一种茶叶中硒的化合物的检测方法技术

一种茶叶中硒的化合物的检测方法包括：取1单位的茶叶样品，置于聚丙烯离心管中；于所述聚丙烯离心管中加入混合酶试剂；于所述聚丙烯离心管中加水定容；在30～40℃的温度下对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次；以3000～4000r/min的转速使所述聚丙烯离心管内的溶液离心3～5min；取所述聚丙烯离心管中的水清液，经0.22μm或0.45μm孔径的滤膜过滤得到待检测液；用等离子体质谱仪分离所述待检测液得出亚硒酸根、硒酸根、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸及硒代蛋氨酸的混合物溶液，并对所述混合物溶液进行检测。本申请的一种茶叶中硒的化合物的检测方法，能够较为充分的提取出含硒有机物的混合物溶液，并且能够定性定量检测出茶叶中各种有机硒化合物的含量。

A method for the determination of selenium compounds in tea

【技术实现步骤摘要】
一种茶叶中硒的化合物的检测方法
本申请涉及成分检测
，特别是涉及一种茶叶中硒的化合物的检测方法及其制备方法。
技术介绍
硒是人体必需而又无法自身合成的营养元素，其生物学功能主要有：提高人体免疫力，抗氧化、延缓衰老，保护修复细胞，防癌抗癌，对重金属有解毒作用，保护眼睛等。因此合理地摄入硒元素对人体健康、预防治病有着重要的作用。富硒茶叶是当前市面上较为常见的富硒产品。茶叶中硒的化合物总体可分为无机硒、有机硒两大类，其中无机硒包括亚硒酸根、硒酸根化合物；有机硒化合物则有数百种，常见的包括硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸等3种。硒对人体健康的功能作用取决于其总含量，更取决于其化学形态。但是，目前对于茶叶中硒的检测，更多的研究只停留在总硒、以及亚硒酸根、硒酸根等无机化学物的检测，并没有涉及含硒的有机化学物的具体化学形态的检测方法，且现有技术中通过先检测出茶叶中无机硒的含量，再使用差减法计算得出有机硒的总含量，而不能直接测定硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸等各种有机硒化合物各自的含量。
技术实现思路
基于此，亟需提供一种茶叶中硒的化合物的检测方法，以解决现有技术的不足。一种茶叶中硒的化合物的检测方法，包括：取1单位的茶叶样品，置于聚丙烯离心管中；于所述聚丙烯离心管中加入混合酶试剂，所述混合酶试剂包括中性蛋白酶溶液、链霉蛋白酶溶液及蛋白酶k溶液中的一种到三种的任意组合；于所述聚丙烯离心管中加水定容；在30～40℃的温度下对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次；以3000～4000r/min的转速使所述聚丙烯离心管内的溶液离心3～5min；取所述聚丙烯离心管中的水清液，经0.22μm或0.45μm孔径的滤膜过滤得到待检测液；用等离子体质谱仪分离所述待检测液得出亚硒酸根、硒酸根、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸及硒代蛋氨酸的混合物溶液，并对所述混合物溶液进行检测。优选地，所述中性蛋白酶溶液的酶量为：30～60mg，所述链霉蛋白酶溶液的酶量为3～10mg，所述蛋白酶k溶液的酶量为4～10mg。优选地，所述在30～40℃的温度下对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次，包括：在30～40℃的温度下对使用超声波清洁器对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次。优选地，所述取1单位的茶叶样品，置于聚丙烯离心管中，包括：把茶叶样品研磨成粉末状态，混匀，制成待测样品置于聚丙烯离心管中。优选地，所述等离子体质谱仪为高效液相色谱串联电感耦合等离子体质谱仪。优选地，所述等离子体质谱仪使用柠檬酸溶液作为所述检测液的流动相，所述柠檬酸溶液的浓度为10mmol/L，所述柠檬酸溶液的pH值为4.5，所述柠檬酸溶液的流速为1.0mL/min。与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：本申请的一种茶叶中硒的化合物的检测方法，以所述混合酶试剂为提取剂，辅以超声波萃取、加热、震荡、离心、过滤的操作手段，能够较为充分的提取出含硒有机物的混合物溶液，再使用等离子体质谱仪分离并检测该混合物溶液，从而能够定性定量检测出茶叶中的硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸等各种有机硒化合物的含量。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本申请实施例的一种茶叶中硒的化合物的检测方法制备方法的流程示意图。具体实施方式为了便于理解本申请，下面将参照相关附图对本申请进行更全面的描述。附图中给出了本申请的较佳实施方式。但是，本申请可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本申请的公开内容理解的更加透彻全面。需要说明的是，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的，并不表示是唯一的实施方式。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本申请。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。一种茶叶中硒的化合物的检测方法，包括：取1单位的茶叶样品，置于聚丙烯离心管中；于所述聚丙烯离心管中加入混合酶试剂，所述混合酶试剂包括中性蛋白酶溶液、链霉蛋白酶溶液及蛋白酶k溶液中的一种到三种的任意组合；于所述聚丙烯离心管中加水定容；在30～40℃的温度下对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次；以3000～4000r/min的转速使所述聚丙烯离心管内的溶液离心3～5min；取所述聚丙烯离心管中的水清液，经0.22μm或0.45μm孔径的滤膜过滤得到待检测液；用等离子体质谱仪分离所述待检测液得出亚硒酸根、硒酸根、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸及硒代蛋氨酸的混合物溶液，并对所述混合物溶液进行检测。实施例1，所述中性蛋白酶溶液的酶量为：30～60mg，所述链霉蛋白酶溶液的酶量为3～10mg，所述蛋白酶k溶液的酶量为4～10mg。具体地，蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的关键试剂。链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomycesgriseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。所述混合酶试剂能够提取出其中的2-4种硒形态。不同蛋白酶的联合使用，提取出硒的形态也会不同，提取率各不相同。优选地，所述中性蛋白酶溶液的浓度为：20mg/mL，所述链霉蛋白酶溶液的浓度为10mg/mL，所述蛋白酶k溶液的浓度为10mg/mL。进一步地，取1.0g茶叶样品，置于50ml聚丙烯离心管中，加入重量为50mg的混合酶试剂，加水定容至20ml，在37℃的环境中超声提取30min,期间震荡2次，每次1min,并使用4000r/min的转速使聚丙烯离心管内的溶液离心4min，得到分层效果明显的水溶液，取其中的上清液，经0.45μm孔径的滤膜过滤得到待检测液，再使用等离子体质谱仪分离并检测待检测液，得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茶叶中硒的化合物的检测方法，其特征在于，包括：/n取1单位的茶叶样品，置于聚丙烯离心管中；/n于所述聚丙烯离心管中加入混合酶试剂，所述混合酶试剂包括中性蛋白酶溶液、链霉蛋白酶溶液及蛋白酶k溶液中的一种到三种的任意组合；/n于所述聚丙烯离心管中加水定容；/n在30～40℃的温度下对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次；/n以3000～4000r/min的转速使所述聚丙烯离心管内的溶液离心3～5min；/n取所述聚丙烯离心管中的水清液，经0.22μm或0.45μm孔径的滤膜过滤得到待检测液；/n用等离子体质谱仪分离所述待检测液得出亚硒酸根、硒酸根、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸及硒代蛋氨酸的混合物溶液，并对所述混合物溶液进行检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种茶叶中硒的化合物的检测方法，其特征在于，包括：
取1单位的茶叶样品，置于聚丙烯离心管中；
于所述聚丙烯离心管中加入混合酶试剂，所述混合酶试剂包括中性蛋白酶溶液、链霉蛋白酶溶液及蛋白酶k溶液中的一种到三种的任意组合；
于所述聚丙烯离心管中加水定容；
在30～40℃的温度下对所述聚丙烯离心管的溶液超声提取25～35min，期间震荡所述聚丙烯离心管1～3次；
以3000～4000r/min的转速使所述聚丙烯离心管内的溶液离心3～5min；
取所述聚丙烯离心管中的水清液，经0.22μm或0.45μm孔径的滤膜过滤得到待检测液；
用等离子体质谱仪分离所述待检测液得出亚硒酸根、硒酸根、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸及硒代蛋氨酸的混合物溶液，并对所述混合物溶液进行检测。


2.根据权利要求1所述的一种茶叶中硒的化合物的检测方法，其特征在于，所述中性蛋白酶溶液的酶量为：30～60mg，所述链霉蛋白酶溶液的酶量为3～10mg，所述蛋白酶k溶液的酶量为4～10mg。

【专利技术属性】
技术研发人员：陈孟君，严国军，杨钦沾，陆冬萍，
申请(专利权)人：紫金县天元茶业农民专业合作社，
类型：发明
国别省市：广东;44