一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用，具体地，本发明专利技术提供一种嵌合SIRPα蛋白受体，包括细胞外结构域、任选的绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域；其中，所述细胞外结构域包括SIRPα胞外结构域。本发明专利技术还提供了工程细胞株，该细胞株的基因组中整合有表达外源的嵌合SIRPα蛋白受体(CSR分子)的表达盒，并且，所述细胞株不表达CD47。本发明专利技术的细胞株可用于筛选针对CD47或SIRPα特异性分子药物，并且具有稳定性好、靶点特异性高等特点。

A recombinant chimeric membrane protein cell line and its application

【技术实现步骤摘要】
一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用。
技术介绍
SIRPα是信号调节蛋白家族(signalregulatoryproteins,SIRPs)中典型的抑制性受体，可与体内广泛存在的跨膜糖蛋白CD47相互作用，传递抑制性信号。由于CD47广泛表达于多种肿瘤细胞，肿瘤细胞可通过CD47-SIRPa信号通路逃逸巨噬细胞的免疫监视。因此通过CD47抗体或受体阻断CD47与SIRPa的结合可以激活巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用，以及DC细胞的抗原递呈作用。近年来针对CD47靶点药物的开发越来越得到医药研发领域的重视，有关其在细胞水平上的生物学活性分析又是必不可少的。传统的分析方法通过淋巴细胞分离液从人的外周血分离外周血单个核细胞(PBMC)，进一步采用磁珠分选方式获取单核细胞，再通过长时间的刺激、培养使其分化为巨噬细胞，才能将其用于研究CD47靶向药促进吞噬肿瘤细胞能力的检测。该方法可操作性低、周期长、成本高、通量低、且不能用于今后药物的放行检测。因此，本领域迫切需要开发一种重组嵌合膜蛋白细胞株，用于筛选针对CD47或SIRPα特异性分子药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种重组嵌合膜蛋白细胞株，用于筛选针对CD47或SIRPα特异性分子药物。本专利技术的第一方面，提供了一种嵌合SIRPα蛋白受体，所述嵌合SIRPα蛋白受体包括细胞外结构域、任选的绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域；其中，所述细胞外结构域包括SIRPα胞外结构域。在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体(CSR)包含从N端到C端的SIRPα胞外结构域、绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域。在另一优选例中，所述细胞内结构域包括CD28的胞浆信号传导序列、和/或CD3ζ的胞浆信号传导序列。在另一优选例中，所述细胞内结构域还包括共刺激信号传导区。在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体具有式I结构：L-Z1-H-Z2-Z2’-Z3(I)式中，各“-”独立地为连接肽或肽键；L为无或信号肽序列；Z1为SIRPα胞外结构域；H为无或铰链区；Z2为跨膜结构域；Z2’为CD28的胞浆信号传导序列或任选的共刺激信号传导区；Z3为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。在另一优选例中，所述SIRPα胞外结构域选自下组：(a)如SEQIDNO:2氨基酸序列的蛋白；(b)将SEQIDNO:2氨基酸序列经过一个或多个(如1-10个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)蛋白功能的由(a)衍生的蛋白；或(c)与(a)限定的蛋白序列有90％以上(较佳地≥95％)同源性且具有(a)蛋白功能的由(a)衍生的蛋白。在另一优选例中，编码所述SIRPα胞外结构域的核苷酸序列选自下组：(a)核苷酸序列如SEQIDNO:3所示的多核苷酸；(b)核苷酸序列与SEQIDNO:3所示序列的同源性≥70％(较佳地≥80％、≥90％、≥95％或≥98％)，且具有与CD47结合活性的多核苷酸；(c)如SEQIDNO:3所示多核苷酸的5'端和/或3'端截短1-60个(较佳地1-30个，更佳地1-6个)核苷酸，且具有与CD47(尤其是人CD47)结合活性的多核苷酸。在另一优选例中，所述SIRPα胞外结构域为人源。在另一优选例中，所述SIRPα胞外结构域靶向或结合于人CD47蛋白。在另一优选例中，所述的铰链区选自下组的一种或多种蛋白：CD8α、CD28、CD137、IgG1或其组合。在另一优选例中，所述的绞链区为选自下组的蛋白的绞链区：CD8α。在另一优选例中，所述的跨膜结构域为选自下组的一种或多种蛋白的跨膜结构域：CD28、CD137、或其组合。在另一优选例中，所述跨膜结构域为CD28来源的跨膜结构域。在另一优选例中，所述共刺激信号传导区为衍生自或包括选自下组分子的活性肽段：CD28、4-1BB、OX40、或其组合。在另一优选例中，所述共刺激信号传导区包括CD28来源的共刺激信号传导区(或共刺激信号分子)。在另一优选例中，所述CD28的跨膜区及共刺激信号传导区选自下组：(A)具有SEQIDNO:6所示氨基酸序列的多肽；(B)具有与SEQIDNO:6所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽；(C)将SEQIDNO:6中所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽。在另一优选例中，所述CD3ζ的胞浆信号传导序列选自下组：(A)具有SEQIDNO.:7所示氨基酸序列的多肽；(B)具有与SEQIDNO.:7所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽；(C)将SEQIDNO.:7中所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽。在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体包括SIRPα胞外结构域、CD8alpha的绞链区、CD28的跨膜区及共刺激信号传导区、以CD3ζ的胞浆信号传导序列。在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体还包括前导序列(信号肽)。在另一优选例中，所述前导肽选自人SIRPa的膜外端信号肽。在另一优选例中，所述信号肽序列如SEQIDNO.:1中第1－30位所示。在另一优选例中，所述信号肽序列如SEQIDNO.:5所示。在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体的氨基酸序列如SEQIDNO.:1所示。在另一优选例中，所述编码嵌合SIRPα蛋白受体的核苷酸序列如SEQIDNO.:4所示。本专利技术第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码本专利技术第一方面所述的嵌合SIRPα蛋白受体。在另一优选例中，所述核酸分子为分离的。在另一优选例中，所述核酸分子还包括编码前导序列(信号肽)的多核苷酸。在另一优选例中，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQIDNO.:4所示。本专利技术第三方面提供了一种载体，所述的载体含有本专利技术第二方面所述的核酸分子。在另一优选例中，所述的载体选自下组：DNA、RNA、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体、转座子、或其组合。在另一优选例中，所述载体为慢病毒载体。本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞中含有本专利技术第三方面所述的载体或染色体中整合有外源的本专利技术第二方面所述的核酸分子。在另一优选例中，所述细胞为分离的细胞，和/或所述细胞为基因工程化的细胞。在另一优选例中，所述细胞为哺乳动物细胞。在另一优选例中，所述细胞为Jurkat细胞、NK细胞、或T细胞。本专利技术第五方面提供了一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合SIRPα蛋白受体，其特征在于，所述嵌合SIRPα蛋白受体包括细胞外结构域、任选的绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域；其中，所述细胞外结构域包括SIRPα胞外结构域。/n

【技术特征摘要】
1.一种嵌合SIRPα蛋白受体，其特征在于，所述嵌合SIRPα蛋白受体包括细胞外结构域、任选的绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域；其中，所述细胞外结构域包括SIRPα胞外结构域。


2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的嵌合SIRPα蛋白受体。


3.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求2所述的核酸分子。


4.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞中含有权利要求3所述的载体或染色体中整合有外源的权利要求2所述的核酸分子。


5.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有药学上可接受的载体以及权利要求1所述的嵌合SIRPα蛋白受体、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的载体、或权利要求4所述的细胞。


6.权利要求1所述的嵌合SIRPα蛋白受体、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的载体、或权利要求4所述的细胞的用途，其特征在于，用于制备筛选抑制CD47诱导的细胞凋亡的候选药物的细胞株。


7.一种工程细胞株，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：田文志，李松，陈典泽，
申请(专利权)人：宜明昂科生物医药技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31