同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素的时间分辨荧光试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T‑2毒素的时间分辨荧光试剂盒。它包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的各毒素的单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中：所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条包括衬板，衬板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线下方，个数为3条，检测线上分别上包被各毒素蛋白偶联物。其能在一条试纸条上实现对二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T‑2毒素三种真菌毒素的同步、快速检测。

A time-resolved fluorescence kit for simultaneous detection of Fusarium oxysporenol, deoxynivalenol and T-2 toxin

【技术实现步骤摘要】
同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素的时间分辨荧光试剂盒
本专利技术涉及真菌毒素和农药时间分辨荧光免疫层析试纸条，具体涉及一种同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素混合污染的时间分辨荧光试剂盒及制备方法。
技术介绍
二乙酸镳草镰刀菌烯醇，属单端孢多霉烯毒素，主要由镳草镰刀菌和木贼镰刀菌产生。二乙酸镳草镰刀菌烯醇主要污染谷物和饲料，在饲料中检出率虽没有呕吐毒素高，但它对动物的毒性要高于呕吐毒素。与T-2毒素有相似之处，可损害动物骨髓等造血器官，白细胞持续减少，心肌病变出血等。脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，也被称为呕吐毒素，可在体内蓄积，具有很强的细胞毒性、免疫毒性、胚胎毒性和致畸作用。导致人畜厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳和反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。联合国粮农组织和世界卫生组织已将其确定为最危险的、自然发生的食品污染物之一，被列入国际研究的优先地位。T-2是单端孢霉烯族霉素中毒性最强的一种毒素。以上三种毒素均主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品，对人类健康及畜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：它包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体、含有铕标记的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体、含有铕标记的T-2毒素单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中：所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条包括衬板，衬板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线下方，个数为3条，检测线上分别上包被二乙酸镳草镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白...

【技术特征摘要】
1.同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：它包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体、含有铕标记的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体、含有铕标记的T-2毒素单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中：所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条包括衬板，衬板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线下方，个数为3条，检测线上分别上包被二乙酸镳草镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白偶联物、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白偶联物和T-2毒素-卵清白蛋白偶联物；所述的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体为由保藏编号为CCTCCNO:C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7分泌产生的。


2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将铕标记试剂与二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体按质量比为1:(0.04-0.3)，混匀后，摇床震荡2-4小时，离心移除上清，封闭铕标记试剂表面多余的结合位点，得到目标产物铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体；
所述铕标记的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：铕标记试剂与脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体按质量比为1:(0.04-0.3)，混匀后，摇床震荡2-4小时，离心移除上清，封闭铕标记试剂表面多余的结合位点，得到目标产物铕标记的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体；
所述铕标记的抗T-2毒素单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将铕标记试剂与T-2毒素单克隆抗体按质量比为1:(0.04-0.3)，混匀后，摇床震荡2-4小时，离心移除上清，封闭铕标记试剂表面多余的结合位点，得到目标产物铕标记的抗T-2毒素单克隆抗体。


3.根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：铕标记试剂使用前进行活化，所述的活化为：将铕标记试剂溶解在硼酸缓冲液中，振荡混匀，加入EDC溶液振荡活化15-30min，10000-15000rpm离心，加入硼酸缓冲液振荡混匀，超声；所述封闭用封闭液为含有0.5～1％BSA的硼酸缓冲液。


4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述免疫层析时间分辨荧光试纸条中的吸水垫长15-35mm，宽3-5mm；样品垫长12-18mm，宽2-5mm，相邻各垫的交叠长度为1-3mm；所述免疫层析时间分辨荧光试纸条中检测垫上靠近质控线的的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15-20mm，每相邻两条检测线之间的间距为1.5-4.5mm，靠近质控线的检测线与质控线和检测线的间距为4-10mm；所述的样品反应瓶为1-5mL的卡口瓶。


5.根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述免疫层析时间分辨荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的二乙酸镳草镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.4-0.8ug，每厘米检测线所需的脱氧雪腐镰刀菌烯醇-卵清白蛋白偶联物的包被量为0.8-1.0ug；每厘米检测线所需的T-2毒素-卵清白蛋白偶联物的包被量为0.8-1.0ug；
所述样品反应瓶中铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体冻干品的含量为0.1-0.3ug，所述样品反应瓶中铕标记的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体冻干品的含量为0.2-0.4ug；所述样品反应瓶中铕标记的抗T-2毒素单克隆抗体冻干品的含量为0.2-0.4ug。


6.根据权利要求1所述的时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的IC50小于等于15ppb；
抗T-2毒素单克隆抗体的IC50小于等于2ppb。


7.根据权利要求1所述的时...

【专利技术属性】
技术研发人员：张奇，唐晓倩，白艺珍，张文，李培武，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42