图6为本公开实施例3制备产物的电喷雾质谱(ESI-MS)图。图7为本公开实施例4中Dox-NLG919缀合物抑制体内乳腺肿瘤生长，通过Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物治疗，以及用PBS对照治疗的比较。图8为本公开实例4中通过Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物治疗，以及用PBS对照治疗的小鼠体内肿瘤的荧光定量检测图。图9为本公开实例4中通过荧光定量检测Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物治疗，以及用PBS对照治疗的小鼠体内荧光强度。图10为本公开实例4中通过荧光定量检测Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物治疗，以及用PBS对照治疗的小鼠体内肿瘤体积的大小。图11为本公开实例4中通过用Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物治疗与用PBS对照治疗比较减少的肿瘤重量。图12为本公开实例4中与用PBS对照治疗比较，用Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物治疗期间小鼠的平均重量。图13为本公开实例5中4T1细胞通过用不同浓度的Dox、NLG919、Dox-NLG919缀合物(浓度范围为0-18ug/mL)，治疗后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物，其特征是，结构式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物，其特征是，结构式如下：





2.一种ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的制备方法，其特征是，将NLG919与丁二酸酐进行酯化反应获得NLG919-SA，NLG919-SA与Dox进行酰胺化反应获得ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物；
NLG919-SA的结构式为
ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的结构式为


3.如权利要求2所述的ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的制备方法，其特征是，酯化反应的催化剂为4-二甲氨基吡啶和N,N-二异丙基乙胺；
优选的，酯化反应的温度为室温。


4.如权利要求2所述的ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的制备方法，其特征是，酯化反应的溶剂为二氯甲烷。


5.如权利要求2所述的ICD诱导剂-IDO抑制剂缀合物的制备方法，其特征是，NLG919-SA的纯化过程为：将酯化反应后的混合物液加入至饱和氯化铵溶液中，采用二氯甲烷进行萃取，将萃取的有机相溶于乙醇与氯仿的混合溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜新义，陈晨，张蕊，杜微，张晶，唐春伟，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37