肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了JAK2突变相关抗原短肽及其应用。所述JAK2突变相关抗原短肽的序列如SEQ ID NO:1‑19任一所示。该短肽具有与DC细胞上MHC I分子高度的亲和力，并能有效地刺激、诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)，可用于JAK2基因突变细胞的免疫清除，进而预防JAK2基因突变相关疾病的发生，尤其是JAK2基因突变相关肿瘤疾病的预防；因此本发明专利技术的JAK2抗原短肽具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力，具有良好的临床转化及疾病预防潜力。而且，本发明专利技术的JAK2抗原短肽长度较短，化学合成难度小，可以直接合成得到高纯的产物，应用成本大大降低，同时效果明确，具有很好的应用前景。

Tumor related gene JAK2 mutation related antigen short peptide and its application

【技术实现步骤摘要】
肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽及其应用
本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽及其应用。
技术介绍
Januskinases(JAKs)蛋白家族是一类非受体型酪氨酸激酶，迄今已发现4个成员：分别为JAK1、JAK2、JAK3、TYK2。其中，JAK2基因位于9号染色体短臂2区4带，JAK2由7个JAK同源结构域(JAKhomologydomain,JH)组成，从羧基端至氨基端依次为JH1-JH7。JH1位于羧基端，为具有酪氨酸激酶活性的主要催化结构域，JH2为假激酶结构域，起到调节JH1激酶活性的作用。JAK2通过JAK-STAT信号通路介导Ⅰ型细胞因子的胞内信号转导，包括促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolonytimulatingfactor,GM-CSF)、干细胞因子(stemcellfactor,SCF)、生长激素、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10等多种细胞因子，参与调控细胞的增殖、分化、凋亡及免疫调节等重要的生物学过程，与血液系统细胞的发育及一些血液系统疾病的发生密切相关。因此，维持JAK2的正常对维持细胞的正常功能和预防相关疾病非常重要。利用肿瘤相关抗原短肽诱导建立肿瘤抗原肽特异性CTL，从而获得具有特异性杀伤肿瘤细胞的CTL克隆，被激活的CTL可以杀死相应的靶细胞，发挥免疫监视作用。而该技术的关键前提是获得免疫原性、特异性好、能够诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞的相关抗原短肽。
技术实现思路
本专利技术旨在针对肿瘤相关基因JAK2开发JAK2基因突变相关抗原短肽，所述JAK2基因突变相关抗原短肽具有与DC细胞上MHCI分子高度的亲和力，并能有效地刺激、诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)，可用于JAK2基因突变细胞的免疫清除，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。本专利技术的目的是提供肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽。本专利技术另一目的是提供该短肽在制备用于JAK2突变的DC疫苗中的应用。本专利技术再一目的是提供一种用于JAK2突变的DC疫苗。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：本专利技术人通过T细胞表位预测综合平台NetCTL数据库(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetCTL)在线分析，通过生物信息学预测，发现COSM12600、COSM29300、COSM29302的突变多肽能够与MHC-I类分子结合(JAK2的这几个突变位点在血液系统癌症中检出)。说明该位点是免疫清除JAK2基因突变细胞的重要靶点。而免疫学研究证实，CD8阳性T淋巴细胞CTL发挥细胞免疫的原理为：CTL细胞通过识别与MHC-I分子结合的抗原肽被激活，被激活的CTL可以杀死相应的靶细胞，发挥免疫监视作用。因此，本专利技术通过生物信息学技术预测JAK2突变序列与T淋巴细胞受体(TCR)及MHCI类分子的结合能力，同时分析其表达定位于细胞膜外，设计优化了针对肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽，本专利技术筛选得到的JAK2抗原短肽，其多肽序列优选为SEQIDNO:1-19任一所示，所得JAK2抗原短肽具有与DC细胞上MHCI分子高度的亲和力并能有效地刺激、诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)，抑制肿瘤细胞生长，说明其具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力，具有良好的临床转化及疾病预防前景。因此，以下产品及应用均应在本专利技术的保护范围之内：肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽，序列如SEQIDNO:1-19任一所示。以所述短肽为活性抗原成分与辅剂可制成JAK2突变短肽产品。所述短肽在制备可诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞的产品中的应用。具体地，特异性细胞毒性T淋巴细胞的诱导方法为：使用SEQIDNO:1-19的JAK2突变短肽中的至少一条经抗原提呈细胞与CD8+T细胞共培养，可诱导得到JAK2突变特异性细胞毒性T细胞。所述短肽在制备人体免疫活性调节剂中的应用，具体是作为活性抗原成分调节人体免疫活性。短肽抗原在细胞内经过一系列加工处理，形成特定片段即抗原肽与MHC1类分子完全匹配后提呈到细胞表面被相应T细胞受体(TCR)识别，组成抗原肽-MHC-TCR复合物，从而激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。所述短肽在制备预防JAK2基因突变及相关疾病的产品中的应用，尤其是JAK2基因突变相关肿瘤。所述产品包括疫苗，如DC疫苗或单核细胞疫苗等。抗原肽-MHC-TCR复合物，激活细胞毒性T淋巴细胞，激活的特异性T淋巴细胞能够杀伤携带JAK2突变的异常细胞。特异性细胞毒性T淋巴细胞的诱导方法：使用SEQIDNO:1-19所示JAK2突变短肽中的至少一条经抗原提呈细胞与CD8+T细胞共培养，诱导得到JAK2突变特异性细胞毒性T细胞。基于此，本专利技术还提供一种用于预防JAK2基因突变及相关疾病的DC疫苗或单核细胞疫苗，由本专利技术SEQIDNO:1-19任一所示短肽与树突状细胞或单核细胞加载制成。将SEQIDNO:1-19任一条所示JAK2短肽与树突状细胞(dendriticcell，DC)加载回输，可以作为DC疫苗用于疾病预防，刺激机体产生多肽特异性抗细胞毒性T细胞，进而实现JAK2基因突变相关疾病的预防，尤其是JAK2基因突变相关肿瘤的预防。具体地，疫苗为静脉回输型疫苗。在所述预防JAK2基因突变及相关疾病的DC疫苗的制备方法中，选用vitrogen因子作为佐剂增加DC细胞活性，特异性的抗原肽体外致敏树突状细胞，获得自体树突状细胞制剂，作为静脉回输型肺炎衣原体相关慢病防治疫苗。具体制备方法为：以成熟促进因子，同时以Vitrogan因子作为佐剂，促进DC细胞成熟；然后向诱导成熟的DC细胞培养体系中加入本专利技术的短肽，收集负载有短肽片段的DC细胞，用生理盐水洗涤后，用生理盐水重悬即得到DC疫苗。更具体地，作为一种可选择的方案，所述DC疫苗的制备步骤如下：S1.DC细胞的提取与诱导：S11.获取未成熟DC细胞采集健康捐献者的外周血，通过淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，培养基中，37℃、5％CO2条件下常规培养3小时后，贴壁细胞为未成熟DC细胞；S12.未成熟DC细胞的扩增培养37℃、5％CO2条件下培养5天，期间隔天换液，完成未成熟DC细胞(imDC细胞)的扩增培养；S13.DC细胞的诱导加入成熟促进因子，同时以Vitrogan因子作为佐剂，促进DC细胞成熟；S2.多肽的负载：诱导DC细胞成熟5天后，向培养体系中加入本专利技术的短肽；S3.制备DC疫苗：离心收集负载有短肽片段的DC细胞，用生理盐水洗涤细胞3次，最后将负载有短肽片段的DC细胞用生理盐水重悬，即得到DC疫苗。本专利技术选用特异性的表位多肽，体外致敏自体DC细胞，制备DC细胞制剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽，其特征在于，序列如SEQ ID NO:1-19任一所示。/n

【技术特征摘要】
1.肿瘤相关基因JAK2突变相关抗原短肽，其特征在于，序列如SEQIDNO:1-19任一所示。


2.权利要求1所述短肽在制备可诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞的产品中的应用。


3.权利要求1所述短肽在制备人体免疫活性调节剂中的应用。


4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述短肽是作为活性抗原成分调节人体免疫活性。


5.权利要求1所述短肽在制备预防JAK2基因突变的产品中的应用。


6.权利要求1所述短肽在制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：李许锋，黄燕花，赵乙木，罗夫·辛克纳吉，孙晨，
申请(专利权)人：维塔恩广州医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44