一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，包括长度多态性遗传标记和质控位点的引物组合物、Taq DNA聚合酶、PCR扩增的缓冲液、对照基因组DNA、纯水，其中，多态性遗传标记和质控位点的引物组合物包括单条引物含有荧光素标记的如SEQ·ID·No.1～SEQ·ID·No.20所示的引物对。本发明专利技术所提供的通用试剂盒可对目标区域CNV拷贝数为0、1、2、3或以上进行准确判断，既适用于拷贝数增加也适用于拷贝数减少，有效克服了一代测序方案和实时荧光方案的缺点，且无需制备标准曲线，操作简单，准确度高。

A general kit for verifying copy number variation based on fragment analysis

【技术实现步骤摘要】
一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒。
技术介绍
拷贝数变异(CopyNumberVariations，CNVs)通常指长度涉及1kb或以上的DNA片段的缺失(拷贝数减少)、重复(拷贝增加)等，这种类型的变异是目前在人类遗传学领域、肿瘤学领域中的研究热点之一。如ZarreiM等在2015年报告了人类全基因组CNV图谱(ZarreiM,etal.NatRevGenet.2015；16(3):172-83.)，Liang等发现通过测序方法对CNV进行检测有助于人类染色体病综合征的诊断(LiangD,etal.JMolDiagn.2014；16(5):519-526.)；而Shao等则在2019年发现CNV与泛肿瘤组织中的基因表达情况密切相关(ShaoX,etal.BMCMedGenet.2019；20(1):175.)。CNV检测方案依据位点通量的不同，可分为高通量检测技术和低通量检测技术。高通量检测技术通常包括比较基因组杂交(aCGH)技术(Zh本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，其特征在于，包括长度多态性遗传标记和质控位点的引物组合物、Taq DNA聚合酶、PCR扩增的缓冲液、对照基因组DNA、纯水；/n其中，所述长度多态性遗产标记包括位于人基因组5号染色体70.8-71.2Mb范围内的rs146950089、rs76897176、rs59913469、rs36192652、ATA26A05和位于人基因组5号染色体68.0-68.6Mb范围内的rs201750616、rs142599011、rs540996931。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，其特征在于，包括长度多态性遗传标记和质控位点的引物组合物、TaqDNA聚合酶、PCR扩增的缓冲液、对照基因组DNA、纯水；
其中，所述长度多态性遗产标记包括位于人基因组5号染色体70.8-71.2Mb范围内的rs146950089、rs76897176、rs59913469、rs36192652、ATA26A05和位于人基因组5号染色体68.0-68.6Mb范围内的rs201750616、rs142599011、rs540996931。


2.根据权利要求1所述的一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，其特征在于，所述引物组合物中的引物的终反应浓度为100-300pmol/L。


3.根据权利要求1所述的一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，其特征在于，所述质控位点为X染色体上的ZFX、Y染色体上的ZFY和15号染色体上的B2M基因。


4.根据权利要求1所述的一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，其特征在于，所述引物组合物包括单条引物含有荧光素标记的如SEQ·ID·No.1～SEQ·ID·No.20所示的引物对。


5.根据权利要求1所述的一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒，其特征在于，所述对照基因组DNA为对目标区域的拷贝数已自行验证的、表型正常的人基因组DNA样本。


6.一种使用如权利要求1-5任意一项所述的一种基于片段分析技术验证拷贝数变异的通用试剂盒来验证拷贝数变异的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，获取待测样本的基因组DNA；
步骤二，按照如下配方配制PCR反应体系，所述反应体系的总体积为20μL：






步骤三，设置PCR扩增程序并扩增：94℃2min；98℃10s，60℃1min，68℃1min，循环次数为26-28次；72℃10min；4℃∞；
步骤四，将步骤三的得到的扩增产物进行毛细管电泳，并对电泳数据进行分析，获得对照样本与各待检样本中相应遗传标记的扩增产物峰峰高/峰面积数据；
步骤五，将步骤四测得...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵书民，王丽，
申请(专利权)人：上海晶准生物医药有限公司，赵书民，
类型：发明
国别省市：上海;31