一种高通量测序文库定量检测结果校正的方法及检测方法技术

本申请公开了一种高通量测序文库定量检测结果校正的方法及检测方法。本申请校正方法包括，采用与待测NGS文库相同物种核酸进行文库构建，作为内控品；测定内控品浓度，根据测定浓度上机测序；根据测序结果分析内控品的实际簇密度，计算内控品实际浓度，公式一：实际浓度＝定量浓度×(2‑理论簇密度/实际簇密度)；将内控品实际浓度与定量浓度的比值作为校正系数，校正待测NGS文库的定量检测结果。本申请校正方法，根据内控品上机测序数据实际产出情况分析内控品真实浓度与定量检测浓度的偏差，以此对待测NGS文库定量检测浓度进行校正，获得待测NGS文库真实浓度，为上机测序提供了准确有效的参考数据，以便获得最优测序数据结果。

A method and detection method for the correction of quantitative detection results of high throughput sequencing Library

【技术实现步骤摘要】
一种高通量测序文库定量检测结果校正的方法及检测方法
本申请涉及高通量测序
，特别是涉及一种高通量测序文库定量检测结果校正的方法及检测方法。
技术介绍
高通量测序(High-ThroughputSequencing)又名下一代测序(NextGenerationSequencing，NGS)，是相对于传统的桑格测序(SangerSequencing)而言的一种测试技术。目前，高通量测序以其高输出量与高解析度的特性，不仅为科研工作者提供了丰富的遗传学信息，而且使得测序的费用和时间大大缩短。高通量测序文库(NGS文库)制备的目的是，在片段化后的待测核酸片段上连接特异性的接头序列，让它们能够在高通量测序平台上进行测序。NGS文库的质量对于高通量测序(NGS)产出的数据质量至关重要。因此，NGS文库在上机测序之前，需要对其浓度进行精准测定，以便上机测序时能够调整得到合适的上机测序浓度，最终获得最优的测序数据结果。目前，普遍使用的NGS文库定量检测方法，主要是测序仪官方推荐的QPCR方法，目的是力求准确地预测簇密度，从而合理安排NGS文本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量测序文库定量检测结果校正的方法，其特征在于：包括以下步骤，/n(1)采用与待测高通量测序文库相同物种的核酸样品，对核酸样品进行相同的高通量测序文库构建，获得与待测高通量测序文库特征相似的测序文库，作为内控品，将内控品的簇密度标记为理论簇密度；/n(2)采用相同的高通量测序文库定量检测方法，对内控品进行浓度测定，标记为内控品定量浓度，根据测定的内控品定量浓度进行上机测序；/n(3)根据测序结果分析内控品的实际簇密度，根据公式一计算内控品实际浓度；/n公式一：内控品实际浓度＝内控品定量浓度×[2-(理论簇密度/实际簇密度)]/n其中，内控品实际浓度和内控品定量浓度的单位均为nmol/...

【技术特征摘要】
1.一种高通量测序文库定量检测结果校正的方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)采用与待测高通量测序文库相同物种的核酸样品，对核酸样品进行相同的高通量测序文库构建，获得与待测高通量测序文库特征相似的测序文库，作为内控品，将内控品的簇密度标记为理论簇密度；
(2)采用相同的高通量测序文库定量检测方法，对内控品进行浓度测定，标记为内控品定量浓度，根据测定的内控品定量浓度进行上机测序；
(3)根据测序结果分析内控品的实际簇密度，根据公式一计算内控品实际浓度；
公式一：内控品实际浓度＝内控品定量浓度×[2-(理论簇密度/实际簇密度)]
其中，内控品实际浓度和内控品定量浓度的单位均为nmol/L，理论簇密度和实际簇密度的单位均为％；
(4)将内控品实际浓度与内控品定量浓度的比值作为校正系数，待测高通量测序文库的定量检测结果乘以所述校正系数，获得待测高通量测序文库的实际浓度，即实现高通量测序文库定量检测结果校正。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(4)之前，还包括按照步骤(1)至(3)对梯度稀释的内控品进行内控品实际浓度检测，获得不同梯度稀释内控品对应的校正系数，取其平均值，即校正系数平均值；将待测...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明炎，张晓妮，杨庆，
申请(专利权)人：深圳海普洛斯医学检验实验室，深圳市海普洛斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44