RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物技术

本发明专利技术涉及一种RT‑qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物，属于分子生物技术领域。该方法包括cDNA第一链的合成、健康树鼩GAPDH基因、

RT-qPCR method, kit and primer for detection of Slc22a8 gene transcription level in tree shrew

【技术实现步骤摘要】
RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物
本专利技术属于分子生物
，具体涉及一种RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物。
技术介绍
SLC22A8基因在基因库中的代码为SLC22A8基因，属SLC22A(有机阴离子转运蛋白)家族，SLC22A8基因主要在近曲肾小管上皮细胞的基侧膜上表达，在肝脏、肠和大脑亦有分布。其介导有机阴离子进入其分布的细胞，进而参与多种药物在肾脏的分泌、重吸收和在体内的分布等。主要转运体内内源性及外源性有机阴离子，在药物和毒物的排泄中发挥重要作用，尿酸的排泄是主要依靠肾小管中SLC22A8基因表达的一种内源性有机阴离子完成的。SLC22A8基因表达降低，肾脏分泌减少有机阴离子积累，导致肾脏炎症。高尿酸血症是由于尿酸盐沉积或尿酸代谢障碍所致血清尿酸水平增高所引起的一种代谢性疾病，正常嘌呤饮食状态下，非同日2次空腹血尿酸水平，男性＞420微摩尔/升，女性＞360微摩尔/升，即可判定为高尿酸血症，近年来发病率不断上升。尿酸水平越高、高尿酸持续的时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤（1），cDNA第一链的合成：/n分别以健康和待测树鼩新鲜组织提取的总RNA为模板，逆转录合成得树鼩肾脏组织cDNA第一链；所述的新鲜组织为新鲜肾脏、肝脏、小肠组织；/n步骤（2），健康树鼩GAPDH基因、

【技术特征摘要】
1.用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1），cDNA第一链的合成：
分别以健康和待测树鼩新鲜组织提取的总RNA为模板，逆转录合成得树鼩肾脏组织cDNA第一链；所述的新鲜组织为新鲜肾脏、肝脏、小肠组织；
步骤（2），健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：
以Easydilution梯度稀释步骤（1）得到的健康树鼩组织cDNA第一链，分别以未稀释cDNA第一链及稀释后的cDNA为模板，进行实时荧光定量检测，并分别以SLC22A8F和SLC22A8R、GAPDHF和GAPDHR为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，分别得到健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；
步骤（3），标准曲线的建立：
以起始模板量拷贝数Log10的对数值为X轴，以Ct值为Y轴进行绘制，分别得到GAPDH基因、SLC22A8基因的标准曲线；
步骤（4），待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：
将步骤（1）得到的待测树鼩组织cDNA第一链分别以SLC22A8F和SLC22A8R、GAPDHF和GAPDHR为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，扩增体系和扩增程序与步骤（2）相同，分别得到待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；
步骤（5），树鼩SLC22A8基因转录水平的定量：
根据步骤（2）得到的标准曲线进行计算，得到树鼩SLC22A8基因转录水平；
所述的SLC22A8F、SLC22A8R、GAPDHF、GAPDHR引物的序列如下：

SLC22A8F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

GAPDHF：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDHR：5＇-aatgag...

【专利技术属性】
技术研发人员：李哲丽，唐东红，叶尤松，王陈芸，李涛，徐瑾，董鑫，张铭娟，黄明峰，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53