【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱导型AAVRep基因本专利技术涉及包含编码腺相关病毒(AAV)Rep蛋白Rep78和Rep68的核酸的宿主细胞,其中一个或多个维持所述Rep78和Rep68蛋白功能的突变已使内部AAV启动子p19失活。本专利技术还涉及相应的核酸和包含该核酸的载体,以及用于产生AAV的相应方法。最近,基于腺相关病毒(AAV)的载体的基因治疗试验和产品数量迅速增加。AAV载体在基因治疗中的优势是具有良好的安全性,因为此类载体不具有致病性,即与任何疾病无关,转基因的稳定表达以及转化分裂和非分裂细胞的可能性。重组AAV的产生尤其需要表达通常由AAV基因组编码的AAVRep和Cap蛋白,以产生反式供应的重组病毒。此外,必须使用可以衍生自不同的辅助病毒的辅助基因,最常见的是取自腺病毒(AV)的辅助病毒基因,例如E1A、E1B、E2A、E4orf6或VARNA。此外,需要含有目的基因(GOI)的转移载体。当前用于AAV的生产系统主要依赖于以下技术,然而,这些技术具有一些缺点。AAVrep基因的瞬时转染,例如使用三质粒系统,其包括含有目的基因的转移载体,具有腺病毒 ...
【技术保护点】
1.宿主细胞,其包含编码腺相关病毒(AAV)Rep蛋白Rep78和Rep68的核酸,其中维持所述Rep78和Rep68蛋白功能的一个或多个突变已使内部AAV启动子p19失活。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170919 EP 17001562.21.宿主细胞,其包含编码腺相关病毒(AAV)Rep蛋白Rep78和Rep68的核酸,其中维持所述Rep78和Rep68蛋白功能的一个或多个突变已使内部AAV启动子p19失活。
2.如权利要求1所述的宿主细胞,其中所述一个或多个突变在p19启动子SP1-50区、TATA-20区和TATA-35区中的至少一个区域内。
3.如权利要求1或权利要求2所述的宿主细胞,其中所述一个或多个突变是沉默突变。
4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的宿主细胞,其中所述一个或多个突变包括至少一个选自731C>D、732A>C、734A>B、737T>C、746A>G、749C>D、752G>H、758G>A、761G>H、764G>H、818G>A、824G>H、830T>V、833T>C、845T>C、846T>C、8484A>B、848A>G、849A>T、850G>C和851C>D的突变。
5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的宿主细胞,其中所述核酸包含至少一个选自SEQIDNO:1至8、11至14以及34至42的核苷酸序列。
6.如权利要求1至4中任一权利要求所述的宿主细胞,其中所述核酸包含至少一个选自SEQIDNO:15至22、25至28以及43至51的核苷酸序列。
7.如权利要求1或权利要求2所述的宿主细胞,其中所述一个或多个突变是导致...
【专利技术属性】
技术研发人员:克斯汀·海因,妮可·佛斯特,西尔克·维辛,
申请(专利权)人:塞维克制药有限责任公司,
类型:发明
国别省市:德国;DE
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