T细胞修饰制造技术

本发明专利技术涉及修饰的T细胞，其诱导性表达生物活性分子，例如IL‑7，并且组成性表达抗原受体，例如与肿瘤抗原结合的T细胞受体或嵌合抗原受体。修饰的T细胞可以包含核酸构建体，其包含编码生物活性分子的第一核苷酸序列，编码抗原受体的第二核苷酸序列；与第一核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子，以及与第二核苷酸可操作地连接的组成型启动子。提供了核酸构建体和载体，以及包含此类构建体和载体的T细胞及其治疗方法和用途。

T cell modification

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞修饰
本专利技术涉及T细胞的增加其细胞毒性活性的修饰，以及修饰的T细胞在免疫疗法中的用途，例如用于癌症的治疗。
技术介绍
发现T细胞(或T淋巴细胞)广泛分布在组织和肿瘤环境中。T细胞通过细胞表面上T细胞受体(TCR)的存在与其它淋巴细胞区分开。TCR是介导T细胞的抗原特异性活化的多亚基跨膜复合物。通过经由主要组织相容性复合物(MHC)分子识别在靶细胞上呈递的抗原肽配体，TCR对T细胞赋予抗原特异性。尽管源自肿瘤靶细胞中的改变或突变蛋白质的肽可以被表达特异性TCR的T细胞识别为外源的，但肿瘤细胞上的许多抗原仅是上调或过表达的(所谓的自身抗原)，并且不诱导功能性T细胞应答。因此，研究已集中于鉴定在恶性而非正常细胞类型中表达或高度表达的靶肿瘤抗原。此类靶的例子包括在广泛多样的人癌症中表达，但在正常组织中显示受限表达的癌/睾丸(CT)抗原NY-ESO-1(ChenY-T等人，ProcNatlAcadSciUSA.1997；94(5):1914-1918)，以及在非常有限的健康组织中表达的MAGE-A家族的CT抗原(ScanlanM.J.等人，ImmunolRev.2002；188:22–32)。此类抗原的鉴定已促进了基于靶向T细胞的免疫疗法的开发，所述免疫疗法具有提供特异性和有效癌症疗法的潜力(Ho,W.Y.等人，CancerCell2003；3:1318-1328；Morris,E.C.等人，Clin.Exp.Immunol.2003；131:1-7；Rosenberg,S.A.Nature2001；411:380-384；Boon,T.和vanderBruggenP.J.Exp.Med.1996；183:725-729)。已建议白介素7(IL-7)的静脉内施用，以改善基于T细胞的免疫治疗的结果。已建议白介素7(IL-7)的静脉内施用，以改善基于T细胞的免疫治疗的结果。已知IL-7增强肿瘤特异性T细胞的持久性(Melchionda,F.等人，J.Clin.Invest.2005；115:1177-87)，并且经基因修饰为分泌IL-7或过表达IL-7受体(与施用的IL-7结合)的T细胞在临床前模型中展示增强的抗肿瘤功效(Vera,J.F.等人，Mol.Ther.2009；17:880-8,Markley,J.C.和Sadelain,M.Blood2010；115:3508-3519)。然而，向癌症患者全身性施用细胞因子已引起明显的毒性(Sportes,C.等人，Clin.CancerRes.2010；16:727-35,Conlon,K.C.等人，J.Clin.Oncol.2015；33:74-82,Brudno,J.N.等人，Blood2016；127:3321-31)。替代方法例如T细胞的遗传修饰以分泌或转呈递(trans-present)细胞因子(HuttonL.V.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA2016；113:E7788-97)携带严重不良事件的风险，包括由于分泌细胞因子的系统性积累的神经毒性和细胞因子释放综合征(Zhang,L.等人，Clin.CancerRes.21；21:2278-88)，而过表达细胞因子受体的T细胞并不消除对于外源细胞因子的需要(Vera,J.F.等人，Mol.Ther.2009；17:880-8)。因此，用于将细胞因子例如IL-7及其它生物活性分子安全递送至T细胞的方法仍未确定。
技术实现思路
本专利技术人已出乎意料地认识到，在T细胞活化后，含有提供抗原受体的组成性表达和生物活性分子例如白介素7(IL-7)的诱导性表达的核酸构建体的T细胞，展示改善的抗肿瘤特性，而没有当生物活性分子在T细胞中组成性表达时观察到的高毒性。本专利技术的第一个方面提供了包含以下的核酸构建体；(i)编码生物活性分子的第一核苷酸序列；(ii)编码抗原受体的第二核苷酸序列；(iii)与所述第一核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子，和(iv)与所述第二核苷酸可操作地连接的组成型启动子。优选地，生物活性分子是细胞因子，最优选IL-7。本专利技术的第二个方面提供了包含第一个方面的核酸构建体的载体，例如慢病毒载体。本专利技术的第三个方面提供了包含根据第一个方面或第二个方面的核酸构建体或载体的T细胞群体。本专利技术的第四个方面提供了T细胞群体，其在T细胞活化后组成性表达异源抗原受体并且诱导性表达生物活性分子，例如IL-7。本专利技术的第五个方面提供了药物组合物，其包含根据第三个方面或第四个方面的T细胞群体和药学可接受的赋形剂。本专利技术的第五个方面提供了根据第三个方面或第四个方面的T细胞群体，其用于治疗人体或动物体的方法，例如治疗个体中的癌症的方法中。相关方面提供了根据第三个方面或第四个方面的T细胞群体在制造用于治疗个体中的癌症的药物中的用途，以及治疗癌症的方法，其包括向患有癌症的个体施用根据第三个方面或第四个方面的T细胞群体。本专利技术的第六个方面提供了产生修饰的T细胞群体的方法，其包括；将根据第一个方面或第二个方面的核酸构建体或载体引入从供体个体获得的T细胞群体内，以产生修饰的T细胞群体。本专利技术的第七个方面提供了治疗有此需要的个体中的癌症的方法，其包括；将根据第一个方面或第二个方面的核酸构建体或载体引入从供体个体获得的T细胞群体内，以产生修饰的T细胞群体，和向受体个体施用修饰的T细胞群体。供体个体和受体个体可以是相同的(即自体治疗；修饰的T细胞得自随后用修饰的T细胞治疗的个体)，或者供体个体和受体个体可以是不同的(即同种异体治疗；修饰的T细胞得自一个个体，并且随后用于治疗不同的个体)。下文描述了本专利技术的其它方面和实施例。附图说明图1显示了NFAT诱导型IL-7表达插入片段的序列和注释。序列以5'至3'取向示出，其中突出显示了盒的各个组分。这些包括NFATIL-2TREGGAGGAAAAACTGTTTCATACAGAAGGCGT的三个拷贝，最小CMV启动子，IL-7编码序列(密码子优化的)和SV40聚A。图1显示了由GeneArt提供的NFAT-IL-7质粒的图谱。通过用AgeI和MluI消化来去除NFAT-IL-7盒。图2显示了表达TCR1的慢病毒载体的载体图谱。突出显示的是独特的AgeI和MluI限制。图3显示了构建体ADB967的载体图谱。NFAT-IL-7盒被克隆到AgeI和MluI限制位点之间。IL-7的转录从反义链发生，并且处于与TCR1的那种相反的取向。图4显示了ADB1099IL7_T2A_TCR1的载体图谱。IL7_T2A_TCR1表示为单个ORF，其中IL-7、TCRα和TCRβ链由2A样跳过序列分开。图6显示了关于NFAT诱导型IL-7TCR2的质粒图谱。图7显示了组成型IL-7_TCR2的载体图谱。IL-7_TCR2被克隆到载体AB1224内的NheI和SalI位点之间。图8显示了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸构建体，其包含；/n(i)编码生物活性分子的第一核苷酸序列，/n(ii)编码抗原受体的第二核苷酸序列；/n(iii)与所述第一核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子，和/n(iv)与所述第二核苷酸可操作地连接的组成型启动子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170815 GB 1713078.21.一种核酸构建体，其包含；
(i)编码生物活性分子的第一核苷酸序列，
(ii)编码抗原受体的第二核苷酸序列；
(iii)与所述第一核苷酸序列可操作地连接的诱导型启动子，和
(iv)与所述第二核苷酸可操作地连接的组成型启动子。


2.根据权利要求1所述的核酸构建体，其中来自所述诱导型启动子的表达通过T细胞的活化来诱导。


3.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述诱导型启动子包含活化T细胞核因子(NFAT)转录应答元件(TRE)。


4.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述NFATTRE具有SEQIDNO:14的核酸序列或其变体。


5.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述诱导型启动子包含所述NFATTRE的三个或更多个拷贝。


6.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述核酸构建体包含SEQIDNO:1的序列。


7.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述组成型启动子是人延伸因子-1α启动子。


8.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述第一核苷酸序列编码细胞因子。


9.根据权利要求8所述的核酸构建体，其中所述细胞因子是白介素7(IL-7)。


10.根据权利要求9所述的核酸构建体，其中所述IL-7是人IL-7。


11.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述抗原受体是T细胞受体(TCR)。


12.根据权利要求11所述的核酸构建体，其中所述TCR是亲和力增强的TCR。


13.根据权利要求11或权利要求12所述的核酸构建体，其中所述TCR特异性结合展示抗原的肽片段的MHC。


14.根据权利要求13所述的核酸构建体，其中所述抗原是由癌细胞表达的肿瘤抗原。


15.根据权利要求11至14中任一项所述的核酸构建体，其中所述TCR包含SEQIDNO:5、6或11中任何一个的氨基酸序列。


16.根据权利要求1至10中任一项所述的核酸构建体，其中所述抗原受体是嵌合抗原受体(CAR)。


17.根据权利要求16所述的核酸构建体，其中所述CAR特异性结合由细胞表达的抗原。


18.根据权利要求17所述的核酸构建体，其中所述抗原是由癌细胞表达的肿瘤抗原。


19.根据权利要求14或18所述的核酸构建体，其中所述肿瘤抗原是NY-ESO-1或MAGE-A10。


20.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述第一核苷酸序列被配置用于在第一方向上表达，并且所述第二核苷酸序列被配置用于在第一方向上表达，并且


21.一种载体，其包含根据权利要求1至20中任一项所述的核酸构建体。


22.根据权利要求21所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体。


23.一种病毒颗粒，其包含根据权利要求21或22所述的载体。


24.一种T细胞群体，其包含根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体、载体或病毒颗粒。


25.一种T细胞群体，其在T...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·汉密尔顿，J·希尔克，C·盖根，
申请(专利权)人：艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB