生产AAV的方法技术

本发明专利技术涉及生产腺相关病毒(AAV)的方法，其包括以下步骤：提供稳定的AAV生产者细胞系，其中编码生产AAV所需的组分的至少某些或所有基因稳定地整合至细胞基因组中；以及在AAV生产步骤期间(即在N步骤期间)在灌注培养中培养所述细胞，其中所述灌注培养包括用新鲜培养基连续替换用过的培养基，并且其中用新鲜培养基连续替换用过的培养基在诱导AAV生产之后继续。续。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产AAV的方法
[0001]本专利技术涉及生产腺相关病毒(AAV)的方法，其包括以下步骤：提供稳定的AAV生产者细胞系，其中编码生产AAV所需的组分的至少某些或所有基因稳定地整合至细胞基因组中；以及在AAV生产步骤期间(即在N步骤期间)在灌注培养中培养所述细胞，其中所述灌注培养包括用新鲜培养基连续替换用过的培养基，并且其中用新鲜培养基连续替换用过的培养基在诱导AAV生产之后继续.
[0002]最近，基于AAV衍生的载体的基因治疗试验和产品的数量已经迅速增加。基因治疗中AAV载体的优点是良好的安全谱，该等载体不是致病的，即不与任何疾病、转基因的长期表达以及转导分裂及非分裂细胞的可能性相关联。然而，将该有前景的研究转化为临床开发的主要挑战是递送大量高质量AAV病毒载体的挑战。
[0003]重组AAV的生产尤其需要表达通常由AAV基因组编码的AAV Rep和Cap蛋白，以生产反式的重组病毒.此外，使用能够源自不同辅助病毒的辅助基因，最常见的是取自腺病毒(AV)的辅助病毒基因，例如E1A、E1B、E2A、E4orf6或VA RNA。此外，需要含有由AAV末端反向重复序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.生产腺相关病毒(AAV)的方法，包括以下步骤：(a)提供稳定的AAV生产者宿主细胞系，其中编码生产AAV所需的组分的至少某些或所有基因稳定地整合至宿主细胞基因组中；(b)在AAV生产步骤期间(即在N步骤期间)在灌注培养中培养所述细胞，其中所述灌注培养包括用新鲜培养基连续替换用过的培养基，并且其中用新鲜培养基连续替换用过的培养基在诱导AAV生产之后继续。2.如权利要求1所述的方法，其中至少以下基因稳定地整合至所述宿主细胞基因组中：编码AAV Rep蛋白Rep78或Rep68的基因；编码AAV Rep蛋白Rep52或Rep40的基因；以及编码腺病毒辅助功能E4orf6和E2A的基因。3.如权利要求1或2所述的方法，其中至少以下基因稳定地整合至所述宿主细胞基因组中：编码AAV Cap蛋白VP1、VP2和VP3的基因；编码AAV Rep蛋白Rep78或Rep68的基因；编码AAV Rep蛋白Rep52或Rep40的基因；编码腺病毒辅助功能E4orf6和E2A的基因；以及由AAV ITRs侧接的目的基因(GOI)。4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述AAV选自AAV血清型1(AAV1)、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVDJ、AAVDJ8、AAVrh10、两种或更多种不同的所述血清型的杂合体以及具有改变AAV血清型向性的突变的所述血清型。5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中编码生产AAV所需的组分的所有基因稳定地整合至所述宿主细胞基因组中。6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中编码生产AAV所需的组分的基因选自编码AAV Cap蛋白VP1、VP2和VP3的基因；编码AAV Rep蛋白Rep78、Rep68、Rep52和Rep40的基因；编码腺病毒辅助功能E4orf6、E2A和VA
‑
RNA的基因；编码Ad5辅助基因E1A和E1B的基因；以及由AAV末端反向重复序列(ITR)侧接的目的基因(GOI)。7.如权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中以下额外的基因稳定地整合至所述宿主细胞基因组中：编码AAV Rep蛋白Rep78和Rep68的基因；编码AAV Rep蛋白Rep52和Rep40的基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱莉安娜，
申请(专利权)人：塞维克制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：