AKR1B10在制备急性心肌梗死诊疗制剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及AKR1B10在制备急性心肌梗死诊疗制剂中的应用。发明专利技术人对急性心肌梗死患者外周血进行高通量测序分析，挑选候选基因后通过进一步分子细胞实验验证，AKR1B10在急性心肌梗死组中高表达，AKR1B10抑制剂可用于制备治疗急性心肌梗死药物。本发明专利技术提供了一种新的急性心肌梗死的监测治疗靶点，具有重要的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
AKR1B10在制备急性心肌梗死诊疗制剂中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及AKR1B10在制备急性心肌梗死诊疗制剂中的应用。
技术介绍
心血管疾病是威胁人类健康的重要疾病之一，尤其是急性心肌梗死((AcuteMyocardialInfarction，AMI)己成为心血管疾病中死亡率不断增加的重要原因。AMI的早期治疗对患者良好的预后起着至关重要的作用。AMI的早期、及时、准确的诊断及病情估计是积极采取有效的治疗措施并保证心脏及时再灌注以减少死亡率的必要条件。目前AMI的临床诊断的血清生物标志物主要有肌酸激酶同工酶、肌红蛋白和肌钙蛋白等，上述标志物虽己在AMI早期诊断的敏感性及特异性上达到一定水平，但研究者们对高敏感性及特异性的新血清标志物的研究仍在继续，如何更早的对急性心肌梗死进行诊断及预防，一直是研究的重要课题。而随着人类基因组计划完成和基因芯片技术的发展，许多单基因疾病的致病基因被发现，并应用到疾病的诊断与治疗当中。而AMI作为一种受多种遗传与环境因素影响的疾病，遗传学在AMI发病中的作用仍未明确。具体是哪些基因，通过何种细胞过程，有哪些通路参与了AMI过程尚未明确。本研究通过AMI的外周血RNA表达谱差异分析，来研究具体有哪些基因参与了AMI过程，为将来AMI早期基因诊断奠定基础。专利技术人对6例急性心肌梗死病例组和6对照组血液样本进行高通量测序，结合生物信息学方法进行基因筛选，在差异表达明显的基因中挑选出高表达的候选基因AKR1B10，现有研究中并没有AKR1B10和急性心肌梗死相关的报道，进一步，专利技术人进行了分子验证，证实了AKR1B10在急性心肌梗死组中高表达，AKR1B10抑制剂可用于制备治疗急性心肌梗死药物。本专利技术提供了一种新的急性心肌梗死的监测治疗靶点，具有重要的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种急性心肌梗死诊断制剂，所述急性心肌梗死诊断制剂检测AKR1B10基因和/或AKR1B10基因的表达产物。进一步，所述急性心肌梗死诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片、免疫方法检测急性心肌梗死组织或外周血中AKR1B10基因的表达，优选的，所述的荧光定量PCR试剂盒中含有一对特异性扩增AKR1B10基因的引物；所述的基因芯片中包括与AKR1B10基因的核酸序列杂交的探针，更优选的，荧光定量PCR试剂盒内含有特异性检测AKR1B10基因的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.9，下游引物序列为SEQIDNO.10。进一步，直接检测急性心肌梗死组织或外周血中AKR1B10基因和/或基因的表达产物。进一步，所述的急性心肌梗死的诊断制剂采用免疫方法检测急性心肌梗死组织或外周血中AKR1B10基因的表达产物，优选的，所述免疫方法为ELISA检测和/或胶体金检测。进一步，所述检测AKR1B10表达产物的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的AKR1B10单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被AKR1B10单克隆抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。进一步，所述检测AKR1B10蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的AKR1B10单克隆抗体。进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步，所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有抗AKR1B10单克隆抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。本专利技术的目的在于提供上述急性心肌梗死诊断制剂在制备急性心肌梗死诊断工具中的应用。本专利技术的目的在于提供一种治疗急性心肌梗死的制剂，所述制剂中含有抑制AKR1B10基因的转录或表达的试剂或化合物。进一步，所述治疗急性心肌梗死的制剂中含有激活AKR1B10的抑制基因、激活抑制AKR1B10表达的蛋白、导入抑制AKR1B10转录或表达的siRNA、激活促进AKR1B10mRNA降解的microRNA、导入促进AKR1B10蛋白降解的分子、抑制促进AKR1B10表达的因子及蛋白的表达。优选的，所述治疗急性心肌梗死的制剂含有下列中的一组或几组siRNA：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、SEQIDNO.3和SEQIDNO.4、SEQIDNO.5和SEQIDNO.6。更优选的，所述治疗急性心肌梗死的制剂含有siRNA序列为SEQIDNO.5和SEQIDNO.6。本专利技术的目的在于提供上述治疗急性心肌梗死的制剂在制备急性心肌梗死治疗药物或试剂中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因AKR1B10基因，进而通过分子细胞生物学方法验证了AKR1B10基因与急性心肌梗死的关系：AKR1B10基因在外周血中高表达，与急性心肌梗死具有很好的相关性，可用于制备急性心肌梗死辅助诊断制剂，具有重要的临床应用价值。本领域人员熟知抑制基因及其表达产物的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种：通过激活目的基因的抑制基因、激活目的基因的抑制基因表达的蛋白、采用RNA干扰技术抑制目的基因表达、激活促进目的基因mRNA降解的microRNA、导入促进目的基因编码蛋白降解的分子、抑制促进目的基因表达的因子及蛋白的表达。RNA干扰(RNAi)是指外源性和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解，导致转录后基因沉默的现象，是一种使用小的双链RNA高效、特异地阻断体内某种特定基因的表达，促使mRNA降解，使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。siRNA设计完成后可以采用直接合成法或者构建siRNA表达载体，制备好的siRNA可以通过磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene法、显微注射或基因枪等机械法、阳离子脂质体试剂法等途径转染细胞。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。本专利技术的目的在于提供一种检测急性心肌梗死的基因检测试剂盒，所述试剂盒检测基因AKR1B10，采用特异的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.9，下游引物序列为SEQIDNO.10。进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种急性心肌梗死诊断制剂，其特征在于，所述急性心肌梗死诊断制剂检测AKR1B10基因和/或AKR1B10基因的表达产物。

【技术特征摘要】
1.诊断制剂在制备急性心肌梗死诊断工具中的应用，其特征在于，所述诊断制剂检测AKR1B10基因和/或AKR1B10基因的表达产物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒或基因芯片或免疫方法检测急性心肌梗死组织或外周血中AKR1B10基因的表达。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，荧光定量PCR试剂盒中含有一对特异性扩增AKR1B10基因的引物；基因芯片中包括与AKR1B10基因的核酸序列杂交的探针。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，荧光定量PCR试剂盒内含有特异性检测AKR1B10基因的上游引物和下游引物，上游引物序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：任静，常鹏，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11