一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，属于色谱检测领域。本发明专利技术通过将样品经乙腈提取，浓缩后用正己烷脱脂，并采用Agilent Poroshell 120 EC‑C18(4μm，4.6mm×100mm)色谱柱分离，以20mmol/L乙酸铵和乙腈作为流动相进行梯度洗脱，且控制流动相的流速为1.0mL/min，二极管阵列检测器的检测波长为471nm，在25min时长便可完成红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定。该方法操作简单、分离度好，且灵敏度及精确度高，为测定红心鸭蛋中的类胡萝卜素含量提供方法参考。

A method for the determination of carotenoids in duck eggs

【技术实现步骤摘要】
一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法
本专利技术属于色谱检测领域，涉及一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，具体涉及一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的高效液相色谱测定方法。
技术介绍
随着人们生活水平的不断提高，人们对食品的要求不仅仅停留在营养的需求方面，对视觉的需求方面也有了更高的追求。蛋黄着色是一个天然的过程，类胡萝卜素是形成蛋黄色泽主要的着色因素，由于禽类本身不能合成这些类胡萝卜素，需要从所摄食的食物中获取，并沉积到蛋黄中，因此，在饲料中加入不同比例的该类色素，能使蛋黄颜色发生改变，以此吸引消费者。但由于使用类胡萝卜素仍会存在安全风险，且近些年来的研究表明角黄素有一定的肝损伤性，而且大量摄入的角黄素可能会在视网膜蓄积，从而影响视力。目前我国还未有针对蛋类中类胡萝卜素含量的检测标准，监管难度大。从结构上来说，类胡萝卜素是聚异戊二烯化合物。由于类胡萝卜素的性质不稳定，易受光、热、酸、碱等环境影响，给鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定增加了难度。目前，类胡萝卜素的主要分析方法是采用高效液相色谱法(HPLC)，但未见能同时测定蛋中多种类胡萝卜素方法的报道，并且国内对类胡萝卜素的检测方法主要通过柱层析、有机试剂提取、皂化等手段进行样品前处理，步骤繁琐，且需要用到大量丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯等易挥发的有毒试剂，对检测人员危害较大。本专利技术申请将建立一种可同时测定红心鸭蛋中辣椒红素、虾青素、叶黄素、玉米黄素和角黄素等5种类胡萝卜素的高效液相色谱法，为红心鸭蛋的质量安全监控提供技术保障。
技术实现思路
>本专利技术的目的是提供一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，其是一种能够同时测定红心鸭蛋中辣椒红素、虾青素、叶黄素、玉米黄素、角黄素5种类胡萝卜素含量的高效液相色谱法。为了达到以上技术效果，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供的一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，包括如下步骤：(1)绘制标准曲线：将辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素标准品，在有机溶剂中混合配制成一系列类胡萝卜素标准储备液，随后进行高效液相色谱测试，绘制类胡萝卜素各组分的标准曲线，以最终制备相应的线性回归方程；具体为，精密称取辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素标准品10mg分别置于不同的100mL容量瓶中，用少量二氯甲烷溶解，再用乙腈定容至刻度，配制成浓度为100μg/mL的标准储备液，-20℃保存。用时用乙腈稀释成浓度为1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的标准序列溶液随后进行高效液相色谱测试，绘制类胡萝卜素各组分的标准曲线，以最终制备相应的线性回归方程。(2)红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定：利用有机溶剂对红心鸭蛋样品进行超声提取，随后旋转蒸发浓缩、离心脱脂，得到待测样品溶液；将所述待测样品溶液进行高效液相色谱测试，并分别记录辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素对应的峰面积；将所述辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素的峰面积分别代入相应的由步骤(1)得到的线性回归方程中，计算得到相应的所述类胡萝卜素各组分的含量。优选的，所述有机溶剂为乙腈。优选的，所述色谱测试条件为：所述高效液相色谱的仪器型号为Agilent1260HPLC，二极管阵列检测器的检测波长为471nm，及采用AgilentPoroshell120EC-C18色谱柱分离，并以乙酸铵和乙腈作为流动相进行梯度洗脱。优选的，所述色谱柱的规格参数为：4.6mm×100mm，填料直径为4μm；且所述色谱柱的柱温为35℃，进样量为5μL。优选的，所述流动相为20mmol/L乙酸铵溶液和乙腈组成的混合溶液，且流动相流速为1.0mL/min，分析时间为25min。优选的，所述步骤(2)中的超声提取步骤：在红心鸭蛋待测样品中加入乙腈和无水硫酸钠后超声提取10min，随后离心、移取乙腈相，并用乙腈重复提取两次，合并乙腈相，随后加入正丙醇旋转蒸发浓缩，以及用乙腈溶解后加入正己烷离心过滤，即得待测样品溶液。优选的，每次提取加入乙腈的量为20mL，且加入5g无水硫酸钠、5mL正丙醇及3mL正己烷。优选的，所述离心过滤参数：离心时间为5min，离心转速为4000r/min，滤膜的膜孔为0.22μm。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供的一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，具有如下优异效果：本专利技术通过将样品经乙腈提取，浓缩后用正己烷脱脂，并采用AgilentPoroshell120EC-C18(4μm，4.6mm×100mm)色谱柱分离，以20mmol/L乙酸铵和乙腈作为流动相进行梯度洗脱，且控制流动相的流速为1.0mL/min，二极管阵列检测器的检测波长为471nm，在25min时长完成红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定。红心鸭蛋中辣椒红素、虾青素、叶黄素、玉米黄素、角黄素5种类胡萝卜素不仅可以实现基线分离，线性关系良好，相关系数均在0.999以上，而且样品在3个浓度水平的加标回收率为84.39％～93.42％(n＝6)。本专利技术公开保护的方法简便、快捷、准确，可用于红心鸭蛋中5种类胡萝卜素的测定，为红心鸭蛋的质量安全监控提供技术障碍。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例，下面将对实施例中所需要使用的附图做简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可根据提供的附图获得其他的附图。图1是本专利技术不同色谱柱的分离效果图。其中，1为辣椒红素，2为虾青素，3为叶黄素，4为玉米黄素，5为角黄素。图2为本专利技术5种类胡萝卜素混合标准溶液色谱图。其中，1为辣椒红素，2为虾青素，3为叶黄素，4为玉米黄素，5为角黄素。图3为本专利技术待测样品溶液色谱图。其中，1为虾青素，2为叶黄素，3为玉米黄素，4为角黄素。图4为本专利技术5种类胡萝卜素紫外吸收光谱图。其中，1为角黄素，2为虾青素，3为辣椒红素，4为叶黄素，5为玉米黄素。图5为本专利技术5种类胡萝卜素的标准曲线图。其中，图(a)为辣椒红素，图(b)为虾青素，图(c)为叶黄素，图(d)为玉米黄素，图(e)为角黄素。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例及说明书附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术公开保护一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，具体包括如下步骤：步骤1：绘制标准曲线：将辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素标准品，在有机溶剂中混合配制成一系列类胡萝卜素标准储备液，随后进行高效液相色谱测试，绘制类胡萝卜素各组分的标准曲线，以最终制备相应的线性回归方程；步骤2：红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定：利用有机溶剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)绘制标准曲线：/n将辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素标准品，在有机溶剂中混合配制成一系列类胡萝卜素标准储备液，随后进行高效液相色谱测试，绘制类胡萝卜素各组分的标准曲线，以最终制备相应的线性回归方程；/n(2)红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定：/n利用有机溶剂对红心鸭蛋样品进行超声提取，随后旋转蒸发浓缩、离心脱脂，得到待测样品溶液；/n将所述待测样品溶液进行高效液相色谱测试，并分别记录辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素对应的峰面积；/n将所述辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素的峰面积分别代入相应的由步骤(1)得到的线性回归方程中，计算得到相应的所述类胡萝卜素各组分的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线：
将辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素标准品，在有机溶剂中混合配制成一系列类胡萝卜素标准储备液，随后进行高效液相色谱测试，绘制类胡萝卜素各组分的标准曲线，以最终制备相应的线性回归方程；
(2)红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定：
利用有机溶剂对红心鸭蛋样品进行超声提取，随后旋转蒸发浓缩、离心脱脂，得到待测样品溶液；
将所述待测样品溶液进行高效液相色谱测试，并分别记录辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素对应的峰面积；
将所述辣椒红素、玉米黄素、叶黄素、虾青素和角黄素的峰面积分别代入相应的由步骤(1)得到的线性回归方程中，计算得到相应的所述类胡萝卜素各组分的含量。


2.根据权利要求1所述的一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈。


3.根据权利要求1所述的一种红心鸭蛋中类胡萝卜素含量的测定方法，其特征在于，所述色谱测试条件为：所述高效液相色谱的仪器型号为Agilent1260HPLC，二极管阵列检测器的检测波长为471nm，及采用AgilentPoroshell120EC-C18色谱柱分离，并以乙酸铵和乙腈作为流动相进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡翔宇，陈璐，陈晓兰，
申请(专利权)人：南宁海关技术中心，
类型：发明
国别省市：广西;45