FUT2基因表达产物的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种FUT2基因表达产物的检测试剂盒，其特征在于包括岩藻聚糖结合蛋白修饰的胶体金以及二氧化钛微球。本发明专利技术的FUT2基因表达产物的荧光检测试剂盒能够高灵敏度地检测目标产物。

Detection kit of FUT2 gene expression products

【技术实现步骤摘要】
FUT2基因表达产物的检测试剂盒
本专利技术涉及一种具有高灵敏度的FUT2基因表达产物的检测试剂盒。
技术介绍
新生儿肠道有益菌群的定植和健康菌群结构的建立显著影响其生长发育。研究显示在新生儿肠道中正常菌群的比例分别为：乳酸杆菌1％、双歧杆菌60％—90％、其他细菌10％—40％，其中双歧杆菌(Bifidobacteriumspp.)占据绝对优势地位。双歧杆菌是婴儿肠道中早期定植的生理性厌氧菌，是肠道正常菌群中的优势菌，可以帮助维持婴儿肠道稳态，在婴幼儿成长发育、消化吸收、抗感染、免疫调节等诸多方面起到积极的作用。因此，双歧杆菌在婴儿肠道的定植和多样性对保证婴幼儿健康有着重要意义。《Science》、《Cell》等曾相继发表以“母乳—婴儿肠道菌群—婴儿健康”为主线的重要科研成果，证明了母乳关键成份对婴儿健康的重要作用和相关机制。研究显示母乳中的低聚糖(HMO)是诱导母乳喂养儿肠道双歧杆菌优势发育的主要因素。母乳喂养的婴儿肠道双歧杆菌可利用HMO成份，特别是岩藻寡糖类(Fucosylatedoligosaccharides)作为碳源而生长繁殖。例如，α1,2-fucosylatedHMO成份已被证明能促进B.longumsubsp.、B.bifidumsubsp.和B.breve等双歧杆菌菌株的生长，这些菌株均含有可降解2’-fucosylatedHMO的糖基水解酶95(GH95)或岩藻糖苷酶GH29。因此，HMO成份的变化可能直接影响子代肠道菌群的发展，作为一类重要的益生元，HMO是“母乳中不该被忽视的关键营养”。近年来美国学者研究显示，母亲携带岩藻糖基转移酶2(FUT2)基因的类型(分泌型和非分泌型)不同，所分泌母乳中的HMO成份也有所不同，这直接影响了婴儿肠道双歧杆菌的定植时间和发展。母亲乳腺中的FUT2可通过α-1,2-连接将低聚糖底物岩藻糖基化。由于FUT2基因表达于多种ABO血型人群所分泌的体液中(例如眼泪、唾液、乳汁、等等)，因此被称为“分泌基因(secretorgene)”。该基因的突变可导致其编码的FUT2失活，而FUT2基因单核酸位点多态性(SNP)在全球范围内均被发现。在我国母亲人群的研究中显示，rs601338位点的A/G多态性和rs1047781位点的A/T多态性是控制中国母亲母乳FUT2是否处于活化状态的关键，并且可影响母乳中性寡糖的浓度及α-1,2-岩藻糖寡糖的比例。FUT2基因处于活化状态的人群归类为分泌型人群，而处于失活状态的人群则为非分泌型，这两类母亲的子代在诸多方面也存在差异，例如，由分泌型母亲母乳喂养的婴儿发生腹泻的几率更小；不同的分泌型母亲其早产儿的生存率也存在差异；特别是，不同分泌型母亲在哺乳期所分泌母乳中乳糖岩藻糖基化的过程会发生变化，因此，这些变化可能直接影响到其子代肠道菌群，特别是双歧杆菌的定植和发展，进而影响婴儿健康。本申请人在先的专利技术涉及一种利用荧光定量PCR法检测FUT2基因类型的方法。其包括如下步骤：获取待测样品全血基因组DNA；利用引物及荧光物质进行荧光定量PCR检测：根据PCR检测后熔解曲线的熔解位置判断rs1047781位点的A/T突变情况，进而判断FUT2基因的类型为分泌型或非分泌型。本专利技术所述方法可以特异性的进行中国人群岩藻糖基转移酶基因Fut2单核苷酸位点多态性(SNP)分析，以明确分泌型/非分泌型并预测母乳岩藻糖基化低聚糖(fHMOs)水平及其母乳喂养的新生儿肠道双歧杆菌和乳酸杆菌的丰度[专利文献1]。但是，专利文献1中记载的现有技术存在如下问题，即，需要使用专业的PCR扩增仪，需要专业人员在专业操作环境下进行实施。在需要在临床现场检测并得到检测结果的情况下，无法满足该需求。另外，专利文献2记载了一种用于鉴定母乳缺失岩藻糖基转移酶-2(FUT2)相关聚糖的基质，其包含一系列聚糖结合蛋白诸如凝集素或适于结合2’岩藻糖基聚糖的抗体以及一系列结合母乳蛋白质的阳性对照物。例如，这种基质是多孔的并且允许母乳化合物诸如糖蛋白通过毛细作用力运输。其中，所述聚糖结合蛋白为来自荆豆的植物凝集素。然而，专利文献2的检测试剂盒存在进一步提高灵敏度以及防止产生假阳性的问题。因此，专利文献2所公开的检测方法还存在改进空间。【参考文献】[专利文献1]：CN110016496A[专利文献2]：CN107567588A
技术实现思路
本专利技术涉及FUT2基因表达产物的检测试剂盒，其具有使用方便并且灵敏度高的特点。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术拟采用如下技术方案：本专利技术一方面涉及一种FUT2基因表达产物的检测试剂盒，其特征在于包括岩藻聚糖结合蛋白修饰的胶体金以及二氧化钛微球。本专利技术通过采用二氧化钛微球，有助于降低乳汁样品中的其它杂质的干扰，从而有利于提高采用岩藻聚糖结合蛋白修饰的胶体金进行检测时的灵敏度。虽然本专利技术的原理并不十分清晰，但不愿受理论的约束，推测是由于二氧化钛微球与乳汁中的其它成分结合而不与岩藻聚糖结合。在本专利技术的一个优选实施方式中，所述的二氧化钛微球的平均粒径为3～25μm，优选为5～20μm。当二氧化钛微球的粒径位于上述范围内时，一方面可以确保二氧化钛微球能够自然沉降，另一方面也能够确保二氧化钛微球具有足够的比表面积与乳汁中的其它物质接触。在本专利技术的一个优选实施方式中，TiO2微球不具备单一粒径而具有上述粒径分布。在本专利技术的一个优选实施方式中，本专利技术的试剂盒包括：固相载体、岩藻聚糖结合蛋白修饰的胶体金和TiO2微球，其中所述固相载体包括样品垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸水垫及底板，所述胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于所述结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，所述检测线位于所述承载膜的靠近所述胶体金结合垫一端，所述质控线位于所述承载膜的靠近所述吸水垫一端。本申请中，聚糖结合蛋白，例如为凝集素和抗体等。具体地，所述聚糖结合蛋白为岩藻聚糖结合蛋白，所述凝集素例如为来自荆豆的植物凝集素，所述抗体还可以例如为通过单克隆抗体制备试验获得的抗体。在本专利技术的一个实施方式中，所述的二氧化钛微球为独立包装。由此使得二氧化钛微球能够被施加到乳汁中进行均匀混合，由此有利于提高检测的灵敏度。在本专利技术的另一个实施方式中，可以将TiO2微球喷涂到试剂盒中样品垫的下游侧、且胶体金结合垫的上游侧。更优选的，所述的二氧化钛微球被固定在样品垫上。虽然该实施方式相比于上述二氧化钛微球独立包装的实施方式，存在检测灵敏度有所降低的情况，但是采用本实施方式毫无意外有利于操作的进行。有益效果本专利技术的FUT2基因表达产物的荧光检测试剂盒能够高灵敏度地检测目标产物。具体实施方式在下文中更详细地描述了本专利技术以有助于对本专利技术的理解。实施例制备例1：试剂盒的制备在PVC底板的上表面固定设置作为承载膜的硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的两侧分别设有胶体金结合垫和吸水垫；胶体金结合垫的右端下表面与硝酸纤维素膜的左端上表面固定相连，胶体金结合垫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种FUT2基因表达产物的检测试剂盒，其特征在于包括岩藻聚糖结合蛋白修饰的胶体金以及二氧化钛微球。/n

【技术特征摘要】
1.一种FUT2基因表达产物的检测试剂盒，其特征在于包括岩藻聚糖结合蛋白修饰的胶体金以及二氧化钛微球。


2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其还包括固相载体，其中所述固相载体包括样品垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸水垫及底板，所述胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于所述结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，所述检测线为能够与所述胶体金标记抗体特异性结合的配对抗体形成的涂层，所述质控线位于所述承载膜的靠近所述吸水垫一端。


3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，所述的二氧化钛微球的平均粒径为3～25μm。


4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：马博轩，刘斐童，邓超明，陈桔淳，
申请(专利权)人：合生元广州健康产品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44