强化cysP表达的地衣芽胞杆菌及其制备方法和应用技术

本发明专利技术的提供一种强化cysP表达的地衣芽胞杆菌及其制备方法和应用，其中强化cysP表达的地衣芽胞杆菌是通过在地衣芽胞杆菌DW2内转入携带有硫元素转运蛋白基因cysP的质粒载体制得的，实现了地衣芽胞杆菌DW2游离表达硫元素转运蛋白基因cysP，达到强化硫元素转运蛋白基因cysP表达的目的。与直接将不含有

Bacillus licheniformis with enhanced expression of cysp and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
强化cysP表达的地衣芽胞杆菌及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程菌改造
，尤其是一种强化cysP表达的地衣芽胞杆菌及其制备方法和应用。
技术介绍
地衣芽胞杆菌是公认的具有生物安全性(GRAS)的重要工业微生物菌株，其广泛存在于自然界中。鉴于地衣芽胞杆菌具有遗传背景清晰、工业应用价值高等特点，其在近年来被广泛研究。地衣芽胞杆菌属革兰氏阳性菌，其主要用于发酵生产聚γ-谷氨酸、杆菌肽、乙偶姻、2,3-丁二醇、地衣素等多种生物化工产品。杆菌肽是一类由12个氨基酸残基组成的环肽类抗生素，其组成氨基酸包括鸟氨酸(Orn)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、异亮组氨酸(His)、D-天冬氨酸(D-Asp)、天冬酰胺(Asn)、赖氨酸(Lys)、D-谷氨酸(D-Glu)、半胱氨酸(Cys)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)和缬氨酸(Val)共11种氨基酸。杆菌肽可以抑制或杀灭某些致病菌，强烈抑制革兰氏阴性菌的生长，并与其它抗生素(如青霉素、庆大霉素等)产生协同增强效应；并且，其几乎不会在动物的肠道内被吸收，而且排泄迅速，没有残留，因此已被广泛应用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.强化cysP表达的地衣芽胞杆菌的构建方法，包括以下步骤：/n（1）以地衣芽胞杆菌DW2基因组DNA为模板扩增硫元素转运蛋白基因cysP，再在cysP基因片段上游连接启动子、下游连接终止子，构成目的基因片段；/n（2）准备游离型质粒载体，并根据游离型质粒载体上的酶切位点选择能够对该游离型质粒载体进行双酶切的限制性内切酶，再采用该限制性内切酶分别对该游离型质粒载体和步骤（1）得到的目的基因片段进行双酶切得到线性质粒片段和酶切基因片段；/n（3）将步骤（2）得到的酶切基因片段和线性质粒片段经 DNA连接酶进行连接，得到游离表达载体；/n（4）将步骤（3）得到的游离表达载体转入至地衣芽胞杆菌DW2...

【技术特征摘要】
1.强化cysP表达的地衣芽胞杆菌的构建方法，包括以下步骤：
（1）以地衣芽胞杆菌DW2基因组DNA为模板扩增硫元素转运蛋白基因cysP，再在cysP基因片段上游连接启动子、下游连接终止子，构成目的基因片段；
（2）准备游离型质粒载体，并根据游离型质粒载体上的酶切位点选择能够对该游离型质粒载体进行双酶切的限制性内切酶，再采用该限制性内切酶分别对该游离型质粒载体和步骤（1）得到的目的基因片段进行双酶切得到线性质粒片段和酶切基因片段；
（3）将步骤（2）得到的酶切基因片段和线性质粒片段经DNA连接酶进行连接，得到游离表达载体；
（4）将步骤（3）得到的游离表达载体转入至地衣芽胞杆菌DW2中，并筛选得到阳性转化子，即为强化cysP表达的地衣芽胞杆菌；
其中，所述的地衣芽胞杆菌DW2已于2011年10月12日保藏于位于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2011344；
所述地衣芽胞杆菌DW2的基因组DNA序列中的cysP基因如SEQUENCELISTING中所示。


2.根据权利要求1所述的强化cysP表达的地衣芽胞杆菌的构建方法，其特征在于：步骤（2）中的游离型质粒载体选用pHY300PLK，步骤（4）中将游离表达载体转入至地衣芽胞杆菌DW2后，在30-37℃的条件下经含有四环素抗性的培养基进行筛选转化子，得到的强化cysP表达的地衣芽胞杆菌菌株DW2/pHY-cysP。


3.根据权利要求2所述的强化cysP表达的地衣芽胞杆菌的构建方法，其特征在于：步骤（2）中采用EocRI和XbaI限制...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈守文，蔡冬波，李凌峰，吴非，李俊辉，陈晓斌，季潇炜，楼丽君，邱湘琪，
申请(专利权)人：绿康生化股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35