一种TIL细胞的制备方法、试剂盒和试剂套装技术

本说明书实施例公开了一种TIL细胞的制备方法、试剂盒和试剂套装，该方案包括：采用CD3和RN对用于培养TIL细胞的培养瓶进行预处理；基于新鲜的肝素抗凝的患者腹水对淋巴细胞进行分离处理；将分离得到的细胞用配置的培养液进行重悬，转移至预处理后的培养瓶中，并在培养瓶中加入干扰素‑γ，将培养瓶置于恒温培养箱中培养；基于设定时长和/或细胞生长情况，向培养瓶中补加新配置的所述培养液并加入白细胞介素‑2和白细胞介素‑23进行培养；培养预设天数后，收集增殖的TIL细胞。从而，利用CD3和RN联合IL‑2和IL‑23扩增培养，增强了TIL细胞的增殖能力，同时，促进TIL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，显著提高腹水来源体外TIL细胞增殖的效率及其靶向杀伤肿瘤细胞的活性。

A preparation method, kit and kit of TIL cells

【技术实现步骤摘要】
一种TIL细胞的制备方法、试剂盒和试剂套装
本说明书涉及细胞培养领域，尤其涉及一种TIL细胞的制备方法、试剂盒和试剂套装。
技术介绍
世界癌症报告估计，2012年中国癌症发病人数为306.5万，约占全球发病的五分之一；癌症死亡人数为220.5万，约占全球癌症死亡人数的四分之一。我国肿瘤发病率多年持续上升，已成为一个必须高度重视的公共卫生问题乃至社会问题，中国亟须向肿瘤宣战。当前我国癌症发病率、死亡率呈持续增长趋势。更为严峻的是，这种势头并未得到有效的遏制。国家癌症中心肿瘤流行病学研究员代敏介绍，今后20年，我国癌症的发病数和死亡数还将持续上升：根据国际癌症研究署预测，如不采取有效措施，我国癌症发病数和死亡数到2020年将上升至400万人和300万人；2030年将上升至500万人和350万人。我国癌症发病率接近世界水平，但死亡率高于世界水平。欧美白种人最常见的是前列腺癌和乳腺癌等生存率超过80％以上的癌症，而我们国家常见的是肺癌、肝癌、消化道癌症这些生存率不到30％的癌症。第三次全国居民死亡原因调查结果显示，我国城乡居民的肿瘤死亡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种腹水来源TIL细胞的制备方法，其特征在于，包括：/n采用单克隆抗体CD3和重组人纤维连接蛋白RN，对用于培养TIL细胞的培养瓶进行预处理；/n基于新鲜的肝素抗凝的患者腹水对淋巴细胞进行分离处理；/n将分离得到的细胞用配置的培养液进行重悬，转移至预处理后的培养瓶中，并在所述培养瓶中加入干扰素-γ，将所述培养瓶置于恒温培养箱中培养；/n基于设定时长和/或细胞生长情况，向所述培养瓶中补加新配置的所述培养液并加入白细胞介素-2和白细胞介素-23进行培养；/n培养预设天数后，收集增殖的TIL细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种腹水来源TIL细胞的制备方法，其特征在于，包括：
采用单克隆抗体CD3和重组人纤维连接蛋白RN，对用于培养TIL细胞的培养瓶进行预处理；
基于新鲜的肝素抗凝的患者腹水对淋巴细胞进行分离处理；
将分离得到的细胞用配置的培养液进行重悬，转移至预处理后的培养瓶中，并在所述培养瓶中加入干扰素-γ，将所述培养瓶置于恒温培养箱中培养；
基于设定时长和/或细胞生长情况，向所述培养瓶中补加新配置的所述培养液并加入白细胞介素-2和白细胞介素-23进行培养；
培养预设天数后，收集增殖的TIL细胞。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用单克隆抗体CD3和重组人纤维连接蛋白RN，对用于培养TIL细胞的培养瓶进行预处理，具体包括：
将CD3与RN溶于DPBS中制成预处理试剂，并将所述预处理试剂转移至用于培养TIL细胞的培养瓶中；
将盛有预处理试剂的培养瓶于第一预设温度下避光放置第一预设时长。


3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，基于新鲜的肝素抗凝的患者腹水对淋巴细胞进行分离处理，具体包括：
将冷藏保存的淋巴细胞分离液取出置于室温环境；
将新鲜的肝素抗凝的患者腹水置于离心管内，配平并离心后，收集上层液体，灭活处理后，于第二预设温度下放置第二预设时长，再次离心后吸取上层液体备用；
腹水离心后的下层加入DPBS混匀，各取一半沿管壁缓慢加至两管达到室温的淋巴细胞分离液面上，其中，每一管的不同液体界面清晰；将加入腹水混合液的两管淋巴细胞分离液离心处理，得到四层液体，由上至下分别为：第一层...

【专利技术属性】
技术研发人员：张涛，
申请(专利权)人：北京荟科柘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11