一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法。本发明专利技术提供了一种CFP10‑ESAT6重组融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该重组融合蛋白表达量高且为上清表达、活性好；纯化该重组融合蛋白后，经酶切、镍柱分离，洗脱，制备得到了结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6；该方法制备得到的ESAT6蛋白的表达量高、抗原性好、活性好、纯度高，解决了ESAT6蛋白抗原性较差、可溶性不好、原核表达大部分为包涵体的问题，为结核病的早期诊断和新型疫苗的研制奠定了基础，具有广泛的应用前景。

A preparation method of Mycobacterium tuberculosis immunogen protein ESAT6

【技术实现步骤摘要】
一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法
本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法。
技术介绍
结核病是由结核分枝杆菌(MTB)感染引起的传染病，据WHO发布的2019年全球结核病报道，目前全世界1/4的人口感染了结核分枝杆菌，每年约有1000万新病例发生，HIV阴性人群中，结核病导致约有120万人死亡。我国是世界上30个结核病高负担国家之一，据全国第四次结核病流行病学调查的数据，全国受结核分枝杆菌感染人数超过4亿。因此，如何早期发现及预防结核病日益引起了世界范围的重视。ESAT6蛋白是一种结核分枝杆菌早期分泌性蛋白，没有信号肽，其可能是通过一种非信号肽依赖方式分泌到胞外。ESAT6蛋白在常规普通培养基上生长时，结核分枝杆菌分泌ESAT6蛋白量很低，但在感染的巨噬细胞内生长时，ESAT6蛋白表达量明显提高，这种变化被称为巨噬细胞诱导效应。ESAT6蛋白在结核分枝杆菌增殖期和非增殖期都高水平的转录，因此，无论是活动性结核患者还是结核分枝杆菌潜伏感染者，ESAT6蛋白都能有效诱导机体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CFP10-ESAT6重组融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种CFP10-ESAT6重组融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.编码权利要求1所述重组融合蛋白的CFP10-TEV-ESAT6融合基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.权利要求1所述重组融合蛋白或权利要求2所述融合基因在制备结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6中的应用。


4.一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法，其特征在于，纯化权利要求1所述的重组融合蛋白后，经酶切、镍柱分离，洗脱，即得所述免疫原蛋白ESAT6。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将权利要求1所述的重组融合蛋白依次经过镍柱亲和层析、层析除盐和阴离子交换层析进行纯化；
S2.将步骤S1纯化后的重组融合蛋白用蛋白酶TEV酶切，镍柱分离，收集流穿；
S3.将步骤S2得到的流穿用1％～3％曲拉通处理后，洗脱，即得所述免疫原蛋白ESAT6。
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【专利技术属性】
技术研发人员：周亚凤，申兆兴，黎勇，宋淑婷，
申请(专利权)人：上海晶诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31