一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法技术

本发明专利技术提供一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法，包括以下步骤：步骤一、称取0.9～2g的动物油脂，加入5～10mL正己烷涡旋溶解，得到预溶液I；步骤二、在步骤一得到的预溶液I中，加入9～20mL的含乙腈的溶液涡旋5～10min，得到预溶液II；步骤三、将所述的预溶液II进行超声溶解10～40min，得到待检测溶液I，然后进行检测前的净化预处理，得到待检测溶液II；步骤四、将所述的待检测溶液II经过0.22μm滤膜后，进行液相色谱串联质谱仪检测。

A method for the determination of quinolones residues in animal oils

【技术实现步骤摘要】
一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法
本专利技术属于食品检测
，具体涉及一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法。
技术介绍
喹诺酮类药物是一种人工合成的广谱抗菌药。因其具有性质稳定、价格便宜、抗菌谱广、抗菌活性强等优点，常作为饲料添加剂来预防和治疗动物疾病。但喹诺酮类药物是会在动物体内产生残留，严重危害人体健康。欧盟、美国、日本等国相继制定了喹诺酮类在动物组织中的最高残留限量。2002年中国农业部235号公告规定了牛、羊脂肪中的达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星的农药最大残留限量值为100μg/Kg。2016年中国农业农村部2292号公告中禁止在动物食品中使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星。禽畜产品中喹诺酮类药物的残留情况作为继瘦肉精之后的又一个重点予以监控，建立高效可靠的喹诺酮残留检测的方法势在必行。当前，喹诺酮类药物的检测方法有毛细管电泳法、免疫法(酶联免疫法和免疫亲和色谱法)、光谱法、高效液相色谱及液质联用技术。这些方法及国家标准方法针对的基质主要是动物肌肉组织。喹诺酮类药物经过食物链富集作用主要积聚于动物的肌肉和脂肪，而针对动物油脂中喹诺酮类药物的检测，相关的国家标准方法和文献都较少。因此，有必要提供改进的技术方案以克服现有技术中存在的技术问题。
技术实现思路
为解决现有技术存在的问题，本专利技术提供一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法，减少了现有技术存在的对动物油脂类样品提取效率差，测量准确性差等问题。本专利技术提供一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法，包括：步骤一、称取0.9～2g的动物油脂，加入5～10mL正己烷涡旋溶解，得到预溶液I；步骤二、在步骤一得到的预溶液I中，加入9～20mL的含乙腈的溶液涡旋5～10min，得到预溶液II；步骤三、将所述的预溶液II进行超声溶解10～40min，得到待检测溶液I，然后进行检测前的净化预处理，得到待检测溶液II；步骤四、将所述的待检测溶液II经过0.22μm滤膜后，进行液相色谱串联质谱仪检测。通过上述技术方案，能有效提取动物油脂样品中喹诺酮类药物残留，使提取效率达到50％左右，样品回收率达到50％左右。优选地，在如前所述的测定方法中，所述的含乙腈的溶液为含75～85％乙腈的水溶液。通过上述技术方案，能有效提取动物油脂样品中喹诺酮类药物残留，使提取效率达到80％以上，回收率达到80％以上。优选地，在如前所述的测定方法中，所述的含乙腈的溶液为酸化乙腈溶液；所述的酸化乙腈溶液包括甲酸和乙腈，甲酸和乙腈的体积比为1：99。通过上述技术方案，可提供解决的技术问题是能有效提取动物油脂样品中喹诺酮类药物残留，使提取效率达到60％左右，达到的技术效果为：样品回收率60％左右。优选地，在如前所述的测定方法中，所述的检测前的净化预处理包括：将所述的待检测溶液I进行3500～4500r/min离心5～10min，然后取下层乙腈水层上样PRIMEHLB小柱，得到滤出液(待检测溶液II)。通过上述技术方案，可提供解决的技术问题是净化提取液，使样液在质谱上的检测信号更稳定，准确，达到的技术效果为：样品回收率在90％以上110％以下。优选地，在如前所述的测定方法中，步骤三还包括：将所述的预溶液II进行超声溶解的时间为30～40min，得到待检测溶液I。通过上述技术方案，可使样品的提取更充分，提取回收率在90％以上。优选地，在如前所述的测定方法中，所述的检测前的净化预处理包括：吸取所述的待检测溶液I的乙腈层于150mL旋转瓶中，再向残渣中加入10mL的1％酸化乙腈，重复提取一次，合并乙腈层，于40℃旋转蒸发仪蒸发至液体含量不高于1％，加入5mL的15％甲醇水溶液溶解残渣，得到待净化液；将HLB固相萃取小柱预先用5ml甲醇、5ml水活化，处理完毕后，加入所述的待净化液，再用5mL水淋洗小柱，最后用5mL甲醇洗脱小柱，收集洗脱液，氮吹至液体含量不高于1％，用15％甲醇水定容至0.5mL，得到待检测溶液II。通过上述技术方案，能有效提取和净化动物油脂样品中喹诺酮类药物残留，使提取效率达到60％左右，样品回收率在60％左右。优选地，在如前所述的测定方法中，所述的液相色谱串联质谱仪的检测参数具体如下：1)色谱柱：BEH，C18，2.1*50mm，1.7um；2)流动相：A甲醇，B0.1％甲酸+2mmol/L甲酸铵水；3)流速：0.35ml/min；4)进样量：5ul；5)色谱柱温度：30℃；6)梯度洗脱程序如表1所示；7)离子源：电喷雾离子源；8)扫描模式：MRM；9)气帘气：25psi；10)碰撞气：Medium；11)离子化电压：5500V；12)离子源温度：600℃；13)喷雾气：60psi；14)辅助加热气：50psi；15)母离子，子离子及去簇电压,碰撞能量如表2所述。通过上述技术方案，可在短时间内，准确检测喹诺酮类的含量，实现5分钟时间内完成对11种喹诺酮类化合物的定性和定量测定。本专利技术还提供一种所述的测定方法在生物、食品或医疗领域上的应用。本专利技术创造的有益效果：本专利技术提供一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法，通过采用用正己烷溶解油脂，然后用含乙腈的溶液进行提取，建立了针对油脂类样品的提取前处理实验方法。同时，采用了PRIMEHLB柱和HLB柱两种净化柱作净化，对于此提取液进行净化。检测仪器的分析检测时间很短，检测时间由传统的20多分钟缩短到5分钟以内。具体实施方式下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照国家标准测定。若没有相应的国家标准，则按照通用的国际标准、常规条件、或按照制造厂商所建议的条件进行。可对本专利技术提到的特征或实施例提到的特征进行组合。本说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。在本专利技术中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术，但本专利技术包括但不限于这些实施例。液相色谱-串联质谱仪(购自Waters公司，H-Class型液相，配AB公司API-5500TripleQuad型串联质谱检测器)；BS-210S型分析天平(购自北京赛多利斯天平有限公司)；ZFQ-85A型旋转蒸发仪(购自上海医疗器械厂)；超纯水系统(购自美国Millipore公司)；MF-80型离心机(购自Hanil科学仪器有限公司)；MS-1型旋涡振荡器(购自广州仪科实验室技术有限公司)；凝胶渗透色谱仪(购自上海磐合科学仪器有限公司)；氮吹仪(购自上海安谱公司)；其余设备和试剂均为市售常见产品。对比例1、一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法称取2.0g试样，用10mL乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法，其特征在于，包括：/n步骤一、称取0.9～2g的动物油脂，加入5～10mL正己烷涡旋溶解，得到预溶液I；/n步骤二、在步骤一得到的预溶液I中，加入9～20mL的含乙腈的溶液涡旋5～10min，得到预溶液II；/n步骤三、将所述的预溶液II进行超声溶解10～40min，得到待检测溶液I，然后进行检测前的净化预处理，得到待检测溶液II；/n步骤四、将所述的待检测溶液II经过0.22μm滤膜后，进行液相色谱串联质谱仪检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种动物油脂中喹诺酮药物残留的测定方法，其特征在于，包括：
步骤一、称取0.9～2g的动物油脂，加入5～10mL正己烷涡旋溶解，得到预溶液I；
步骤二、在步骤一得到的预溶液I中，加入9～20mL的含乙腈的溶液涡旋5～10min，得到预溶液II；
步骤三、将所述的预溶液II进行超声溶解10～40min，得到待检测溶液I，然后进行检测前的净化预处理，得到待检测溶液II；
步骤四、将所述的待检测溶液II经过0.22μm滤膜后，进行液相色谱串联质谱仪检测。


2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的含乙腈的溶液为含75～85％乙腈的水溶液。


3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的含乙腈的溶液为酸化乙腈溶液；所述的酸化乙腈溶液包括甲酸和乙腈，甲酸和乙腈的体积比为1：99。


4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的检测前的净化预处理包括：将所述的待检测溶液I进行3500～4500r/min离心5～10min，然后取下层乙腈水层上样PRIMEHLB小柱，得到滤出液(待检测溶液II)。


5.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，步骤三还包括：将所述的预溶液II进行超声溶解的时间为30～40min，得到待检测溶液I。


6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述的检测前的净化预处理包括：吸取所述的待检测溶液I的乙腈层于150mL旋转瓶中，再向残渣中加入10mL的1％酸化乙腈，重复提取一次，合并乙腈层，于40℃旋转蒸发仪蒸发至液体含量不高于1％，加入5mL的15％甲醇水溶液溶解残渣，得到待净化液；将HLB固相萃取小柱预先用5ml甲醇、5ml水活化，处理完毕后，加入所述的待净化液，再用5mL水淋洗小柱，最后用5mL甲醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：董昕，戴辉，王佳杰，闫蕊，王佳佳，
申请(专利权)人：品测上海检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31