本发明专利技术公开了一种通过式SPE/UPLC‑MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法，油样品中酚类抗氧化剂用酸化乙腈提取，正己烷除脂，上清液经通过式固相萃取柱净化，C18色谱柱分离，采用乙腈‑水流动相进行梯度洗脱，三重四极杆质谱电喷雾多反应监测模式(MRM)检测，外标法定量。9种抗氧化剂在各自质量浓度范围内线性关系良好，相关系数大于0.994。其中方法检出限为0.003～0.02mg/kg，定量限为0.01～0.05mg/kg。加标回收率在82.2％～115.2％之间，相对标准偏差均小于9.3％。该方法简单、高效、灵敏度高，适用于食用油中抗氧化剂的快速定性、定量分析。
Rapid determination of nine phenolic antioxidants in vegetable oil by SPE / UPLC-MS / MS
【技术实现步骤摘要】
通过式SPE/UPLC-MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法
本专利技术属于食品检验领域，具体涉及一种通过式SPE/UPLC-MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法。
技术介绍
食用油脂在加工、贮存、使用过程中极易受到光、热、酶、金属离子等作用而发生氧化酸败变质，特别是富含不饱和双键的植物油更易发生氧化变质。生产上，为防止食用油脂酸败，产生对人体有害的物质，在其中添加抗氧化剂防止或减慢油脂因空气的氧化作用变质，达到油脂原有的性质和营养价值。美国早在1947年就开始利用抗氧化剂来增加油脂的稳定性。目前没食子酸丙酯(PG)、2,4,5-三羟基苯丁酮(THBP)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、去甲二氢愈创木酸(NDGA)、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚(Ionox-100)、没食子酸辛酯(OG)、2,6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT)及没食子酸十二酯(DG)等为常用于食用油中的人工合成酚类抗氧化剂。酚类人工合成抗氧化剂抗氧化效果好、价格低廉被广泛应用于植物油的防腐败变质，常存在过量或违规使用问题。毒理学研究表明，抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用，如TBHQ能导致DNA损伤。许多国家对该类抗氧化剂的使用及限量做了明确规定，日本及欧盟等国家禁止任何食品中TBHQ等抗氧化。我国的食品安全国家标准GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对部分抗氧化剂的最大使用限量做出了严格规定。食品中人工抗氧化剂的使用逐渐成为食品安全问题的焦点。食品中抗氧化剂常用的检测方法有薄层色谱法、比色法、毛细管电泳法、气相色谱法(GC)、气相色谱串联质谱法(GC-MS)、高相液相色谱法(HPLC)和液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS)。其中，薄层色谱法和比色法在定性、定量方面存在不准确问题。气相色谱法和气相色谱串联质谱法对前处理要求高，方法相对复杂且抗干扰能力差。高相液相色谱法存在灵敏度差，定性不足等问题。液相色谱-串联质谱法因其高灵敏度、高选择性及定量定性准确等特性，已广泛应用于各种农兽残及添加剂的检测中。食用油中化学成分复杂，基质干扰严重。常用的前处理方法有液液萃取法、固相萃取柱法，凝胶色谱净化技术、固相微萃取法、基质固相分散法等，这些方法存在前处理过程复杂，耗时，需要大量有毒有机溶剂，回收率低及不能兼顾多种抗氧化剂等问题。OasisPRiMEHLB为通过型固相萃取柱，其特点是出色的除磷脂、蛋白及油脂等杂质，已有报道将其用于肉及肉制品、水产品、禽副产品等基质中兽药残留的检测。现行国家标准GB5009.32-2016《食品安全国家标准食品中9种抗氧化剂的测定》中第二法为液相色谱-串联质谱法，方法只包括PG、THBP、NDGA、OG及DG共5种抗氧化剂，9种抗氧化剂只能用高效液相色谱法检测，极大限制了标准方法的使用。将通过式固相萃取与液相色谱-串联质谱法结合，分析植物油中酚类抗氧化剂的研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种通过式SPE/UPLC-MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法，植物油样品经酸化乙腈提取，通过式OasisPRiMEHLB净化，经超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱检测，建立了同时检测植物油中9种酚类抗氧化剂的快速检测方法。采用的通过式OasisPRiMEHLB固相萃取柱无需活化和洗脱步骤，操作简单，效率高，可以有效的去除磷脂、脂肪和蛋白等干扰，降低了基体效应，提高了回收率。该方法简便快捷，灵敏度高，通量性好，检测效率高，特别适合植物油中酚类抗氧化剂的定性、定量检测。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种通过式SPE/UPLC-MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法，包括以下步骤：(1)样品提取：称取植物油样品，加入含AP的0.5％甲酸-乙腈溶液，涡旋，超声，将上层提取液移出，残留油样再加入含AP的0.5％甲酸-乙腈溶液重复提取一次，合并两次提取液，加入乙腈饱和正己烷，涡旋除脂后弃去正己烷层，取乙腈层，得到提取液；(2)净化：取提取液上OasisPRiMEHLB固相萃取柱，再加乙腈进一步淋洗，合并所用流出液，流出液于40℃氮吹浓缩至近干，甲醇复溶，加水稀释，涡旋混匀离心后，过滤膜；(3)准确称取10mg各抗氧化剂标准物质，用甲醇溶于10mL棕色容量瓶中，定容至刻度，分别配制成标准储备液，将标准储备液用空白样品溶液逐级稀释，以各物质定量离子对的峰面积(Y)对其质量浓度(X)作标准曲线；各氧化剂为没食子酸丙酯、2,4,5-三羟基苯丁酮、叔丁基对苯二酚、去甲二氢愈创木酸、叔丁基对羟基茴香醚、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚、没食子酸辛酯、2,6-二叔丁基对甲基苯酚、没食子酸十二酯；(4)净化后的样品进行超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱检测。优选地，所述的色谱条件为：色谱柱：WatersHSST3(100mm×2.1mmi.d.,1.8μm)；流动相：乙腈(A)和水(B)，梯度洗脱程序(A)：0-3min:10％→30％；3.0-5.0min:30％保持；5.0-10.0min:30％→95％；10.0-12.0min:95％保持；12.0-12.1min:95％→10％；12.1-14.0min:10％保持；流速：0.3mL/min；柱温：35℃；进样体积：2μL。优选地，所述的质谱条件为：离子源:电喷雾离子源(H-ESI)；离子化模式:负离子模式(ESI-)；毛细管电压:2.4KV；锥孔电压:40V；脱溶剂气温度500℃；离子源温度:150℃；脱溶剂气流速:850L/Hr；锥孔气流速:150L/Hr；碰撞气流速:0.12mL/min；扫描方式:多反应监测(MRM)。优选地，所述的样品提取的具体方法为：称取均匀植物油样品1g于50mL聚丙烯具塞离心管中，加入10mL含50μg/mLAP的0.5％甲酸-乙腈(体积比)溶液，涡旋5min，超声10min，8000r/min离心5min，将上层提取液移至出，残留油样再加入8mL含50μg/mLAP的0.5％甲酸-乙腈(体积比)溶液重复提取一次，合并两次提取液，加入10mL乙腈饱和正己烷，涡旋除脂后弃去正己烷层，取乙腈层定容至20mL。优选地，所述的样品净化的具体方法为：准确取5mL提取液上OasisPRiMEHLB固相萃取柱，再加3mL乙腈进一步淋洗，合并所用流出液，流出液于40℃氮吹浓缩至近干，用1mL甲醇复溶后，加1mL水稀释，涡旋混匀离心后，过0.22μm微孔滤膜。有益效果建立采用通过式固相萃取柱净化，超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测植物油中9种酚类抗氧化剂检测方法。油样品中酚类抗氧化剂用酸化乙腈提取，正己烷除脂，上清液经OasisPRIMEHLB通过式固相萃取柱净化，C18色谱柱分离，采用乙腈-水流动相进行梯度洗脱，三重四级杆质谱电喷雾多反应监测模式(MRM)检测，外标法定量。结果表明：采用本实验建立的方法，没食子酸丙酯(PG)、2,4,5-三羟基苯丁酮(THBP)、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种通过式SPE/UPLC-MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)样品提取：称取植物油样品，加入含AP的0.5％甲酸-乙腈溶液，涡旋，超声，将上层提取液移出，残留油样再加入含AP的0.5％甲酸-乙腈溶液重复提取一次，合并两次提取液，加入乙腈饱和正己烷，涡旋除脂后弃去正己烷层，取乙腈层，得到提取液；/n(2)净化：取提取液上Oasis PRiME HLB固相萃取柱，再加乙腈进一步淋洗，合并所有流出液，流出液于40℃氮吹浓缩至近干，甲醇复溶，加水稀释，涡旋混匀离心后，过滤膜；/n(3)准确称取10mg各抗氧化剂标准物质，用甲醇溶于10mL棕色容量瓶中，定容至刻度，分别配制成标准储备液，将标准储备液用空白样品溶液逐级稀释，以各物质定量离子对的峰面积(Y)对其质量浓度(X)作标准曲线；各氧化剂为没食子酸丙酯、2,4,5-三羟基苯丁酮、叔丁基对苯二酚、去甲二氢愈创木酸、叔丁基对羟基茴香醚、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚、没食子酸辛酯、2,6-二叔丁基对甲基苯酚、没食子酸十二酯；/n(4)净化后的样品进行超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱检测。/n...
【技术特征摘要】
1.一种通过式SPE/UPLC-MS/MS快速测定植物油中的9种酚类抗氧化剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品提取：称取植物油样品，加入含AP的0.5％甲酸-乙腈溶液，涡旋，超声，将上层提取液移出，残留油样再加入含AP的0.5％甲酸-乙腈溶液重复提取一次，合并两次提取液，加入乙腈饱和正己烷，涡旋除脂后弃去正己烷层，取乙腈层，得到提取液；
(2)净化：取提取液上OasisPRiMEHLB固相萃取柱，再加乙腈进一步淋洗，合并所有流出液，流出液于40℃氮吹浓缩至近干，甲醇复溶，加水稀释，涡旋混匀离心后，过滤膜；
(3)准确称取10mg各抗氧化剂标准物质，用甲醇溶于10mL棕色容量瓶中，定容至刻度，分别配制成标准储备液，将标准储备液用空白样品溶液逐级稀释，以各物质定量离子对的峰面积(Y)对其质量浓度(X)作标准曲线；各氧化剂为没食子酸丙酯、2,4,5-三羟基苯丁酮、叔丁基对苯二酚、去甲二氢愈创木酸、叔丁基对羟基茴香醚、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚、没食子酸辛酯、2,6-二叔丁基对甲基苯酚、没食子酸十二酯；
(4)净化后的样品进行超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的色谱条件为：色谱柱：WatersHSST3(100mm×2.1mmi.d.,1.8μm)；流动相：乙腈(A)和水(B)，梯度洗脱程序(A)：0-3min:10％→30％；3.0-5.0min:30％保持；5.0-10.0min:30％→9...
【专利技术属性】
技术研发人员：张艳侠，赵慧男，刘艳明，孙珊珊，徐向军，薛霞，刘桂亮，郑文静，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。